沿运动终板进行肌肉内注射以将示踪剂直接导入大鼠运动神经元

摘要

来源：Mohan, R., 等 沿运动终板的肌肉内注射：一种将示踪剂直接导入运动神经元的微创方法。J. Vis. Exp. (2015)

本视频演示了通过在运动终板（MEPs）处进行肌肉内注射，将荧光神经示踪剂靶向递送至运动神经元的方法。该方法概述了大鼠的准备、示踪剂注射以及评估标记运动神经元的神经治疗潜力所涉及的步骤。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 在运动终板处进行肌内注射

1. 使用拉针仪制备玻璃微电极（建议使用带推杆的阶梯式微电极）。在解剖显微镜下，用镊子轻折微电极尖端，使微电极内腔的直径约为0.5 mm。
2. 确保使用的所有外科器械均为 freshly autoclaved，且手术区域保持无菌。
3. 用 Fluoro-Gold（5% 溶于蒸馏水）填充微量移液管。
4. 使用异氟烷（4% 混合于 O₂ 中）对动物进行麻醉诱导₂) 置于诱导室中。检查翻正反射，确认其消失后再将其从诱导室中取出。将鼻罩固定在大鼠的吻部，通入异氟烷（2%浓度，以 O₂用于维持麻醉。轻捏动物的脚趾并轻轻触碰其眼睛，以确认足底退缩反射和角膜反射均消失。
   注意： 也可使用氯胺酮和赛拉嗪的混合物（分别为80 mg/kg和10 mg/kg，腹腔注射）。氯胺酮属于8类管制药品，其采购、使用、储存和处置必须遵守相关管理规定。
5. 在操作过程中涂抹眼用润滑剂，以防止眼睛干燥。
6. 剃除目标肢体的毛发，并用纱布蘸取氯己定和70%酒精交替擦拭剃毛区域三次。将动物转移至手术区域。
7. 将动物置于干净的垫子上，并调整其体位以充分暴露目标肌肉。
8. 使用带齿镊子将目标肌肉表面的皮肤从下方肌肉组织上轻轻抬起，再用手术剪在皮肤上做切口。确保切口足够大，以完全暴露目标肌肉。注意尽量减少对筋膜的损伤。
9. 利用运动终板（MEP）照片，在脑中将MEP区域的位置和形状映射到相应的肌肉上。
   注意： 细毡头标记笔可帮助将照片中的 MEP 区域复制到目标肌肉上。
10. 沿MEP区域全长进行多次注射（对于Fluoro-Gold，每处注射1–2 µl，共3至4处注射即可）。轻轻擦拭肌肉以清除任何渗出液。
11. 用钝头镊子将切开皮肤的两端拉拢，使用外科缝合钉闭合伤口。沿伤口全长浸润0.1 ml布比卡因（0.5%水溶液）（或其他局部麻醉剂）。
12. 关闭麻醉机，并持续监测动物直至其完全从麻醉状态中恢复。
13. 在给予肌肉注射与动物灌注之间，需间隔14天。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Fluoro-Gold	Fluorochrome, LLC	Nil	稀释至 5%
Drummond PCR 微量移液器 1-10 μl	Drummond Scientific	5-000-1001-X10	配带活塞
Isothesia	Provet	ISOF00	1000 mg/g 吸入用异氟烷麻醉剂
Autoclip 9 mm 伤口夹	Texas Scientific Instruments, LLC	205016