琼脂糖包埋电穿孔辅助基因转移在小鼠皮质中间神经元祖细胞中

1. 焦点 DNA 注射<ol style='list-style-type：decimal;'>
2. 制备表达载体的脱氧核糖核酸 （DNA） 混合物：pCAGGs-IRES-GFP（对照载体）+ pCAGGs-hM3D（Gq）-IRES-RFP，每个载体的浓度为 1 μg/μL。加入 1/10 稀释度的快速生溶液（储备液 25 mg/mL）。
用
3. 10 μL DNA 混合物填充拉动玻璃微量移液器（内径 0.5 mm，外径 1 mm），并将少量（在 25-50 nL 范围内）注射到切片的选定区域（内侧神经节隆起或 MGE/尾部神经节或 CGE）（图 1 和图 2）。

图1：用于急性电穿孔实验的代表性端脑切片。（A-C）在三个不同的连续喙尾水平获得远脑切片，用 4'，6-二脒基-2-苯基吲哚 （DAPI） 染色。LGE：外侧神经节隆起;MGE：内侧神经节隆起;CGE：尾神经节隆起。比例尺 = 200 μm。黄色星号表示每个切片中的电穿孔位点。白线标记神经节隆起的边缘。

图 2：实验工作流程的示意图。（A）用适当的构建体电穿孔小鼠脑切片，（B）12小时后，分离修饰的皮质中间神经元（CI）前体，（C）移植到新生小鼠幼崽的皮质中（P0−P2）。为了改变未成熟CI的活性，根据所提出的方案，接受细胞移植的P14幼崽注射CNO或载体四个组成日。（A'）急性小鼠脑切片电穿孔装置的照片。

图3：代表性的成功急性切片电穿孔实验。（A）来自E14.5胚胎大脑的代表性冠状切片，用pCAGGs-IRES-GFP（绿色荧光蛋白）和pCAGGs-hM3D（Gq）-IRES-RFP（红色荧光蛋白）质粒转染CGE并培养12小时。该切片已对 GFP （A、B、C） 和 RFP （A、B、D） 进行了免疫染色。放大图 A 中的方框区域以显示荧光报告基因 （B）、GFP （C） 和仅 RFP （D） 的表达。白线标记神经节隆起的边缘。B-D：相同的照片、不同的通道或两个不同通道的组合。比例尺 = 200 μm （A）、100 μm （B-D）。