乙醇诱导的交感神经节阻滞对犬模型神经再生的影响

摘要

来源： Shionoya, Y., 等. 乙醇诱导的颈交感神经节阻滞在人工神经促进犬下牙槽神经再生中的应用. J. Vis. Exp. (2018)

本视频展示了一种利用可生物降解支架和乙醇诱导的交感神经阻滞来实现下牙槽神经（IAN）再生的犬类模型。该操作包括手术暴露颈交感神经节并注射乙醇以诱导血管扩张。由此增加损伤部位的血流量，结合施万细胞引导的轴突再生，促进神经再生。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 麻醉与皮肤准备

1. 通过肌肉注射给予犬混合物，包含5 mg/kg盐酸氯胺酮和1 mg/kg赛拉嗪，进行麻醉。
2. 使用直径7.5 mm、长度25 cm的气管插管进行插管。
3. 将犬置于右侧卧位，以3.2%七氟烷与氧气（1.0 L/min）维持全身麻醉。
4. 使用加热垫将体温维持在37 °C。
5. 在眼睛前表面涂抹眼用凝胶，以防止角膜擦伤。
6. 使用手术剪仔细剃除手术区域（左侧胸部区域）的毛发，向手术部位喷洒足量酒精溶液，等待至少15秒，重复此操作3次。
7. 术中记录心率和血氧饱和度。

2. 使用聚乙醇酸胶原（PGA-C）管进行下牙槽神经重建：仅重建模型的建立

1. 使用27 G针头将3 mL 1%利多卡因注射至左侧下颌牙龈，作为局部麻醉剂和镇痛剂。
2. 使用15号手术刀片在左侧下颌牙龈做一条5 cm的横向切口，以暴露动物的下颌骨。
3. 利用压电超声振动，通过颏孔后部将下颌骨近端磨削成一个3 cm × 8 mm的矩形区域。
   注意： 振动频率为28 ‒ 32 kHz。
4. 移除下颌骨板的前部（尺寸为3 cm × 8 mm），以暴露左侧下牙槽神经（图1A）。
   注意： 重建部位对应于第一磨牙的根尖位置。
5. 使用手术刀横断下牙槽神经，切除一段10 mm长的神经。
6. 将切断神经的近端和远端残端插入神经导管中，插入深度为2 mm。
7. 在8倍放大倍数的手术显微镜下，使用8-0尼龙缝线将导管缝合至近端和远端神经断端（图1B）。
8. 将骨板复位至下颌骨的原始位置。
9. 使用4-0尼龙缝线关闭切口。
10. 术后一天确认下颌骨板处于正确位置。
    1. 4.10.1 在麻醉状态下进行面部骨的计算机断层扫描（CT）成像。CT参数设置如下：120 kVp，200 mAs，0.5 mm/s，0.5 mm层厚。
       1. 使用5 mg/kg盐酸氯胺酮和1 mg/kg赛拉嗪混合物进行麻醉（图2）。
11. 术后一周内给予氨苄西林（100 mg/天）作为抗生素，对乙酰氨基酚（100 mg/天）作为镇痛剂。

3. 乙醇诱导的颈交感神经节阻滞（CSGB）：重建 + CSGB 模型的建立

1. 按照第2节所述进行IAN重建，并给予一周恢复时间。
2. 使用1.5%七氟烷（氧气流速4 L/min，空气流速6 L/min）对动物进行麻醉。按照第3节所述，剃除并清洁预定手术区域。
3. 使用外科皮肤标记笔在左侧胸部区域画线，标出切口位置（图3，切口线长度为20 cm）。
4. 使用21 G针头在左侧胸部区域注射5 mL 1%利多卡因，作为局部麻醉和镇痛。
5. 使用10号手术刀片切开左侧胸部皮肤。
6. 使用电刀切开脂肪层，暴露肌筋膜。
7. 暴露前锯腹肌和斜角肌。
8. 从前向后剥离前锯腹肌和斜角肌，暴露第二和第三肋骨（图4）。
9. 在第二和第三肋间隙处行左侧胸廓切开术，暴露左侧颈交感神经节（图5）。
10. 在直视下，使用30 G针头向颈交感神经节内注射0.2 mL 99.5%乙醇（图6）。
11. 使用间断的1-0可吸收缝线关闭肋间隙。
12. 使用间断的3-0尼龙缝线缝合皮肤。
13. 术后给予氨苄西林（100 mg/天）作为抗生素，对乙酰氨基酚（100 mg/天）作为镇痛药，持续一周。
14. 在CSGB术后1周，采用红外热成像法测量面部皮肤温度，以确认CSGB效果。

结果

图1：左侧下牙槽神经（IAN）重建前与重建后。 A) 左侧IAN在去骨暴露后的重建前图像。 B) 使用聚乙醇酸-胶原蛋白管重建左侧IAN后的重建后图像。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
外科剪毛剪	Roboz Surgical Instrument Company	RC-5903
一次性手术刀（15号）	Kai medical	219ABBZX00073000
VarioSurg3	Nakanishi	VS3-LED-HPSC, E1133	用于骨组织处理的压电手术设备
4-0 尼龙缝线	Ethicon	8881H
8-0 尼龙缝线	Ethicon	2775G
硫酸依替米星	Nichi-Iko	620005641
一次性手术刀（10号）	Kai medical	219ABBZX00073000
30号针头	Nipro	1134
1-0 可吸收缝线	Ethicon	J347H
3-0 尼龙缝线	Ethicon	8872H
Neo Thermo	NEC Avio	TVS-700	红外热成像