用于神经保护的大鼠模型中的无创肢体缺血预处理

摘要

资料来源：Brandli， A. 远程肢体缺血预处理：啮齿动物的神经保护技术。J. Vis. Exp.（2015年）

该视频演示了一种在大鼠中诱导全身神经保护的非侵入性肢体缺血预处理方案。该过程涉及受控的动脉闭塞和再灌注，触发释放保护因子的细胞应激途径。这些因素增强了对远处器官（如大脑和视网膜）缺血和代谢损伤的抵抗力。

方案

所有涉及动物模型的程序都经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审查。

1. 动物准备

注意事项：要受轻伤的动物需要在远端缺血前一天晚上进行黑暗适应。遭受轻度损伤的动物需要黑暗饲养（12 小时光照：黑暗周期，5 勒克斯）

1. 对清醒或麻醉的啮齿动物进行远程缺血。确保动物具有健康的肌肉张力。通过捏住上后肢来确认有足够的肌肉来确保这一点。RIP诱导的轻伤保护已在6个月以下的久坐大鼠中进行了测试。
2. 远程缺血预处理（RIP）的麻醉制剂
   腹
   1. 腔注射60mg/kg氯胺酮和5mg/kg甲苯噻嗪给大鼠注射。通过伸展腿并捏住脚下侧的皮肤来检查麻醉深度。如果动物被深度麻醉，它就没有反射。在麻醉下使用人工泪液以避免角膜干燥。
   将
   2. 大鼠放在加热垫或循环热水器管上，以保持37.5°C的恒定体温。将大鼠置于俯卧位，下肢的脚垫朝上。右肢或左肢都可能发生远程缺血。

2. 皮肤温度探头的应用

伸展将缺

1. 血的大鼠的腿，并将皮肤探头放在脚垫上。放置皮肤探头以最大限度地接触温度探头和皮肤之间的接触。将探头用力推入脚垫，并用纸胶带固定探头。
2. 通过在温度记录软件上跟踪温度来检查皮肤探头的位置。确保皮肤温度在30-34°C之间并保持稳定。跟踪皮肤温度 1-2 分钟。如果温度不稳定或低于 30 °C，请调整皮肤探头。

3. 远程缺血

1. ：给袖带放气，确保气压阀关闭。伸展腿并松散地环绕上后肢的袖带。用食指和拇指伸展腿部，用下指将松开的袖带保持在适当的位置。
将
2. 麻醉动物的袖带压力提高到160 mmHg，在清醒的动物中，将袖带压力增加到180 mmHg。
   注意：大鼠的麻醉血压范围为120-140 mmHg，有意识时升至160 mmHg。一旦达到正确的压力，就开始计时器和脚部温度记录。
   注意：恒压 2 分钟后，脚部温度应下降 5 °C。
3. 在整个缺血过程中，将袖带的位置保持在动物"膝盖"上方。几分钟后或如果大鼠的肢体在移动，袖带压力将开始下降。
短时间
4. 反复泵送充气球以保持所需的袖带压力 重复短
时间泵送
5. 远程缺血可连续输送 5 至 15 分钟。缺血再灌注方案包括 2 个 5 分钟的缺血期和中间的 5 分钟再灌注。
松
6. 开气压阀，使袖带压力放气。检查缺血方案过程中的温度变化。松开袖带。
7. 继续进行损伤实验。在麻醉作用下的动物需要放在加热垫上。继续监测动物，直到可以走动。动物在步行之前不能返回房屋。

材料