构建多巴胺负载型外泌体载体系统

摘要

来源：Yavuz, B., 等．构建与表征一种基于外泌体的多巴胺递送系统．视频实验杂志 (2022)

本视频展示了多巴胺负载型外泌体的制备方法，重点介绍通过皂苷诱导的膜通透化以增强多巴胺在外泌体内的包封效率。

方案

1. 多巴胺载入外泌体

注意：在完成华通氏胶间充质干细胞（WJ-MSCs）外泌体的表征后，通过孵育法将多巴胺载入外泌体，获得作为药物递送系统的多巴胺负载外泌体。

1. 向外泌体悬液中加入 3 mL 磷酸盐缓冲液（PBS）。使用 0.22 µm 滤器过滤稀释后的悬液以实现无菌化。将 500 µL 无菌外泌体悬液转移至另一离心管中。
2. 用蒸馏水配制多巴胺溶液（0.5 mg/mL）。向含有外泌体的离心管中加入 500 µL 多巴胺溶液。
3. 向步骤 1.2 中的悬液中加入皂苷。将制备好的外泌体-多巴胺悬液在 37 °C 下孵育 24 小时。注意：皂苷浓度不应超过总体积的 0.002%。
4. 将悬液在 90,000 × g 条件下超速离心 70 分钟，以去除游离的多巴胺和皂苷。将分离得到的外泌体储存于 -20 °C，待后续分析使用。注意：为保持制备的多巴胺溶液稳定性，需添加 0.02% 的抗坏血酸。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
0.22 µm 膜过滤器	Aisimo		用于灭菌过程
15 mL Falcon 管	Nest		用于细胞培养步骤
50 mL Falcon 管	Nest		用于细胞培养步骤
离心机	Hitachi	CF16RN	用于外泌体分离步骤
盐酸多巴胺 H8502-10G	Sigma	H8502-10G	用于外泌体多巴胺负载
Optima XPN-100 超速离心机	Beckman Coulter		用于外泌体分离步骤
PBS 片剂	Biomatik	43602	用于 PBS 溶液的配制
皂苷	Sigma	47036-50G-F	在外泌体多巴胺负载过程中，通过将其加入总体溶液中使用。
华通胶间充质干细胞	ATCC