评估测试化合物在小鼠大脑中动脉闭塞模型中的神经保护作用

摘要

来源：Lee, S. E., 等。利用短暂性大脑中动脉闭塞小鼠模型评估甘草根及根茎提取物的神经保护作用。J. Vis. Exp. (2018)

本视频演示了在小鼠大脑中动脉闭塞模型中评估受试化合物神经保护作用的实验步骤。该化合物可进入脑组织，防止神经元死亡，并减小梗死体积，从而证实其相较于未处理小鼠具有神经保护作用。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 大脑中动脉闭塞（MCAO）小鼠模型

1. 使用6周龄、体重22–25 g的雄性C57BL/6小鼠。所有动物均自由摄食标准饲料和饮水，饲养于温度控制在22 ± 1°C、12小时光照/12小时黑暗循环的环境中。
   1. 将小鼠分为每组六只，包括假手术正常组、对照组和 甘草 根与根茎（GRex）处理组
   2. 在立体显微镜下对对照组和GRex处理组进行MCAO手术。
2. 使用70%一氧化二氮（N₂O）和30%氧气（O₂）混合2%异氟烷诱导小鼠吸入麻醉。当小鼠对尾部施加的机械刺激无反应时，视为麻醉充分。使用连接体温计的恒温毯将小鼠体温维持在36.5 ± 0.5 °C。
3. 用剃毛刀剃除小鼠胸部和颈部的所有毛发，再使用脱毛膏进行处理。用聚维酮碘擦洗液与酒精交替消毒手术部位皮肤两次，然后用手术刀在颈部正中做一条长约2 cm的切口。仔细分离左侧颈总动脉（LCCA）、颈外动脉以及颈内动脉分支，使其脱离周围结缔组织。
4. 用手术缝线（4-0 丝线，半结）结扎颈外动脉和颈总动脉，以在手术期间暂时阻断血流进入颈内动脉。
5. 将一根硅胶涂层尼龙缝合线（8-0 单股，11 mm 长）经颈内动脉插入至左侧大脑中动脉（MCA）起始处。调整缝合线硅胶涂层部分的直径至 0.10–0.12 mm 范围内。
6. 使用激光多普勒血流仪测量大脑中动脉（MCA）区域相对脑血流量（rCBF）的下降。当rCBF维持在 < 缺血期间静息状态值的20%。
7. 将插入的线栓固定于血管内2小时，同时阻断大脑中动脉，随后小心撤出线栓以恢复血流，进行22小时再灌注。在五个位置缝合皮肤（3-0丝线，双半结），使每只小鼠从麻醉中苏醒。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
甘草根与根茎	Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea
体视显微镜	Leica	M50
体视显微镜	Nikon	SMZ745
激光多普勒血流仪	Moor Instrument	moorVMS-LDF
带N₂O和O₂流量计系统的麻醉台式支架	Harvard Appratus	34-1352
恒温监测系统	Harvard Appratus	55-7020
小鼠饲料	Doo Yeol Biotech	标准啮齿类动物饲料
异氟烷	JOONGWAE	A02104781
异氟烷	TROIKAA	ISOTROY 100
丝线缝合线（4-0黑色丝线）	AILEE	SK47510
丝线缝合线（3-0白色丝线）	Baekjae	57
尼龙缝合线（8-0单股）	AILEE	NB825
镊子	Fine Science Tools	11241-30
镊子	Fine Science Tools	11254-20
镊子	Fine Science Tools	11260-20
精细镊子	Fine Science Tools	11274-20
手术剪	Fine Science Tools	14001-12
超精细Bonn剪	Fine Science Tools	14084-08
Moria Pascheff-Wolff弹簧剪	Fine Science Tools	15371-92
血管扩张镊	Fine Science Tools	18153-11