实验小鼠模型阴道接种和样品采集的协议念珠菌阴道炎

Summary

在评价中使用的关键技术念珠菌阴道炎在实验动物模型进行了描述。该方法将允许从阴道标本和淋巴细胞的快速收集，排水腰淋巴结。这些技术可能会引起女性下生殖道的其它疾病的小鼠模型。

Abstract

由念珠菌引起的外阴阴道念珠菌病（VVC），是一个较低的女性生殖道，在^他们 18,32-34的生育年龄影响其他健康妇女中约75％的真菌感染。诱发因素包括生殖激素水平的抗生素使用，未经控制的糖尿病和干扰因怀孕，口服避孕药或激素替代^疗法 33,34 。复发性VVC（RVVC），定义为三个或三个以上，每年发作，影响一个单独的5至8％的妇女没有诱发因素^33。

的VVC的实验小鼠模型已经建立，并用于研究的发病机制和 ^粘膜念珠菌3,4,11,16,17,19,21,25,37宿主反应。这种模式也得到了测试体内 ^13,24潜在的抗真菌治疗。该模型要求的动物保持在一个国家选择pseudoestrusimal 念珠菌定植/感染^6,14,23。在这种情况下，将已接种过的动物身上检测到的几个星期到几个月的阴道霉菌负担。过去的研究表明一个非常高的动物模型和人类感染的相对免疫和^生理特性3,16,21之间的平行。差异，但是，包括念珠菌作为阴道正常菌群的缺乏和中性在小鼠的阴道pH值。

在这里，我们展示了一系列的鼠标阴道炎模型的主要方法，包括阴道接种，迅速收集阴道标本，评估阴道的真菌负担，细胞提取/隔离的组织筹备工作。其次是阴道灌洗液真菌的负担，及引流淋巴结白细胞产量的选民代表结果。随着使用麻醉剂，灌洗样本可以在多个时间点收集纵向评价相同的小鼠感染/定植。此外，这种模式要求没有启动感染的免疫抑制剂，使定义的主机条件下的免疫学研究。最后，模型和每种技术的介绍，这里可能引起的方法来研究降低女性生殖道（细菌，寄生虫，病毒）和各自的局部或全身的宿主防御的其他传染病。

Protocol

1。阴道白色念珠菌接种

1. 接种前三天，同时抑制动物暴露腹部，注入100μL芝麻油含有0.1-0.5毫克β-雌二醇皮下注射小腹。前进针约5至10毫米，外侧的皮肤，以尽量减少注射部位的泄漏。
   在这个模型中，由于接近生殖道的最佳皮下注射雌激素在小腹。有效剂量可能会有所不同小鼠品系，年龄或雌激素衍生物。在以往的研究中使用CBA - J（H ^{-κ），C3H/HeN（H -κ），C57BL} / 6（H ^{- B），BALB} / C（H ^{- D），DBA} / 2（ H ² D），SJL 6-8周龄的小鼠（H - ² S），0.1毫克μL发现有效证明阴道壁增厚，减少阴道粘液和增加上皮细胞脱落。以上，在此浓度的雌激素治疗的小鼠表现出一致的阴道念珠菌定植。接种其他菌株和年龄的小鼠，试验研究，建议，以确保修改后的条件下，雌激素的有效性，如果有必要增加雌激素的剂量。
   雌激素的解决方案应准备新鲜，每次注射日。为了确保香油中的雌激素完整的溶解度，彻底的解决方案，使用一个旋涡混合器和热间歇混合，在37 ° C。在整个学习期间每周重复注射。
2. 为了准备接种，添加一个C 的 loopful从最近的亚文化编制成10毫升与0.1％葡萄糖补充Phytone....

Discussion

念珠菌性阴道炎的实验小鼠模型已经建立，在过去的几十年历史念珠菌的黏膜宿主反应，以及用于研究测试抗真菌^{疗法3,4,11,13,16,17,19,21,24} ， ^25,37。协议提出，这里纳入效率和劳动密集程度较低的方法，并出现念珠菌性阴道炎的最优化模型系统描述迄今为止。这些技术使真菌负担和收集阴道标本的快速定量分析。此外，以往的研究测试小鼠的几个haplotypic株（N = 13）和不同时间点接种后发现与 ^念珠菌 2,6,41变异相似的水平，在真菌的负担，并宿主反应阴道定植。因此，这种模式可以适应现有的协议小鼠品系或感染的持续时间没有限制。然而，应该认识到，阴道真菌负担的可变性高的动物给予相同的接种（图6B）之间。有证据支持这一变化的发生是由于不同程度的早期坚持阴道上皮^41。因此，7-10小鼠/组建议用于统计目的。

C.不同菌株之间的阴道霉菌负担的变化也证明念珠菌 ，这表明，并非所有<.......

Materials

试剂名称	公司	目录编号	评论
雌性CBA / J小鼠	查尔斯河实验室	01C38	5-6周龄
白色念珠菌 （3153A）	国家征收的致病真菌，英国	NCPF3153
芝麻油	Sigma - Aldrich公司	S3547	不需要使用前必须预消毒
Β-雌二醇17戊酸	Sigma - Aldrich公司	E1631	0.1 - 0.5mg的香油
Phytone蛋白胨	碧迪	211906	补充0.1％葡萄糖
台盼蓝溶液	Sigma - Aldrich公司	T8154
沙氏葡萄糖琼脂	流式细胞迪克inson	211584
型胶原酶IV	Sigma - Aldrich公司	C5138	0.25％
Dispase	Invitrogen公司	17105-041	1.7 U /毫升
丝网屏幕	雷公藤多甙	060X060S0065W36T	第60号网，不锈钢
汉克斯"平衡盐溶液	Invitrogen公司	24020-117
CytoPrep固定液	Fisher Scientific则	12-570-10	保留涂抹幻灯片
巴氏染色EA - 65	EMD化学品	7054X - 85
巴氏染色OG - 6	EMD化学品	7052X - 85
哈里斯"明矾苏木	EMD化学品	638A - 85
异氟醚	百特医疗用品	NDC 10019-773-60	异氟醚蒸发器，或在一个下拉系统中使用封闭麻醉室