小鼠浅表淋巴结手术

Summary

遵循多时间内相同的鼠标免疫反应的进展，淋巴结可以依次通过手术切除。在这里，我们描述了这种技术可以如何执行。

Abstract

在免疫学领域，了解进展对疫苗，感染或肿瘤的免疫反应，反应之后往往随着时间的推移。同样，淋巴细胞稳态的研究需要时间课程实验。这些研究是在相同的鼠标理想，以减少实验的变异，以及使用的老鼠数量。抽血时间课程实验允许的性能，但它只能提供约外周血淋巴细胞的信息，并提供数量有限的细胞^1-4。由于通过人体循环和居住在淋巴结中的淋巴细胞有不同的特性，重要的是要检查这两个地方。淋巴结顺序切除手术提供了一个独特的机会，后续的免疫反应或免疫细胞膨胀，随着时间的推移相同的鼠标。此外，这种技术的产生，这是足够的PE 1-2X10 ^6个淋巴结细胞之间rform表型特征和/或功能分析。顺序淋巴结手术或淋巴结清扫已成功地应用于我们和其他国家^5-11。在这里，我们描述如何可以通过一个小切口，在皮肤一个anesthetised鼠标删除臂丛和腹股沟淋巴结肿大。由于手术是肤浅的，并迅速完​​成，鼠标恢复速度非常快，愈合好，不会遇到过多的疼痛。每隔一天，有可能收获一个或两个淋巴结允许时间课程实验。因此，该技术是适合学习节点居住淋巴细胞淋巴结的特点，随着时间的推移。这种方法适用于各种实验设计，我们相信，许多实验室将受益于执行顺序淋巴结手术。

Protocol

1。手术前的准备工作

根据加拿大动物护理准则理事会处理小鼠。

1. anesthetise小鼠注射氯胺酮/甲苯​​噻嗪（150/300毫克/千克，IP）或异​​氟醚吸入（2％，1L氧气）。如果可以，异氟醚应该使用，因为它允许为更好地控制麻醉时间和深度。此外，氧管理的同时，支持动物的生理功能。此外，异氟醚直接消除肺部，因此并不需要肝，肾代谢。
2. 注入丁丙诺啡（0.05 - 0.1毫克/千克，SC）或另一种止​​痛药。
3. 适用于鼠标的眼睛上的药膏，手术前，以避免眼睛干涩（如果使用异氟醚）。
4. 确认鼠标是睡着了捏它的爪子，滚它的尾巴。如果鼠标没有反应，进行手术。

2。手术

1. 鼠标放在其副作用。
2. 本地化的地区，在那里你会执行incisioN，这取决于你想收获的法律公告。 （ 图1）。
3. 洗必泰，或另一种消毒剂，适用于该地区。
4. 请用锋利的剪刀（约5毫米），无论是在前肢背部或后肢腹部附近（ 图1）以上的微小切口。
5. 删除松散的头发，用钳子切断。如果你愿意，你可以刮胡子鼠标，然后才作出的切口。但是，一个较长的过程，我们发现，这是没有必要以来，如下所示，它不会改善愈合，减少感染，这都是非....

Discussion

我们已经描述了LN的手术协议，它可以适用于许多实验系统。虽然非常有益的免疫反应或免疫细胞的平衡，这种技术具有一些限制。首先，只有四个LNS可以收获。二，免疫反应的研究必须是系统性的，或发生在腹股沟浅淋巴结或臂丛（皮肤排出）。最后，收获细胞数号法律公告搬迁的质量，技术的限制，这可能有助于实验变异时需要绝对细胞数的影响。然而，对靶细胞的百分比，对自己，可以提供相关和准确的信息，特别是当LN的大小并不各种实验条件各不相同。幸运的是，一旦技术以及掌握，LN的去除率提高质量，从而在每个LN的高度重复性的手机号码。我们相信，尽管这几年的局限性，法律公告手术提供了重要的优势，研究免疫反应的进展。首先，随着时间的推移的免疫反应，可以在一个特定的鼠标跟踪，减少实验的变异性以及使用的老鼠数量。二，如淋巴细胞稳态或免疫反应开始发生在LNS的事件，可直接影响。另一个主要优点是可以从比从延长细胞的特性，允许血液淋巴结恢复，更多的细胞。该技术也适用于其他用途，如转基因小鼠的基因分型或研究通过淋巴结，如B细胞，树突状细胞和巨噬细胞的其他细胞群体居住或贩运。

我们的实验室和其他已使用了好几年这项技术，我们从来没有.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
试剂名称	公司	目录编号	评论
格雷夫精细模式高级钳	哈佛仪器	52-2144	强烈弯曲，10厘米（4英寸），0.8毫米尖
米歇尔剪辑应用和删除钳	哈佛仪器	52-3779	12.5厘米（5）
米歇尔剪辑100	哈佛仪器	52-3746	7.5-1.75毫米
temgesic（盐酸丁丙诺啡）	先灵葆雅
vetalar（盐酸氯胺酮）	boniche动物保健		根据DIN:01989529
rompun（二甲苯胺噻嗪）	拜耳		根据DIN:02169592
异氟醚	雅培		根据DIN:02032384
hypotears眼膏	诺华Ophtalmics		根据DIN:02133288
baxedin（Clorhexidine葡萄糖2％，异丙醇70％）	欧米茄	L0000017	根据DIN:02251477