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使用 bio-rad 总 rna 试剂盒从神经前体细胞中提取 rna

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

使用 Bio-Rad 总 RNA 试剂盒从神经前体细胞中提取 RNA

大家好，我是Josh Sh，加州大学欧文分校Ed Maki博士实验室的一名研究生。我将向大家演示如何使用BioRad的to RNA mini试剂盒从神经前体细胞中提取RNA。我在本实验室使用该试剂盒已有数年时间，始终能够获得稳定且高产量的结果。我们所使用的细胞是来自胚胎皮层的急性分离的Eton半神经前体细胞，通常将它们接种在经组织培养处理的24孔板中，该孔板预先用PD L和层粘连蛋白包被，每孔接种十万个细胞。在开始操作之前，我需要提醒您，应在一个专门用于RNA实验的工作台面上进行操作。首要步骤是确保您的RNA工作台面清洁无污染。正确清洁实验台的方法是使用这种RNA清除剂。它能够彻底清除所有RNA，因为RNA酶会降解你的RNA样本。另外，在进行提取操作时必须始终佩戴手套，因为你的皮肤上含有丰富的RNA酶。因此这是绝对禁止的。好的，我手上的是BioRad总RA小型试剂盒。我已经取出了其中的内容，让我来为大家展示一下它们是什么。首先是经 X 型 DEPC 处理的 PBS，以及含 70% DEPC 处理乙醇的溶液。我们还有总 RNA 裂解液，其中加入了 Dan me 型无水乙醇。第二步是低严谨性洗涤液，其中添加了 100% 乙醇，高严谨性洗涤液、DNA 稀释液、DNA 本身以及总 RNA 洗脱液。将溶液放入70摄氏度的加热块中。我们还需要1.5毫升带盖离心管。这些管子不应含有任何DNA酶或RNA酶，因此请确保使用的管子不含这些物质。我们有两个2毫升的无盖离心管。而最重要的是RNA柱本身，没有它，就无法进行RNA提取。因此，为了组装这些柱子，你需要RNA柱和两个无盖的2 mL离心柱，像这样将它们组装在一起，即可准备使用。好的，最后我们始终需要的是这些细胞。这里的细胞是Eton 1.5神经前体细胞。这些细胞是从胚胎皮层急性分离得到的。它们已在培养基中培养了几天。我已将细胞从37°C的培养箱中取出。本方案专门用于贴壁细胞。这些细胞在经组织培养处理的0.4孔板中培养，孔板已涂覆多聚赖氨酸（PDL）和层粘连蛋白。现在，我将连接真空管，抽吸去除培养基。下一步是加入约 500 µL 的去细胞 SEA PBS。同样，我们需要使用带滤芯的吸头。PBS 的作用主要是洗去培养基。因此，您不希望任何培养基成分进入RNA柱中，干扰RNA提取，否则将无法获得理想的得率。明白吗？接下来快速吸除PBS，因为神经干细胞对PBS敏感。现在我将向每个样本中加入350 µL裂解缓冲液。再次确认，确保在裂解缓冲液中加入了终浓度为β的乙醇。现在我将上下吹打裂解缓冲液15次，以确保细胞充分裂解，从而释放RNA内容物。现在，我将向每个孔中加入70%的去乙醇。加入350微升的70%去乙醇后，我将每个孔吹打10次。每个孔我都上下吹打了10次。接下来，我将移液器的量程设置为超过700微升，因为每个孔的总体积为700微升

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