已对刀锋扫描显微镜的样本制备、成像与分析方案作出更正。尼氏染色方案已从以下内容修改:
2. 标本制备:尼氏染色
- 通过腹腔注射氯胺酮和赛拉嗪使小鼠深度麻醉,随后经心脏灌注50 mL室温磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4),接着灌注250 mL室温10%中性缓冲甲醛溶液(pH 7.4),最后灌注3.0 cc未稀释的印度墨汁。
- 全身灌注生理盐水和固定剂对于清除心血管系统中的血液并固定组织是必要的。灌注印度墨汁对于完全填充心血管系统的血管网络是必要的。
- 随后将所得脑组织通过梯度乙醇(25%–100%)进行脱水,并按照上述1.8–1.9中的方案将其包埋于Araldite塑料中。如果包埋介质为LR White,则遵循上述1.10中的方案。
- 通过腹腔注射氯胺酮和赛拉嗪使小鼠深度麻醉,随后经心脏灌注50 mL室温磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4),接着灌注250 mL室温10%中性缓冲甲醛溶液(pH 7.4),最后灌注3.0 cc未稀释的印度墨汁。
- 全身灌注生理盐水和固定剂对于清除心血管系统中的血液并固定组织是必要的。灌注印度墨汁对于完全填充心血管系统的血管网络是必要的。
- 随后将所得脑组织通过梯度乙醇(25%–100%)进行脱水,并按照上述1.8–1.9中的方案将其包埋于Araldite塑料中。如果包埋介质为LR White,则遵循上述1.10中的方案。
- 通过腹腔注射氯胺酮和赛拉嗪使小鼠深度麻醉,随后经心脏灌注50 mL室温磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4),接着灌注250 mL室温10%中性缓冲甲醛溶液(pH 7.4),最后灌注3.0 cc未稀释的印度墨汁。
- 全身灌注生理盐水和固定剂对于清除心血管系统中的血液并固定组织是必要的。灌注印度墨汁对于完全填充心血管系统的血管网络是必要的。
- 随后将所得脑组织通过梯度乙醇(25%–100%)进行脱水,并按照上述1.8–1.9中的方案将其包埋于Araldite塑料中。如果包埋介质为LR White,则遵循上述1.10中的方案。
至:
2. 标本制备:尼氏染色
- 本方案严格遵循Mayerich等人的方案7。
- 通过腹腔注射氯胺酮和赛拉嗪对小鼠进行深度麻醉,随后经心脏灌注50 mL室温磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4),接着灌注250 mL冷的4%磷酸盐缓冲多聚甲醛(pH 7.4)。
- 然后用100 mL含0.1%硫堇染料的去离子水溶液对小鼠进行灌注,并将尸体置于冰箱(4 °C)中保存24小时。
- 24小时后,将脑组织从颅骨中取出,放入新鲜的0.1%硫堇溶液中,在4 °C下保存7天。此步骤耗时较长,以确保硫堇充分渗透至整块脑组织中。
- 随后通过梯度乙醇溶液对脑组织进行脱色和脱水处理,起始于50%乙醇与水的混合液,逐步过渡至100%乙醇,整个过程持续6周。50%至70%的乙醇溶液需储存在冰箱(4 °C)中,而浓度高于70%的乙醇溶液则在室温下保存。
- 经三次丙酮处理(每次在室温下持续2–4天)后,按照上述1.8–1.9步骤中的方案将脑组织包埋于Araldite树脂中。若使用LR White作为包埋介质,则遵循上述1.10步骤中的方案。