通过腹部超声对麂属鹿科动物进行妊娠诊断

摘要

经腹超声被描述为一种有效且无创的方法，可用于评估赤麂的繁殖状态。这些方法可用于早期妊娠诊断以及评估胎儿的存活能力。该技术的未来应用包括估算妊娠年龄以及研究母体疾病对胎儿发育的影响。

摘要

雷氏麂（Muntiacus reevesi）是一种原产于东南亚的小型鹿科动物，目前正被研究作为朊病毒病传播与发病机制的潜在模型。垂直传播是包括朊病毒病在内的传染病研究者关注的领域之一，这些研究需要高效的方法来评估母体感染对繁殖性能的影响。超声检查是一种在多种动物中广泛用于诊断妊娠和评估胎儿健康状况的成熟技术^1-7，其中包括多种养殖鹿科动物^8-19，但该技术在雷氏麂中尚未见报道。本文描述了经腹超声技术在雌性麂妊娠检测中的应用，并用于评估整个妊娠期间胎儿的生长与发育情况。通过该方法，可在雌雄配对后最早35天识别出妊娠个体，并可安全地定期监测妊娠进展。本研究的未来目标包括建立用于估算妊娠年龄的正常胎儿测量参考值，确定该技术在不同妊娠阶段诊断妊娠的敏感性和特异性，以及识别不同实验条件下胎儿生长与发育的差异。

引言

超声检查是一种在牛¹、羊^2,3、山羊⁴、马⁵、伴侣动物^6,7 以及其他家养动物物种中已有充分描述的妊娠诊断方法。这种成像技术也被确认为在多种圈养鹿科动物中进行妊娠检测和胎儿年龄估算的有价值工具，包括欧洲狍^8-11、马鹿^12-16、北海道梅花鹿¹⁷和驯鹿^18,19。在许多情况下，超声检查的准确率高于其他妊娠检测方法，例如血清孕酮或妊娠相关糖蛋白分析^9,18。此外，对生殖道的超声成像可提供有关胎儿存活状况、妊娠周期以及发育异常识别的额外信息，而这些信息若采用其他方法则难以评估。超声检查在评估繁殖状态方面的实用性表明，该方法应被推广应用至其他正在进行主动繁育计划的物种中。

里氏小麂（Muntiacus reevesi）是一种原产于东南亚的小型鹿科动物²⁰。尽管在其原生地对该物种的生殖周期了解尚不充分，但对英国南部部分地区野生种群的研究已增进了对其繁殖模式的认识²⁰。与大多数鹿科动物不同，里氏小麂似乎全年均可繁殖，未表现出明显的季节性产仔高峰^20-22。雌性小麂通常在210天的妊娠期后产下一只幼崽，并且几乎总能在产后24小时内进入发情期^20-22。若在此产后发情期内未能成功受孕，则母鹿约在24至25天后再次进入发情期²⁰。在圈养条件下，通常通过将雌鹿与一只或多只完整雄鹿同栏饲养来实现繁殖。该方法可获得令人满意的受孕率，且对操作人员的技术要求较低，但确切的交配日期难以甚至无法确定。

由于不同种类的麂属动物二倍体染色体数目差异广泛，且核型多样化程度高，因此常被用于细胞遗传学研究²³。目前，这些动物还被作为朊病毒疾病发病机制与传播的模型进行研究，尤其关注鹿科动物慢性消耗性疾病（CWD）的垂直传播。麂在多种不同研究应用中的重要性表明，应建立更先进的生殖技术，以补充现有的研究手段。具体而言，评估妊娠期的非侵入性方法可能有助于阐明在不同实验条件下繁殖性能以及胎儿生长发育的关键变异。此外，在无法确定配种日期的情况下，建立实时胎儿测量参考标准将对估算妊娠年龄具有潜在价值。以往研究已描述了利用胎儿测量指标（如顶臀长（CRL）、胸深（CD）和头长（HL））来估算鹿科动物妊娠阶段的大致方法^{11-14, 16,17}。此外，其中一些研究还制定了相关指南，说明了特定发育里程碑（如骨骼矿化或胎儿心跳）可被识别的时间点^8-19。尽管这些数据可能有助于指导对麂进行生殖超声分析，但此前研究的其他鹿科物种通常体型更大、妊娠期更长，因而限制了这些研究成果在麂相关研究中的可转化性。

本文所述方案旨在通过雌性小麂的经腹超声检查，实现妊娠的诊断与监测。成功实施该方案有助于早期妊娠的检测以及胎儿生长发育的评估。该技术在生殖相关研究中具有重要的应用价值， 在子宫内 发育或传染性疾病在小型鹿科动物模型中的垂直传播 在圈养繁殖操作中也可能具有临床应用价值。

方案

1. 操作准备

所有所述动物实验程序均已通过科罗拉多州立大学机构动物护理和使用委员会的审查和批准。科罗拉多州立大学为国际实验动物评估和认可委员会（AAALAC）认证的机构。

1. 检查前，使用适当的镇静或麻醉方案使动物 immobilize，以实现放松并便于正确摆位。一名操作人员固定鹿，同时另一人对动物实施镇静。
   注意： 作者发现以下组合对该物种具有有效的镇静作用：肌肉注射（臀肌）布托啡诺（0.45 mg/kg）、阿扎哌隆（0.035 mg/kg）和美托咪定（0.04 mg/kg）。
2. 当母鹿达到可配合操作的镇静水平时，将其置于检查台或V型槽内，采取仰卧位或侧卧位。将头部、颈部和胸部略微抬高（约20–30°），以降低瘤胃内容物反流和误吸的风险，并有助于在操作过程中维持适当的通气。
   注意： 在大多数鹿科动物或其他反刍动物中，腹部超声检查通常在动物站立状态下进行；然而，由于该物种体型较小且行为特性特殊，检查时需要深度镇静，因此维持胸卧位较为困难，可能影响有效的成像操作。将动物置于胸卧位与侧卧位之间的中间体位可能更有利于降低反流和通气不足的风险，若条件允许，应考虑采用此体位。无论采取何种卧位，均须密切监测动物的呼吸情况，一旦发现反流或通气不足，应立即停止检查，并将动物置于胸卧位。
3. 必要时，修剪待检查腹部区域的毛发，以确保探头与皮肤之间实现充分接触。
   注意： 在妊娠早期，可在尾侧腹部靠近乳腺的区域观察到妊娠迹象。该区域的麂通常无毛，因此此时可能无需剃毛。随着胎儿发育，子宫逐渐扩张并移至腹部更靠前的位置，成像前需剪除该区域的毛发。操作时应避免对皮肤造成任何机械性损伤，包括剃须刀片引起的割伤或电动剪毛器导致的热损伤。
4. 将超声设备放置在便于技术人员用其惯用手进行检查的同时，能够轻松观察显示器的位置。输入动物识别信息（名称、识别编号， 等。) 输入系统以自动标记保存的图像和视频片段。

2. 经腹生殖系统超声检查

1. 在尾侧腹部涂抹足量的超声耦合凝胶。
2. 将一个5-10 MHz的凸线阵探头置于尾侧腹部皮肤上，位置紧邻耻骨前缘，然后缓慢向头侧移动，以评估骨盆腔内的结构。扫描尾侧腹部的左右象限，以评估麂类双角子宫的两个子宫角。
   注意：全面的腹部超声检查包括对所有腹部内脏器官的评估，如肝脏、肾脏、脾脏、胃肠道、膀胱以及生殖道。本方案仅详细讨论妊娠检查；然而，在研究过程中很可能遇到其他尾侧腹部器官，因此应熟悉这些结构的正常表现。在此区域最常观察到的器官包括胃肠道的某些节段、膀胱和生殖道。大肠和小肠可通过肠壁特有的分层结构进行识别。肠腔是否明显取决于内容物的类型和数量，内容物可能包括液体、气体、黏液或食物颗粒。除非膀胱充盈尿液，否则可能难以识别，且膀胱壁的分层结构明显不如肠道清晰。除子宫外，雌性麂的生殖道超声检查中也可能发现卵巢。卵巢表现为靠近肾脏尾极的卵圆形结构，其形态可能随动情周期而变化。卵巢皮质内出现多个成熟、充满液体的卵泡提示处于动情期。
   注意：通过旋转和/或"扇动"探头的扫描头，可从横断面或矢状面评估结构。
   1. 如需区分妊娠子宫与膀胱，可通过轻柔按压尾侧腹部手动排空膀胱，或插入导尿管后重复扫描。
      注意：仅当动物处于胸卧位或直立位时才可尝试手动排空膀胱，这有助于腹部内脏保持更自然的解剖位置，并降低对其他结构造成损伤的风险。还可通过评估器官壁厚度来区分子宫与膀胱。中度充盈膀胱的典型壁厚约为1.4 mm²⁴，而作者发现麂类妊娠子宫的肌层较厚，通常测量值为7-8 mm。
      注意：由于缺乏可辨认的胎儿结构，早期妊娠的确诊较为困难，实际上最早的妊娠征象可能仅为尾侧腹部的一个小液性暗区。若此时可见发育中的胚胎，其表现为子宫内一个高回声、卵圆形至无定形的结构（图1）。
3. 根据需要调整深度、频率和增益，以提高图像对比度和细节清晰度。
   注意：较高的频率对应较短的波长，有助于提高图像分辨率。大多数探头可在一定频率范围内工作（例如6-10 MHz）²⁴。可通过超声设备上的扫描控制调节频率，提高频率可获得更清晰的图像。但频率升高会同时降低声波的穿透深度；因此，为观察较深的结构可能需要降低频率，但图像分辨率可能随之下降²⁴。因此，应选择能够达到目标组织深度的最高频率。调节增益控制可改变从组织返回探头的声波信号放大程度，从而影响图像的对比度²⁴。增益应设置为使高回声与低回声组织之间达到最佳对比度的水平，且根据所成像结构的不同，可能需要调整这些参数。

3. 获取胎儿测量数据

注：在许多家养动物物种中，可通过超声检查获得的胎儿测量数据，并结合已建立的参考范围来估算胎龄。最常用的测量指标包括顶臀长（SCRL）、胸深（CD）和头长（HL）¹⁷。尽管目前尚未收集足够的数据以制定可靠的 Reeves' 獐鹿胎龄评估指南，但仍可采集相关测量值，以开始建立这些参考标准。在其他鹿科及反刍动物中，胎儿心率（FHR）已被证实随着妊娠进展呈线性上升，直至某一特定阶段（通常约为妊娠第60天左右），此后心率开始下降¹⁷。胎儿心率可与其他超声观察结果结合用于估算胎龄，但更常被用作评估胎儿存活能力的指标^17,24。在观察到交配行为后35天，即可计算 Reeves' 獐鹿的胎儿心率。

1. 测量尾臀长（SCRL）时，在显示器上找到子宫，并微调探头位置，直至获得整个胎儿的矢状面图像（图2和图3）。冻结图像后，测量颅骨最背侧点至骶骨基底部之间的距离（图2和图3）。
2. 测量胸径（CD）时，获取胎儿的矢状面图像（可使用与测量SCRL相同的图像），并测量胸腔背侧与腹侧之间的距离（图2和图3）。
3. 测量头长（HL）时，使用与SCRL和CD测量相同的胎儿矢状面图像，测量枕骨嵴至鼻根基底部之间的距离（图2和图3）。
4. 计算胎儿心率时，通过观察节律性收缩在胎儿胸腔内识别心脏。在1分钟的时间内计数收缩次数（心跳次数），以计算心率。
   注意：若所使用的超声设备具备多普勒功能，可利用该功能进一步帮助区分心脏搏动与其他非特异性胎儿运动。
5. 确认所有保存的图像和视频片段均包含必要的识别信息，包括动物名称或编号、日期、测量数据以及相应结构的标注。

4. 操作结论与恢复

1. 使用软布或纸巾清除动物腹部残留的所有超声耦合剂。在储存探头前，需将耦合剂从探头上清洁干净。
2. 若采用步骤1.1中所述的镇静方案，应皮下注射0.25 mg/kg的阿替美唑，以逆转美托咪啶的作用。若采用其他镇静方案且存在相应的拮抗剂，则应在操作结束时根据已发表的剂量给药，以加快动物恢复。
3. 将麂置于柔软垫料表面，呈胸卧位，头部略抬高，以降低瘤胃内容物反流和误吸的风险。密切监测动物，直至其完全恢复，能够在围栏内自主行走而无需协助。

结果

采用本文所述方案，可使用微创技术对中国台湾鹿（Reeve's muntjac deer）进行妊娠诊断与监测。作者观察到的最早妊娠检出时间点约为交配行为发生后35天。

在妊娠早期，通过在腹部后侧观察到一个充满液体、呈无回声区域的子宫，即可诊断为妊娠。图1显示子宫内发育中的胚胎表现为一个高回声、卵圆形结构，形态特征较少。随着妊娠进展，胎儿结构逐渐清晰，当观察到胎儿骨骼矿化及胎心搏动时，可作出明确诊断（图2和图3）。

在无法确定确切交配日期的情况下，可通过获取胎儿测量数据并用于建立估算胎龄的参考标准。尽管目前我们尚未在麂类动物中完全建立该系统。直线顶臀长（SCRL）、头长（HL）和头直径（CD）是常用于多种物种估算胎儿年龄的标准胎儿测量指标¹⁷，这些测量值可通过本方案所述的方法从麂类妊娠的超声图像中获得。这三个参数均可从同一张体位正确的矢状面图像中获取（图2和图...

讨论

本方案描述了经腹超声检查在雷氏小麂妊娠诊断中的应用。与其他超声研究一致，合适的设备和技术熟练程度对于成功完成小麂雌性动物的生殖检查至关重要。仔细回顾哺乳动物基本解剖结构、诊断性超声的物理原理以及腹部内脏典型的超声影像表现，有助于减少误诊的发生。此外，选择合适的探头，并熟悉仪器及其扫描仪控制装置，对于获取高质量图像并进行准确解读至关重要。

对于许多经验不足的超声医师而言，成像伪影是导致图像分辨率差和结构评估不准确的常见原因。在兽医腹部超声检查中，皮肤与探头界面处的混响伪影是最常遇到的伪影之一，通过消除两个表面之间的气体，可显著减少该伪影。充分剃除体毛并在皮肤上足量涂抹声学耦合凝胶，通常足以最大限度地降低此类伪影的影响。其他成像伪影的相关讨论可在多种人类和兽医超声诊断学专著中找到，因此本文不再进一步详述；然而，对这些现象具备基本了解，将有助于超声医师更有效地控制它们²⁴。

若进行生殖系统检查，应了解在正常的非妊娠动物中，子宫可能难以观察。在妊娠早期，随着妊娠囊的形成，子宫腔可能表现为低回声至无回声区域，从而变...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
酒石酸布托啡诺（Torbugesic）（0.45 mg/kg）	Fort Dodge Animal Health，爱荷华州，福特 Dodge	NADA 135-780
酒石酸阿扎哌隆（0.035 mg/kg）	ZooPharm
盐酸美托咪定（0.04 mg/kg）	ZooPharm
超声耦合凝胶	Medline，伊利诺伊州，芒德莱因	MDS092005
盐酸阿替美唑（Antisedan）（0.25 mg/kg）	Orion Corporation，芬兰，埃斯波	NADA 141-033
V 型槽（可选）	不适用	不适用	动物可在标准检查台或其他平面上以仰卧位固定，无需使用 V 型槽
电动剪毛器或剃毛刀片（用于去毛）	Oster，田纳西州，麦克明维尔	78005-140
超声系统：Ibex Pro 便携式超声仪	E.I. Medical Imaging，科罗拉多州，洛夫兰	Ibex Pro
5-10 MHz 探头：CL3.8 5-2.5 MHz 60 mm 曲线线性阵列	E.I. Medical Imaging，科罗拉多州，洛夫兰	290420
3 ml 注射器	Covidien	1.18E+09
22 G 针头	Covidien	8.88E+09