我们介绍一种新型聚丙烯酰胺水凝胶，称为羟基-PAAm，可实现细胞外基质蛋白的直接结合，且成本低廉、操作简便。将羟基-PAAm水凝胶与微接触印刷技术结合，可独立调控天然细胞微环境中的多种信号，从而用于研究细胞力学转导。
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摘要
摘要
目前已有充分证据表明，许多细胞功能受到细胞与其细胞外基质（ECM）环境的理化和力学信号相互作用的调控。真核细胞通过细胞表面的机械感受器持续感知其局部微环境，将ECM的物理变化转化为生化信号，并整合这些信号以实现特定的基因表达改变。有趣的是，ECM的理化参数与力学参数可相互耦合，共同调控细胞命运。因此，理解机械转导机制的关键在于解析ECM信号对细胞功能的相对贡献，即实现各种ECM线索的解耦。
本文介绍了一种详细的实验方案，可快速、简便地制备具有生物学相关性的水凝胶，用于独立调控机械转导信号 体外我们通过在聚合过程中引入带有羟基官能团的丙烯酰胺单体，对聚丙烯酰胺水凝胶（PAAm）进行化学修饰，从而克服其固有的非黏附性。由此获得了一种新型PAAm水凝胶，称为羟基化-PAAm（hydroxy-PAAm），可实现任意所需类型细胞外基质（ECM）蛋白的固定化。将羟基化-PAAm水凝胶与微接触印刷技术相结合，能够独立调控单细胞形态、基质刚度、ECM蛋白的种类及其密度。我们提供了一种简单且快速的方法，可在任何生物学实验室中建立，用于研究 体外 细胞机械转导过程。我们通过在内皮细胞上进行实验，验证了这一新型二维平台，实验结果证明了细胞外基质刚度与细胞核之间存在机械耦合。
引言
局部细胞微环境的诸多方面（例如，刚度、孔径大小、蛋白质性质或细胞-配体密度）提供了一组协调的调控信号，控制细胞运动、增殖、分化和基因表达等细胞过程。细胞可感知细胞外环境理化性质的改变，并引发不同的生理后果，包括细胞极性变形、迁移和分化。然而，目前尚不清楚细胞如何将细胞外基质（ECM）的改变转化为细胞内的生化信号。因此，构建可控的 体外 能够重现细胞与其微环境之间相互作用的微环境，用于研究机械转导通路。为解决这一问题，我们近期提出了一种新方法1称为羟基-PAAm水凝胶，可轻松制备二维软基质，从而独立调控重要的机械转导信号：基质刚度、细胞形态与限域性、蛋白质种类以及细胞配体密度。
细胞外基质（ECM）通过形态发生素梯度（化学趋向性）、黏附蛋白梯度（黏附趋向性）以及刚度梯度（硬度趋向性）来调控细胞的各种生物学过程。在过去的几十年中，研究人员开发了多种先进的体外（in vitro）研究平台，用以分离这些细胞外信号，从而解析细胞如何将生化和生物物理特征转化为生理活动2-5。人们已开发出电子束光刻6、光刻技术7、光化学固定化8以及等离子体辅助技术9，以引导活细胞在微图案化基底上的生长。尽管这些技术已取得重要成果，但其中大多数方法难以区分不同信号对细胞行为的独立影响，且需要昂贵的技术设备，仅有少数实验室能够负担。在这些技术中，微接触印刷（microcontact printing, µCP）作为一种稳健且易于实施的方法脱颖而出，可用于构建细胞黏附性微岛结构10。近年来，大量研究工作11-14致力于将µCP技术应用于刚度可调的水凝胶上，以模拟活体组织中广泛存在的不同刚度环境。在这些研究中，聚丙烯酰胺（polyacrylamide, PAAm）因其优势而受到广泛关注15，现已成为细胞生物力学实验中最常用的基于聚合物的基质材料之一。
聚丙烯酰胺（PAAm）表面通常使用异双功能交联剂N-磺基琥珀酰亚胺-6-[4'-叠氮-2'-硝基苯胺基]（sulfo-SANPAH）进行功能化，细胞外基质（ECM）蛋白通过紫外光激活sulfo-SANPAH中的硝基苯基叠氮基团而连接到表面16。另一种技术是将肼与经高碘酸盐严重氧化的蛋白质偶联17。Hynd及其同事提出了一种在仿生水凝胶表面图案化蛋白质和多肽的技术，该技术需要在丙烯酰基链霉亲和素单体存在下进行光聚合18。最近，Tseng 等报道了一种新的微图案化方法19，该方法通过光学石英掩模对PAAm进行深紫外照射，并在添加蛋白质前，需将活化的聚丙烯酸（PA）凝胶与1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）水溶液孵育。尽管这些技术能够生成均一且可重复的蛋白质微图案，但大多数方法存在显著局限性：合成过程耗时较长（例如，透析、冷冻干燥等）、化学试剂成本高昂（例如，透明质酸、sulfo-SANPAH）或需要深紫外辐照。此外，这些技术无法独立调控基底刚度、微图案几何形状、ECM蛋白种类以及细胞配体密度。
考虑到这些局限性，我们开发了一种新型且简单的基于丙烯酰胺的方法，可实现多种蛋白质和生物分子在软性水凝胶上的固定，同时允许独立调控机械转导信号，以解析其在细胞功能中的作用。该方法在丙烯酰胺（PAAm）聚合过程中引入一种带有羟基的商用丙烯酰胺单体，避免了使用强腐蚀性化学试剂处理PAAm水凝胶。这一简单操作无需其他技术条件，即可克服PAAm水凝胶固有的抗粘附特性。
羟基的存在使得羟基化聚丙烯酰胺（hydroxy-PAAm）水凝胶对能够形成氢键相互作用的蛋白质和生物分子具有高亲和性。结合微接触印刷技术（µCP），羟基化聚丙烯酰胺水凝胶可快速构建二维细胞培养平台，实现对基质刚性、细胞外基质（ECM）蛋白类型、细胞配体密度以及黏附局限性的独立调控，该平台有望成为研究力传导机制的有力工具。
本实验方案的目的是提供必要的信息，使研究人员无需材料科学领域的专业知识也能轻松制备羟基-PAAm水凝胶。最终目标是为科研人员提供一种手段，以在细胞和组织水平上提出具有生理相关性的问题，从而增进对参与病理生理机制的机械转导通路的理解。
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方案
1. 活化玻璃盖玻片表面
- 将玻璃圆形盖玻片（直径 25 mm）放入培养皿中，并涂抹 0.1 M NaOH 溶液处理 5 分钟 （建议在化学通风橱中操作）。
- 去除 NaOH 溶液，加入无菌 ddH2O 完全浸没盖玻片，在无菌培养罩内轻轻振荡孵育 20 分钟 。
- 倒掉无菌 ddH2O，并重复步骤 1.2。
- 用无菌镊子取出盖玻片，转移至新的培养皿中，确保活化面朝上放置。
- 用高纯度氮气持续吹扫，干燥盖玻片。
- 在无菌培养罩内，将一层薄薄的 3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基丙烯酸酯（92%）均匀涂抹于盖玻片的活化表面，反应 1 小时。
- 用无菌 ddH2O 对玻璃盖玻片进行充分洗涤，共洗涤 3 次，然后将其浸入新培养皿的无菌 ddH2O 中。
- 用 Parafilm 封住培养皿，置于摇床上轻柔振荡 10 分钟。
- 用尖头无菌镊子从 ddH2O 中取出盖玻片，转移至新的培养皿中，确保活化面朝上。
- 在室温下干燥避尘处保存，并用铝箔包裹以防止灰尘附着。
2. 羟基-PAAm 水凝胶的制备
- 在1.5 ml 离心管中称取65 mg的N-羟乙基丙烯酰胺（HEA）。必须现配新鲜的HEA溶液。
- 向HEA中加入1 ml 50 mM HEPES缓冲液，使用涡旋振荡器混合，直至HEA完全溶解。
- 加入400 µl 40% w/w的丙烯酰胺HEPES溶液，以及所需体积的2% w/w的HEPES双丙烯酰胺溶液（见表1），以达到目标水凝胶刚度。用50 mM HEPES缓冲液定容至终体积5 ml。
- 使用涡旋振荡器混匀溶液，并在真空腔中脱气20 min ，以降低溶液中的氧气浓度，防止羟基化聚丙烯酰胺（hydroxy-PAAm）发生聚合。
- 在无菌操作台中，使用孔径为0.2 µm的滤器对脱气后的溶液进行过滤，以实现无菌处理。
- 将圆形玻璃盖玻片（直径22 mm）置于紫外/臭氧清洗仪中活化7 min。
- 配制100 µl 10%过硫酸铵（APS）溶液，即10 mg APS溶于100 µl ddH2O中。必须现配新鲜的APS溶液。
- 向已灭菌的羟基化聚丙烯酰胺（hydroxy-PAAm）溶液（步骤2.5）中加入2.5 µl 四甲基乙二胺（TEMED）和25 µl APS溶液，以启动聚合反应。在无菌条件下，通过连续三次移液操作混匀溶液，避免引入气泡。
- 在无菌操作台中，取25 µl 羟基化聚丙烯酰胺（hydroxy-PAAm）溶液滴加于25 mm盖玻片（来自步骤1.9）上，立即在其上放置已准备好的22 mm玻璃盖玻片（步骤2.6制备），轻压使溶液铺展。使用无菌镊子将22 mm玻璃盖玻片居中，并排除所有气泡。
- 在室温下静置15 min，使羟基化聚丙烯酰胺（hydroxy-PAAm）水凝胶完成聚合。手动倒置离心管中剩余的hydroxy-PAAm溶液，以观察聚合进程是否完成。
- 将带有水凝胶的盖玻片完全浸入无菌ddH2O中，用刀片边缘小心插入22 mm玻璃盖玻片与羟基化聚丙烯酰胺（hydroxy-PAAm）水凝胶层之间，轻轻分离盖玻片。
- 用无菌PBS洗涤羟基化聚丙烯酰胺（hydroxy-PAAm）水凝胶（共更换PBS三次），并将凝胶保持完全浸没在无菌PBS中以维持水合状态。
- 将羟基化聚丙烯酰胺（hydroxy-PAAm）水凝胶置于4 °C的无菌PBS中保存，最多可保存3天。
3. 聚二甲基硅氧烷（PDMS）微模板的制备
注意：在开始 PDMS 微模版的制备之前，需要先制备硅胶母版。硅胶母版的微加工可通过光刻技术完成，但该技术需要专用设备和专业培训。建议与纳米加工平台合作制备硅胶母版。或者，可联系可根据需求定制微结构硅胶母版的公司。需要注意的是，硅胶母版只需制备一次即可，因为微结构硅胶母版可无限次用于制备弹性印章。
- 在塑料烧杯中按10:1的比例混合PDMS和固化剂，使用移液管充分搅拌10分钟。
- 将PDMS混合物置于真空环境中脱气，以去除步骤3.1中产生的气泡。
- 将微结构硅模板放入培养皿中，并在其表面浇铸一层10 mm厚的脱气PDMS混合物，确保不产生气泡。
- 在60 °C的烘箱中使PDMS固化2小时。
- 在无尘环境中，用手术刀将PDMS层剥离，并切割出1 cm2的微图案印章。
- 使用镊子将PDMS微图案印章图案面朝上放置于培养皿中。
4. 羟基-PAAm水凝胶的微图形化
- 将PDMS微图案印章置于乙醇/水（50/50）溶液中，超声处理15分钟。
- 用氮气流吹干印模，并将图案面朝上放入紫外/臭氧清洗仪（λ < 200 nm）下孵育 7 分钟。
- 在无菌操作台中，放置一个150-µl 目标蛋白溶液的一滴（例如，100 µg/ml PBS 或 25 µg/ml 的层粘连蛋白 PBS中的纤连蛋白）滴加到1厘米微结构表面2 PDMS印章
- 可选：调整蛋白溶液的浓度以调节细胞-配体密度。
- 用移液枪的无菌枪头将蛋白溶液从印模中心向各个角落移动，使其均匀覆盖整个印模表面。
- 让蛋白质溶液在PDMS印章上吸附60分钟 在无菌操作台内进行操作。关闭灯光以避免蛋白质损伤。
- 在无菌操作台中，将羟基-PAAm包被的盖玻片（来自步骤2.13）转移至培养皿中。
- 在无菌条件下，用低氮气流吹去羟基化聚丙烯酰胺基底表面多余的 PBS。一旦观察到凝胶表面无残留水分，立即停止操作。此步骤中不应将凝胶完全干燥。
- 用高纯度氮气稳定气流小心吹干PDMS印章的结构化表面。
- 用无菌敷料镊夹住包被有蛋白的印模，将印模的结构面与干燥的水凝胶表面接触。用镊子尖端在PDMS印模顶部施加短暂的点状压力，以确保印模的微结构与水凝胶表面充分接触。
- 在室温下将PDMS印章置于水凝胶表面1小时。
- 用敷料镊子轻轻将PDMS印章从羟基-PAAm水凝胶上取下，并按照步骤4.1清洁印章。
- 在无菌条件下，用磷酸盐缓冲液（PBS，pH = 7.4）分三次、每次10分钟充分洗涤 stamped 羟基化聚丙烯酰胺水凝胶 每次交换
- 可选：可通过执行步骤 4.5 至 4.11，在羟基-PAAm 表面添加其他细胞外基质蛋白的微图案。
- 用5 mg/ml的无菌BSA溶液对非打印区域进行封闭 在4 °C下，于摇板上轻轻振荡过夜。
- 在无菌条件下，用 PBS（pH = 7.4）洗涤 3 次，每次 10 分钟 每次更换后， stamped 羟基-PAAm 水凝胶可在 4 °C 下保存长达一周。
5. 细胞在微图案化羟基-PAAm水凝胶上的沉积
- 在接种细胞前，将盖玻片置于细胞培养基中孵育 30–45 分钟。
- 用 37 °C 的无菌 PBS 洗涤在 75 cm2 培养瓶中培养的贴壁细胞，并加入 3 ml 胰蛋白酶-EDTA 或 accutase，作用 10 分钟以消化细胞。
- 将适量预热的、适用于您所用细胞系的完全培养基加入含有已脱落细胞的培养瓶中，然后将细胞悬液在 650 × g 条件下离心 3 分钟 。
- 用移液器吸除上清液，并将细胞重悬于完全培养基中，浓度为 15,000–20,000 个细胞/ml。
- 取 4 ml 细胞悬液加入微图案化盖玻片（来自步骤 5.1）中，并将接种了细胞的盖玻片置于 37 °C、5% 湿度的培养箱中孵育 1–2 小时。
- 轻轻吸除未贴壁的细胞，更换培养基，将已贴壁的细胞重新放回培养箱，使其充分铺展（3–6 小时，具体时间取决于细胞类型）。
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结果
图1A 展示了丙烯酰胺（AAm）和双丙烯酰胺（bis-AAm）与含有伯羟基的N-羟乙基丙烯酰胺（HEA）单体通过随机自由基共聚反应，形成带有嵌入式羟基的亲水性聚丙烯酰胺网络（羟基化PAAm）。在本实验方案中，需将65 mg的HEA溶解于1 ml HEPES缓冲液中。由于HEA的密度约为1，我们假设最终工作体积为1,065 µl（HEA + HEPES）。如表1所示，将1,065 µl的上述溶液加入400 µl AAm和50 µl bisAAm中，总体积为1,515 µl。因此，需加入3,485 µl的HEPES缓冲液，以将溶液总体积调节至5 ml。如步骤2.6所述，22 mm玻璃盖玻片表面需在紫外/臭氧（UV/Ozone）中活化7分钟，以便在不损伤水凝胶表面的前提下将其去除。事实上，经过UV/Ozone处理后，玻璃表面亲水性增强，因此可通过将整个体系浸入水中实现轻松分离。此外，UV/Ozone处理还可防止与水凝胶表面直接接触的22 mm盖玻片发生化学污染。该技术可获得固定于25 mm直径玻璃盖玻片上的平整圆形聚丙烯酰胺表面（直径22 mm）。
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讨论
现代细胞生物学中的许多体外（in vitro）观察实验通常是在刚性玻璃盖玻片上进行的，这些盖玻片通常涂有一层含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）序列的细胞外基质（ECM）蛋白或合成肽。然而，这类基本培养基质无法重现ECM完整的理化复杂性，因此不能为研究细胞力学转导过程提供准确的模型。为解决这一问题，我们提出一种简单的方法，可在二维水凝胶上以任意数量和种类固定ECM蛋白。该方法可独立调控影响力学转导的关键因素，例如基质刚度、细胞形态与空间限制，以及细胞-配体密度。此外，羟基化聚丙烯酰胺（hydroxy-PAAm）水凝胶克服了现有功能化方法的一个主要局限，即难以固定并控制多种ECM蛋白的空间分布。由于hydroxy-PAAm水凝胶对生物分子具有高亲和力，因此可通过连续微图案化技术，在同一表面上精确调控多种ECM蛋白的空间分布，且该过程不受基质刚度影响，也无需额外设备。
我们提出一种基于在丙烯酰胺水凝胶中引入羟基的新方法，以克服其固有的非黏附特性，同时对成本和专业技术要求极低。与现有的在水凝胶上进行蛋白图案化技术相比，羟基化聚丙烯酰胺（hydroxy-PAAm）方法避...
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披露
未声明任何利益冲突。
致谢
本工作由比利时国家科学研究中心（F.R.S.-FNRS）通过“MIS 共聚焦显微镜”项目、“研究人员启动基金”（Crédit aux Chercheurs）以及“纳米运动性 FRFC 项目”（编号：2.4622.11）提供资助。T.G. 的博士研究生奖学金由农业与工业研究培训基金会（FRIA）支持。作者衷心感谢 Sylvain Desprez 在力学表征方面的贡献，以及 Géraldine Circelli 在共聚焦成像方面的协助。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 紫外/臭氧光反应器 | Ultra-Violet Products | 型号 PR-100 | |
| 摇床 | IKAcWerke | 型号 KS 130 Basic | |
| 涡旋振荡器 | Scientific Industries | 型号 Vortex Genie2 | |
| 真空脱气室 | Applied Vacuum Engineering | DP- 8-KIT | |
| Parafilm 封口膜 | Sigma-Aldrich | P7793-1EA | |
| 细尖不锈钢镊子 | Sigma-Aldrich | Z225304-1EA | |
| 敷料组织镊 | Sigma-Aldrich | F4392-1EA | |
| 聚苯乙烯培养皿 | Sigma-Aldrich | P5731-500EA | |
| 铝箔，厚度 0.5 mm | Sigma-Aldrich | 266574-3.4G | |
| Isopore 膜滤器（孔径 0.2 µm） | Millipore | GTTP 滤器编号 | |
| 圆形玻璃盖玻片（直径 22 mm） | Neuvitro | GG-22 | |
| 圆形玻璃盖玻片（直径 25 mm） | Neuvitro | GG-25 | |
| 可调体积微量移液器 | Sigma-Aldrich | Z114820 | |
| 蛋白微量离心管 | Sigma-Aldrich | Z666505-100EA | |
| 手术刀柄 | Sigma-Aldrich | S2896-1EA | |
| 手术刀片 | Sigma-Aldrich | S2771-100EA | |
| 细胞培养瓶（75 cm2） | Sigma-Aldrich | CLS430641 | |
| 超声波清洗槽，实心（不锈钢） | Sigma-Aldrich | Z613983-1EA | |
| 聚二甲基硅氧烷 | Dow Corning | Sylgard 184 硅橡胶弹性体试剂盒 | |
| 丙烯酰胺（粉末） | Sigma-Aldrich | A3553 | |
| N,N’-亚甲基双丙烯酰胺 | Sigma-Aldrich | 146072 | |
| N-羟乙基丙烯酰胺 | Sigma-Aldrich | 697931 | |
| N,N,N’,N’-四甲基乙二胺 | Sigma-Aldrich | T9281 | |
| 过硫酸铵（APS） | Sigma-Aldrich | A3678 | |
| 3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基丙烯酸酯 | Sigma-Aldrich | 1805 | |
| 人血浆纤连蛋白 | Millipore | FC010 | |
| 来自 EHS 的层粘连蛋白 | Sigma-Aldrich | L2020 | |
| 氢氧化钠 | Sigma-Aldrich | 221465-25G | |
| 双蒸水（ddH2O） | |||
| 内皮细胞生长培养基 | Cells Applications | 211K-500 | |
| 人脐静脉内皮细胞（HUVEC） | Invitrogen | C-003-5C | |
| Accutase | PAA laboratories | L11-007 | |
| HEPES 缓冲液，1 M 水溶液（H2O） | Sigma-Aldrich | 83264-500ML-F | |
| 抗生素-抗真菌剂 | PAA laboratories | P11-002 | |
| 磷酸盐缓冲液 | PAA laboratories | H15-002 | |
| Alexa Fluor 488 标记鬼笔环肽 | Molecular Probes | A12379 | |
| 小鼠来源的抗连环蛋白抗体 | Sigma-Aldrich | V9131 | |
| 山羊抗小鼠抗体-四甲基罗丹明 | Molecular Probes | T-2762 | |
| 抗纤连蛋白抗体（兔源） | Sigma-Aldrich | F3648 | |
| 链霉亲和素 | Sigma-Aldrich | 41469 | |
| 抗层粘连蛋白抗体（兔源） | Sigma-Aldrich | L9393 | |
| 抗兔 IgG-FITC | Sigma-Aldrich | F7512 | |
| 胰蛋白酶-EDTA 溶液 | Sigma-Aldrich | T3924-100ML | |
| 无水乙醇 | Sigma-Aldrich | 459844-2.5L |
参考文献
- Grevesse, T., Versaevel, M., Circelli, G., Desprez, S., Gabriele, S. A simple route to functionalize polyacrylamide gels for the independent tuning of mechanotransduction cues. Lab Chip. 13 (5), 777-780 (2013).
- Gabriele, S., Benoliel, A. M., Bongrand, P., Théodoly, O. Microfluidic investigation reveals distinct roles for actin cytoskeleton and myosin II activity in capillary leukocyte trafficking. Biophys. J. 96 (10), 4308-4318 (2009).
- Atmanli, A., Domian, I. J. Generation of aligned functional myocardial tissue through microcontact printing. J. Vis. Exp. (73), e50288(2013).
- Gabriele, S., Versaevel, M., Preira, P., Théodoly, O. A simple microfluidic method to select, isolate, and manipulate single-cells in mechanical and biochemical assays. Lab Chip. 10 (11), 1459-1467 (2010).
- Le Berre, M., Aubertin, J., Piel, M. Fine control of nuclear confinement identifies a threshold deformation leading to lamina rupture and induction of specific genes. Integr. Biol. 4 (11), 1406-1414 (2012).
- Rundqvist, J., et al. High fidelity functional patterns of an extracellular matrix protein by electron beam-based inactivation. J. Am. Chem. Soc. 129 (59), 59-67 (2006).
- Sorribas, H., Padeste, C., Tiefenauer, L. Photolithographic generation of proteins micropatterns for neuron culture applications. Biomaterials. 23 (3), 893-900 (2002).
- Holden, M. A., Cremer, P. S. Light activated patterning of dye-labeled molecules on surfaces. J. Am. Chem. Soc. 125 (27), 8074-8075 (2003).
- Cheng, Q., Li, S., Komvopoulos, K. Plasma-assisted surface chemical patterning for single-cell culture. Biomaterials. 30 (25), 4203-4210 (2009).
- Kumar, A., Whitesides, G. M. Features of gold having micrometer to centimeter dimensions can be formed through a combination of stamping with an elastomeric stamp and an alkanethiol "ink" followed by chemical etching. Appl. Phys. Lett. 63 (14), 2002-2004 (1993).
- Tseng, Q., et al. New micropatterning method of soft substrates reveals that different tumorigenic signals can promote or reduce cell contraction levels. Lab Chip. 11, 2231-2240 (2011).
- Palchesko, R. N., Zhang, L., Sun, Y., Feinberg, A. W. Development of Polydimethylsiloxane Substrates with Tunable Elastic Modulus to Study Cell Mechanobiology in Muscle and Nerve. PLoS ONE. 7, e51499(2012).
- Herrick, W. G., Nguyen, T. V., Sleiman, M., McRae, S., Emrick, T. S., Peyton, S. R. PEG-Phosphorylcholine hydrogels as tunable and versatile platforms for mechanobiology. Biomacromolecules. 14, 2294-2304 (2013).
- Versaevel, M., Grevesse, T., Riaz, M., Lantoine, J., Gabriele, S. Micropatterning hydroxy-PAAm hydrogels and sylgard 184 silicone elastomers with tunable elastic moduli. Methods in Cell Biology. 121, 33-48 (2014).
- Kandow, C. E., Georges, P. C., Janmey, P. A., Beningo, K. A. Polyacrylamide hydrogels for cell mechanics: steps towards optimization and alternative uses. Methods Cell Biol. 83, 29-46 (2007).
- Hemphill, M. A., et al. A possible role for integrin signaling in diffuse axonal injury. PLoS ONE. 6 (7), e22899(2011).
- Damljanovic, V., Lagerholm, B. C., Jacobson, K. Bulk and micropatterned conjugation of extracellular matrix proteins to characterized polyacrylamide substrates for cell mechanotransduction assays. BioTechniques. 39 (6), 847-851 (2005).
- Hynd, M. R., Frampton, J. P., Dowell-Mesfin, N., Turner, J. N., Shain, W. Directed cell growth on protein-functionalized hydrogel surfaces. Journal of Neuroscience Methods. 162, 255-263 (2007).
- Tseng, Q., et al. new micropatterning method of soft substrates reveals that different tumorigenic signals can promote or reduce cell contraction levels. Lab Chip. 11 (13), 2231-2240 (2011).
- Versaevel, M., Grevesse, T., Gabriele, S. Spatial coordination between cell and nuclear shape within micropatterned endothelial cells. Nat. Commun. 3, 671(2012).
- Versaevel, M., Grevesse, T., Riaz, M., Gabriele, S. Cell Confinement: Putting the squeeze on the nucleus. Soft Matter. 9, 6665-6676 (2013).
- Trappman, B., Chen, C. S. How cells sense extracellular matrix stiffness: a material's perspective. Current Opinion in Biotechnology. 24, 1-6 (2013).
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