我们介绍了在地面投影迷宫上对大鼠进行完全自动化认知任务的慢性电生理记录训练的实验方案。
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我们介绍了在地面投影迷宫上对大鼠进行完全自动化认知任务的慢性电生理记录训练的实验方案。
用于灵长类动物研究学习和记忆机制的神经心理学任务通常是视觉引导的认知任务。我们为大鼠开发了基于地面投影迷宫1,2 的视觉认知任务,这些任务针对大鼠的视觉能力进行了优化,从而能够更有效地将实验结果与其他物种进行比较。
为了研究学习与记忆的神经相关机制,我们已将电生理记录整合到地板投影迷宫(Floor Projection Maze)的完全自动化认知任务中1,2。行为学软件与动物追踪系统相连接,可精确监控动物行为,并精准控制图像呈现和奖赏条件,从而更好地训练动物。与in vivo电生理记录系统的整合,使得能够在特定认知任务的选定时段内,检测神经活动与行为之间的相关性。
我们描述了一种模型系统的实验方案,该系统结合了对啮齿类动物的自动化视觉信息呈现、颅内奖赏以及电生理学方法。我们的模型系统提供了一套复杂的工具,可作为其他认知任务的框架,以更好地分离和识别参与特定认知过程的具体机制。
视觉任务常用于人类和猴类研究,以探究学习和记忆的潜在机制。然而,啮齿类动物模型更易于研究人员开展规模更大、控制更严格的实验,并且具有允许采用更侵入性电生理技术的额外优势。结合其他方法(如基因操作),对自由活动大鼠进行电生理记录,为精确定位认知过程背后的机制和神经环路提供了一个有用的模型。灵长类动物的视觉任务要求受试者将视线朝向显示器上的视觉刺激,而大鼠的任务则要求受试者与环境进行互动。地板投影迷宫利用了大鼠在主动探索环境的同时关注视觉刺激的自然倾向。
使用专为啮齿类动物设计的触摸屏装置进行的认知任务,使得从啮齿类动物模型到人类的研究结果具有更好的可转化性3。触摸屏任务通常在一种实验箱内进行,二维视觉刺激以垂直方式呈现在箱壁上3-7。这些触摸屏任务要求实验动物直立身体朝向目标视觉刺激,并切断红外光电束或按压压力垫以记录其反应。然而,解剖学和行为学证据表明,大鼠在引导行为时对下半视野的视觉信息处理更为有效8-10。本实验室开发了利用地板投影迷宫2的认知任务,其中二维视觉刺激通过背投方式呈现在测试 arena 的地面上。与触摸屏装置相比,在地板投影迷宫中,可以在较大的开放 arena 中追踪大鼠执行任务时的行为。因此,除了视觉信息和决策相关的神经活动外,还可获得记录神经活动中所包含的空间信息。
我们向内侧前脑束(MFB)传递颅内刺激(ICS)作为奖励11。与食物和饮料奖励相比,这种奖励方式具有优势。即使在食物剥夺的大鼠中,食物和饮料奖励也可能导致饱足感,限制动物执行的试验次数,并可能延缓训练进程。ICS提供即时奖励,可对任务表现给予即时反馈。这种即时奖励有助于更快地塑造行为并促进习得,显著缩短训练方案的持续时间。此外,单次实验中可完成更多试验次数,增加所收集数据的量,从而获得更可靠的与任务相关行为样本。
利用地面投影迷宫,我们将描述一种用于塑造大鼠行为以执行复杂认知任务的通用实验方案。该通用方案为训练大鼠完成多种当前用于记录注意力和视觉辨别神经相关性的任务提供了框架1。因此,地面投影迷宫针对大鼠的视觉能力进行了优化,能够实现与人类及非人灵长类动物视觉任务之间更有力的比较。
所有操作均符合布朗大学机构动物护理和使用委员会的指导方针。
1. 系统概述
视频追踪系统与行为控制系统协同工作,以监测大鼠在特定任务中的表现,评估目标行为,控制刺激呈现,并根据大鼠的表现给予奖励。在体电生理记录系统则用于采集神经数据,以进行事件相关分析。(图1A)。
2. 动物准备
3. 行为塑造:一般塑造包括三个阶段:早期、中期和晚期塑造(图2)。
注意:早期和中期训练的目的是训练大鼠在每次试验中于准备区域保持静止的“准备姿势”,并在一个训练阶段内完成大量试验。通过半自动化行为训练,使训练过程能够适应每只大鼠个体的学习速度。当大鼠能够稳定维持成功的“准备姿势”后,即可进入任务特异性训练阶段(后期训练),目标是将大鼠转入完全自动化的实验流程,以实现精确且无偏倚的行为控制(图2)。
一般塑形步骤的目标是使大鼠适应测试环境,训练大鼠在目标视觉刺激呈现期间保持静止的“准备位置”,并学会向正确视觉刺激的位置移动。在适应测试房间、测试 arena 以及连接线缆后,早期塑形通常需要进行 100–150 次试验,直到大鼠能够在 arena 的东侧和西侧之间交替活动。在早期塑形阶段,大鼠通常会穿过 arena 中央的准备区域,并将大部分时间用于探索 arena 的边缘区域(图 4A)。处于中期塑形阶段的大鼠逐渐学会在准备区域内保持静止的“准备位置”,此阶段通常需要 600–700 次试验。此时,动物的运动路径呈现出从准备区域到图像区域的刻板环路,探索迷宫边缘的时间显著减少。然而,大鼠尚未完全维持静止的“准备位置”,这一点可通过其穿越中央准备区域时的速度来判断(图 4B)。
经过中级塑形训练后,大鼠在接近目标视觉刺激之前,会在准备区域保持静止的“准备姿势”。随后,大鼠将在竞技场的对侧启动下一次试验(图4C)。
将追踪软件和神经数据采集系统与行为控制系统相结合,可实现对神经数据的事件相关分析。可调节的电极阵列可被精确定位,用于记录单个神经元和局部场电位活动。当大鼠执行vBCD任务时,记录来自后鼻周皮层的数据。事件相关直方图和点阵图显示,后鼻周皮层的神经元对目标视觉刺激的呈现以及对地板图案的出现有反应(图5A)。在大鼠执行VSA任务时,后顶叶皮层的神经元对图像呈现以及当大鼠进入定义目标图像的区域做出选择时产生反应(图5B)。在VSA任务执行过程中,后顶叶皮层的局部场电位活动显示,当大鼠在图像呈现前处于“准备位置”时,theta频段(约8 Hz)的功率显著增强(图5C)。

图1. 实验装置示意图。 A. 行为学实验间与控制间的示意图。地面投影迷宫位于行为学实验间内,大鼠通过上方摄像头进行监测。控制间内放置用于控制实验任务及采集神经数据的设备。 B. 蝴蝶结形迷宫的尺寸。 C. CinePlex Studio 软件界面截图。用户可自定义区域,逻辑事件以 CinePlex 数字输出信号形式发送至行为控制系统(Med Associates),用于监测大鼠的行为进展。 点击此处查看高清图像。

图 2. 塑造步骤示意图。 A. 在早期塑造阶段,大鼠进入准备区以及东侧和西侧图像区时会接受脑刺激(ICS)。目的是训练大鼠将这些区域与 ICS 奖励相关联。 B. 中期塑造的重点是训练大鼠在准备区内保持静止的“准备姿势”。仅在成功维持“准备姿势”后才呈现图像。大鼠在接近图像区内的图像时仍会继续接受 ICS。 C. 在晚期塑造阶段,大鼠已能成功维持静止的“准备姿势”。训练具有任务特异性,大鼠被训练学习执行特定任务的具体规则。闪电符号表示 ICS 的给予。 点击此处查看高清图像。

图3. A. vBCD任务示意图。 当地板为灰色时,黑色星形位置有奖励;当地板为条纹状时,白色圆形位置有奖励。B. VSA任务示意图。灰色圆圈表示图像区域中的目标位置。目标刺激为其中一个圆圈短暂(500毫秒)亮起(白色)。大鼠在接近正确目标位置后可获得奖励。 点击此处查看高清图像。

图4. 塑造过程中的典型路径示例。 来自一只大鼠在不同塑造阶段持续两分钟时间段的位置数据。动物运动速度通过热图表示,冷色调代表最慢速度,暖色调代表最快速度。A. 在早期塑造阶段,大鼠在东侧和西侧图像区域的外壁附近探索并直立攀爬,且不会在准备区停留。B. 在中期塑造阶段,开始出现较为刻板的运动路径,路径呈环形从图像区域返回至准备区,大鼠开始能够成功在准备区维持“准备姿态”。C. 当大鼠进入后期塑造阶段时,其在准备区保持静止的“准备姿态”,运动路径更加固定和刻板。点击此处查看高清图像。

图 5. 事件相关分析示例。 A. 在 vBCD 任务期间记录到的后嗅皮层细胞,对目标图像呈现(左)和地板呈现(右)表现出不同的反应。 B. 在 VSA 任务期间记录到的后顶叶皮层细胞,对圆圈照明呈现不同的反应(左)。在选择目标圆圈点亮的空间位置后放电增加(右)。 C. 频谱图显示在“准备姿势”期间后顶叶皮层存在显著的theta波功率。垂直的红线表示成功的“准备姿势”结束以及图像的呈现。垂直的蓝线表示在 vBCD 任务中试验开始时 Floor 1 的呈现。垂直的绿线表示在 VSA 任务中已注册选择。 点击此处查看大图。
我们正式描述了在地面投影迷宫(Floor Projection Maze)上训练大鼠执行完全自动化复杂视觉认知任务的实验方案。该地面投影迷宫已成功用于研究大鼠在执行双选视觉辨别任务时,后鼻周皮层中物体-位置关联及错误信号的神经相关机制1。
行为塑造方案设计为具有灵活性,以便根据每只大鼠的学习速度进行调整。 为行为系统编写的自定义代码可让实验人员在训练的关键阶段控制自动ICS递送的概率; 例如 训练“准备姿势”。代码还应允许在训练过程中通过可编程按钮盒手动递送颅内自我刺激(ICS)。早期塑形的目的是建立有效的ICS刺激以递送奖励,从而强化目标行为。如果可能,我们建议将刺激电极双侧植入内侧前脑束(MFB),以防单侧半球刺激无效。然而根据我们的经验,几乎所有植入的ICS电极均能有效传递具有奖赏性的刺激。中期塑形阶段对于训练大鼠维持“准备姿势”至关重要。在“准备姿势”中,大鼠应保持静止,鼻尖朝向将要呈现选择图像的图像区域。该“准备姿势”控制着图像的出现时机、大鼠接近图像的方向以及观察图像的距离。我们建议在大鼠头件上安装追踪LED,以监测其头部朝向,从而更好地控制行为并更精确地控制目标图像的呈现。可通过手动递送ICS来训练大鼠维持合适的“准备姿势”。当大鼠在每次试验中均能维持满意的“准备姿势”后,晚期塑形阶段的训练将针对特定任务展开。在晚期塑形中,大鼠将被训练学习执行特定任务所需的规则。
我们采用颅内电刺激(ICS)作为奖励传递方法,因为该方法可为大鼠提供即时反馈,从而在行为塑造过程中加快学习速度,并在自动化任务中采集神经数据时增加每轮实验完成的试验次数。然而,ICS刺激会引发神经记录中的电伪迹,可能对连续局部场电位(LFP)或多单元数据的分析造成干扰。在进行连续数据处理前,可通过离线方式从神经记录数据文件中剔除电伪迹周围的信号区间。在高通滤波处理的锋电位数据中,由ICS引起的典型伪迹可轻松通过离线方法去除,且不影响单个锋电位的分析。未来对地面投影迷宫(Floor Projection Maze)实验方案的优化方向包括使用光遗传学工具传递内部奖励,以最小化甚至消除与电刺激相关的伪迹。
地面投影迷宫针对大鼠的视觉能力进行了优化,因此更适合用于视觉引导的行为任务。需要注意的是,由于实验范式所采用的实验方案不同,以及对特定任务成功习得的标准定义不同,因此无法在地面投影迷宫与操作箱之间进行直接比较。我们先前已证明,大鼠在地面投影迷宫中约经过50次试验即可学会简单的双选择视觉辨别任务2,而在其他研究中,当图像在操作箱中以垂直方式呈现时,所需试验次数超过>300次3,10。 视觉注意任务(VSA)的设计参考了经典的五选择序列反应任务13(5-CSRT),后者用于评估视觉注意过程。通常情况下,5-CSRT在操作箱中进行,要求动物将鼻部伸入由闪光指示的正确鼻触孔;而本研究中的VSA任务则在开放场地中进行,要求动物在场地内的特定位置保持静止,将注意力指向目标位置,并等待光刺激出现。根据我们的经验,大鼠在5-CSRT任务中达到标准(连续两天正确率达到75%)约需3,200次试验14,而在地面投影迷宫中的VSA任务中仅需约800次试验即可达到相同标准。
在地面投影迷宫上执行行为任务的另一个优势在于,这些任务是在一个大型开放场地中进行的,这利用了大鼠自然探索环境的倾向,与要求动物注视固定目标的任务形成对比。在开放场地中使用自由活动大鼠的一个主要优势 在地面投影迷宫装置中是 视觉信息可同时获取以环境为中心(allocentric)和以自我为中心(egocentric)的空间信息。本实验范式的另一优势在于,任务设计不必局限于静态图像的呈现,未来可利用动态视觉刺激的位置和特征进行实验。借助CinePlex行为研究系统的追踪功能,可开发更精细的任务以深入理解特定脑区的功能。结合同步的电生理记录与视觉引导的认知任务,能够探索脑活动与决策、视觉辨别等认知过程之间关系的基本科学问题。
通过视觉引导任务,大鼠研究的结果可以更有效地转化应用于人类,最终目标是为人类认知疾病提供治疗方法。
本视频文章的投稿费用由 Plexon Inc. 赞助。
本工作获得了以下资助:NSF IOS 1146334、NSF EFRI 0937848、DARPA N66001-10-C-2010 和 NSF IOS 0522220(授予 RDB)。我们感谢 Plexon Inc 的 Stacie Hyatt 在准备本稿件过程中提供的帮助。
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| OmniPlex D 神经数据采集系统 | Plexon Inc | ||
| DigiAmp 数字化放大器 | Plexon Inc | ||
| 地面投影迷宫框架 | 80/20 Inc | 15 系列 T 型槽框架 | |
| 短焦投影仪 | NEC Display Solutions | WT610E | |
| Da-Lite 带绳孔和孔眼的投影幕布 | Da-Lite Screen Company | 81326C | |
| 有机玻璃(Plexiglas) | Modern Plastics | ||
| SuperPort 输入卡 | Med Associates Inc | DIG-713A | |
| SuperPort 输出卡 | Med Associates Inc | DIG-726 | |
| SmartCtrl 接口模块 | Med Associates Inc | DIG-716B | |
| 解码卡 | Med Associates Inc | DIG-700F | |
| PCI 卡 | Med Associates Inc | DIG-704PCI-2 | |
| 可编程音频发生器 | Med Associates Inc | ANL-926 | |
| 可编程颅内自我刺激刺激器 | Med Associates Inc | PHM-150B | 由 PHM-152COM 卡控制运行 |
| 双通道电极 | Plastics1 | MS303/13/SP | 在基座下方 15–20 mm 处剪断 |
| MED-PC IV 软件 | Med Associates Inc | SOF-735 | |
| OmniPlex 软件 | Plexon Inc | ||
| CinePlex 软件:追踪与基础行为模块 | Plexon Inc |