本文详细介绍了如何对人类癫痫皮层组织进行多电极阵列记录。具体演示了癫痫组织切除、脑片制备以及间歇期和发作期事件的多电极阵列记录过程。
本文内容
摘要
摘要
癫痫影响着约1%的人口，是一组以周期性发作、干扰正常脑功能为特征的神经系统疾病。尽管目前已有针对神经元功能的抗癫痫药物进行治疗，但仍有三分之一的癫痫患者对药物治疗无反应。在此情况下，手术切除产生癫痫发作的脑区仍是唯一的替代治疗方法。近10年来，对人类癫痫组织的研究有助于揭示新的致痫机制。事实上，这些组织能够产生自发的发作间期癫痫样放电，以及可通过药物诱导的发作期样事件，并可利用经典电生理技术进行记录。值得注意的是，多电极阵列（MEAs）是一种微加工装置，其嵌入了空间排列的多个微电极，能够同时刺激并记录来自组织不同区域的场电位以及多个神经元的动作电位。因此，MEA记录为研究自发发作间期和诱发性类发作事件的空间-时间模式，以及癫痫发作起始与传播的机制提供了极佳的方法。本文将介绍如何制备手术切除所得的人类大脑皮层脑片，并在离体条件下使用MEA记录发作间期和类发作期事件 ex vivo。
引言
癫痫是一种慢性疾病，其特征是癫痫发作，即在脑电图（EEG）记录中表现为持续数秒至数十秒的间歇性节律性放电，并伴有临床症状，这些发作会打断以持续数十毫秒的同步神经元放电为特征的发作间期状态，这些短暂的电活动被称为发作间期事件1。癫痫影响全球约1%的人口，尽管大多数患者的发作能够得到控制，但仍有约三分之一的癫痫患者对抗癫痫药物反应不佳2。在这种被称为药物难治性癫痫的状况中，其潜在机制尚未明确阐明，针对被确定为发作起始区的脑部特定区域进行手术切除，仍是唯一可为患者带来积极疗效的替代治疗方法。因此，手术切除的脑组织标本为在离体（ex vivo）条件下研究人类中枢神经系统中发作间期放电的发生机制、癫痫发作的产生与传播机制以及药物耐药性提供了宝贵的机会。
多电极阵列（MEA）由空间分布的微电极组成，能够同时对组织多个位点进行电生理活动的刺激与记录，从而为研究自发性和诱发性活动的时空模式提供了优良的技术手段。该技术最初用于监测神经元细胞培养活动中发育变化3，随后被改进用于急性及器官型脑片和脊髓片的记录4–6，目前已被视为一种重要的电生理学研究工具。
本方案详细介绍了如何从手术切除的人脑皮层组织制备人脑皮层切片，并利用多电极阵列（MEA）可靠地记录这些切片中离体的ex vivo 间歇期放电及类癫痫发作事件。因此，该技术为研究癫痫样活动的起始、传播机制以及抗癫痫药物在细胞和神经网络水平上的作用提供了有效手段。文中详尽描述了获取、制备、维持和记录人脑切片所涉及的全部操作步骤。
方案
注意：此处描述的实验方案遵循法国“国家伦理咨询委员会”（Comité Consultatif National d’Ethique）的指导方针，并已由法国国家健康与医学研究院（INSERM）登记为样本采集活动。
1. 人癫痫组织的切除
- 患者
- 从患有难治性癫痫的患者中获取脑组织。手术前须获得书面知情同意。
- 对所有接受手术治疗的癫痫患者，均需进行详尽的术前评估，包括神经系统检查、神经心理学评估、头皮脑电图（EEG）以及神经影像学检查（MRI，有时还包括 18FDG-PET 扫描 图1A），随后对切除组织进行术后组织学检查（图1B）。注意：当多种探查方法所定位的癫痫发作起始区基本一致，且切除该区域带来的获益超过手术风险时，可考虑手术治疗。
- 外科手术
- 术前继续使用抗癫痫药物。在全身麻醉下进行手术：以吸入七氟烷（6% 输出浓度，100% 吸入分数）诱导麻醉， O2），静脉注射舒芬太尼（0.3 µg/kg）和阿曲库铵（0.5 mg/kg），随后以静脉输注舒芬太尼（0.5 µg/kg/hr）和吸入七氟烷（1 MAC）维持麻醉。
- 使用神经导航系统以精确定位病变皮层图1C）。皮肤切开后，在骨头上钻一个骨孔 随后使用高速磨钻进行开颅手术。轻轻抬起骨瓣，并用剪刀切开硬脑膜（图1D).
- 使用术中超声辅助识别异常皮层，并在手术显微镜下使用显微外科器械和超声吸引器。
- 根据需要凝固并切开软脑膜-蛛网膜平面 脑沟边界。采用软脑膜下分离技术，将病灶周围区域的皮层从软脑膜松解。
- 在异常皮层下方切断白质，进行整块“整块切除”，尽可能保留血管结构。避免对皮层造成创伤性操作。
- 沿脑表面垂直方向，从切除的组织中切取一块厚度为1 cm的组织片，应包含脑沟底部及过渡区皮层。
2. 用于切片制备、孵育和记录的人工脑脊液（ACSF）
- 用于切片制备的ACSF
- 配制1 L基于蔗糖的ACSF7,8，成分（单位为mM）：250 蔗糖、3 KCl、25 NaHCO3、10 D-葡萄糖、1 CaCl2、10 MgCl2；将这些盐溶解于去离子水中，并用碳合气（carbogen）充氧至少10分钟。
- 取约700 ml蔗糖ACSF置于-80 °C下预冷50-60分钟（或-150 °C下15-20分钟）。其余溶液保持在冰上并持续充氧。注：用于切片制备的ACSF可在4 °C下保存；若如此，则在实验当天使用前冷却前再加入CaCl2和MgCl2。
- 用于切片孵育与记录的ACSF
- 至少配制3 L记录用ACSF7,8，成分（单位为mM）：124 NaCl、3 KCl、26 NaHCO3、10 D-葡萄糖、1.6 CaCl2、1.3 MgCl2；将这些盐溶解于去离子水中，并用碳合气（carbogen）充氧。在加入MgCl2前，预留部分ACSF用于在无Mg2+的ACSF中进行记录。注：孵育/记录用ACSF可在4 °C下保存；若如此，则在实验当天加入CaCl2和MgCl2。
3. 切片孵育与记录设备
- 用于脑片孵育的接口式孵育室
- 使用脑切片孵育室以维持切片的活性 离体 在界面模式下。注：该孵育室由下部和上部组成，下部包含加热元件、传感器元件和陶瓷鼓泡器，并装有蒸馏水；上部为孵育室中心的平坦区域，脑片置于该区域的镜头纸上。图2A-B).
- 使用两条独立的细聚四氟乙烯（PTFE）管，使预充氧的人工脑脊液（ACSF）进入记录室。注意：PTFE管在加热的水中呈螺旋状走行，并延伸至记录室上部；随后溶液通过滤纸的毛细作用排出，并由镜头纸引导进入出口孔。
- 将接口室的聚四氟乙烯管连接至蠕动泵，以实现用预充氧培养基对脑片进行持续灌流。
- 通过使用碳合气（95% O₂, 5% CO₂）供氧，维持高氧张力。2 和5% CO2通过陶瓷鼓泡器输送该预热且湿润的气体混合物。注意：该预热加湿的气体混合物通过适当孔道进入孵育 chamber 上部的脑片所在区域。
- 通过一根特殊的双头电缆将孵育室连接至温度控制器，以维持孵育室内上部的温度，该电缆一端带有孵育室加热元件的连接器和外部温度传感器。将传感器置于切片附近，以在孵育过程中持续监测温度图2C).
- 多电极阵列记录
- 使用平面多电极阵列，包含120个氮化钛电极（直径30 µm），以氮化硅绝缘，并配有内置参考电极，电极排列为12 × 12矩阵，中心间距200 µm。 注：也可采用其他配置，电极直径和间距可不同。特别是可加宽MEA芯片，以采集更大尺寸的人体组织切片。
- 使用 MEA2100-120 系统（配备前置放大器和滤波放大器，集成数据采集功能和模数转换器，16 位数据分辨率，输入电压范围和带宽可通过软件调节）并通过专用软件（MC_Rack）以 10 kHz 采样频率获取电信号。注意：MEA2100 头stage 配有金属板，可通过磁性固定装置连接可加热灌流元件，以便在记录期间持续灌流脑片。
- 用自制的小型铂金锚固定组织于MEA上，以确保脑片与电极之间良好的电耦合。
4. 分离与切片用接口室及工具的准备
- 界面室
- 用蒸馏水填充界面室的下部区域，确保水位完全浸没加热元件，并且距离室的上下部分交界处下方 2 至 4 mm。每天开启加热前应检查水位，以避免加热元件受损。
- 将室连接至碳酰气（carbogen）气源，并配备二级流量调节器以精细调节气体压力。
- 裁剪一张镜头纸，使其适配切片室的平坦区域，并将其放置在灌流液输入管附近，以便在液体到达脑片前使输入管路中的气泡得以逸出。
- 剪取两段与镜头纸等长的绞合棉线，沿切片室平坦区域的主要两侧放置。注意：这有助于轻微抬高切片室中灌流液的液面。
- 将蠕动泵的流速设定为 1 ml/min，并启动泵。
- 开始对室底部的水进行氧合。
- 将温度控制器设定为 37 °C 并开启。用一片封口膜（parafilm）覆盖界面室的上部，等待至少 30 分钟，使温度上升并稳定。
- 解剖与切片工具
- 准备一套解剖工具，包括两把精细镊子、一把刮铲、一个小勺和一把刀片；两个玻璃培养皿、两把刷子以及氰基丙烯酸酯胶水。
- 设定振动切片机（vibratome）参数：切片厚度 400 µm；频率 70 - 90 Hz；振幅 0.9 - 1 mm；切片速度 0.1 mm/sec。
5. 人脑皮层切片制备
- 从 -80 °C 冰箱中取出基于蔗糖的 ACSF，混合至形成类似泥浆状。用碳氧混合气（carbogen）进行氧合，取约 250 ml 置于玻璃瓶中，并将其放入装有冰块的杜瓦瓶内，随后前往医院手术室获取组织。在此期间，将剩余 ACSF 保存在 -20 °C 冰箱中。
注意：手术过程中，神经外科医生会分离出一小块皮质组织。应立即将样本置于冰冻的蔗糖 ACSF 中，以便转运至实验室。 - 确保从医院到实验室的转运时间最长不超过 30 分钟。在实验室中，从 -20 °C 冰箱取出已氧合的基于蔗糖的 ACSF，混合成泥浆状，倒入培养皿和振动切片机缓冲槽中，并开始用碳氧混合气对两者持续氧合。用勺子小心地将人脑组织从瓶中取出，放入培养皿中（图 2D）。
- 使用镊子小心去除血凝块、血管和脑膜，以避免切片时产生阻力。从组织块边缘开始去除由软脑膜（pia-matter）构成的脑膜，注意不要损伤皮质表面。使用刀片切割组织一侧，以获得一个平整的表面，便于将其粘附在振动切片机的样品板上。注意：去除由软脑膜构成的脑膜时，应从组织块边缘开始操作，注意避免损伤皮质表面。
- 如果组织块大于 MEA 腔室，应在将其粘附到样品板前，先切割成合适尺寸的组织块（图 2E）。
- 将组织粘附固定，以便获得横切向皮质切片，放入缓冲槽中，以低速（0.1 mm/sec）切割出厚度为 400 µm 的切片（图 2F）。
- 用与切片尺寸相同的镜头纸裁成小片；使用刮铲和毛刷将切片转移至这些镜头纸上，并在界面式孵育室中于 37 °C 下孵育至少 1 小时，之后再开始记录（图 2G–I）。在使用前，持续保持切片处于相同条件下保存。注意：将切片置于镜头纸上是关键步骤，有助于切片底部的灌流以及在记录前从界面式孵育室中顺利取出切片。
- 在将切片转移至镜头纸时，需极其小心操作，避免毛刷接触皮质层区域。
- 每次仅准备一片切片，并立即转移至界面式孵育室中，以确保充分的氧气供应和温度控制；应尽快完成对切除组织块的全部切片操作。
6. 记录用多电极阵列装置的准备
- 将灌流系统连接至蠕动泵，将MEA系统连接至计算机。对记录用人工脑脊液（ACSF）进行氧合。将一片空的MEA芯片放入放大器中。
- 设置温度控制器，使MEA腔室中的加热套管元件达到37 °C，并以5–6 ml/min的流速开始灌流。注意：通常需要将设定温度比目标温度高3–4 °C，具体取决于室温和流速。
- 使用精密温度计检测MEA腔室内的温度，将温度计尽可能靠近腔室中心放置，但不要接触电极区域。
- 启动记录软件，检查所有MEA电极是否连接良好，并确认灌流未引起噪声干扰。
- 启动MEA_Monitor程序，检查显微镜载物台相机系统的运行状态。
7. 将切片从界面室转移至MEA芯片以进行记录
- 将一些预热的记录用人工脑脊液（ACSF）倒入玻璃培养皿中；用镊子通过镜片纸夹取一片脑片，将其放入培养皿中。小心地将脑片从镜片纸上分离。如果在孵育期间精确调节界面式孵育槽中液体的液面高度，则只需将脑片浸入溶液中即可使其自动脱离镜片纸；否则，可使用小毛刷辅助分离。
- 向MEA芯片中加入一些ACSF，并用刮勺将脑片转移至芯片内。使用塑料巴斯德吸管轻轻吸除溶液，使脑片贴附于电极区域，并用铂金固定锚将其固定。加入1 ml记录用ACSF，将MEA芯片放入放大器中，并以5–6 ml/min的速度开始灌流（图2J–L）。
- 使用MEA_Monitor检查脑片在MEA记录区域的位置，如有必要，进行调整以确保可记录到皮层各层的信号，并拍摄图像。开始记录。
结果
在用正常的记录用人工脑脊液（ACSF）灌流组织时，开始记录人脑皮层脑片的活动7,8。在此条件下，若组织在手术过程中以及随后从医院转运和脑片制备过程中保存良好，则可观察到自发性活动，表现为类似痫样间歇期的小型事件，由MEA电极的小簇阵列检测到。类似间歇期的放电表现为场电位，通常为双相，包括一个初始的尖锐负向偏转，幅度可达数十微伏，随后是一个持续数十毫秒的较长反向波。快速的多单位活动通常嵌入在场电位中，主要集中在初始部分。图3Aii展示了一个典型的类似间歇期活动的示例，显示了MEA电极记录的信号轨迹。
记录癫痫发作 体外 人脑皮层切片需要灌流“致癫痫性”人工脑脊液（ACSF），其中 Mg2+ 不存在且 K+ 升高至6 mM，以增强组织兴奋性1 （K的增加）+ 单独使用3至6 mM的浓度不足以诱发癫痫发作；数据未显示）。一旦用0 Mg进行灌流2+ 6 mM K+ ACSF 开始灌流后，皮层切片的活动逐渐增强，并在 15 至 20 分钟内出现首次癫痫样放电（15.4 ± 1.7 分钟， n = 10，来自5位患者； 图3 Ai）。我们诱发了类似发作的活动，如图所示 图3在75%的受试患者和66.7%的所有记录切片中。
通过MEA芯片的相邻电极记录癫痫样活动，比较场电位事件的起始动力学特征，可研究其发生部位及传播路径。图3B展示了从人脑皮层切片中使用MEA系统记录到的一次典型癫痫发作（单个MEA电极记录到的癫痫发作代表性轨迹在图3 Aiii中以更高的时间分辨率显示）。请注意，该癫痫发作几乎在MEA芯片的所有电极上均有记录，表明其能够在广泛的皮层区域中传播。此外，通过观察每个电极记录的单个轨迹，可以发现癫痫发作在组织中的逐步传播过程：发作首先起始于覆盖电极阵列右半侧的皮层区域，随后逐渐扩散至覆盖左半侧的区域（即，比较电极L6和B6的轨迹；图3B）。
图1：皮质发育不良及其手术切除。 术前MRI上可见左侧额叶脑沟内嵌入的Taylor型局灶性皮质发育不良（白色箭头）(A)，术后通过组织学检查进一步证实 (B)（MAP激酶标记；比例尺：200 μm），显示皮质层状结构紊乱、异常神经元以及白质下层中神经元迁移不完全的轨迹。术中根据MRI数据使用神经导航系统定位发育不良病灶 (C)。术中显示包含发育不良的脑回 (D)。
图 2：人脑皮层切片制备的设备与操作流程。 使用界面式孵育槽在体外维持人脑皮层切片 ex vivo（A）；切片置于孵育槽上部平坦区域的镜纸片上（B），此处放置一个温度传感器（C，左），通过双头电缆与温度控制器相连（C，右，上），以在整个孵育过程中保持 37 °C 的恒温（C，右，下）。获取组织后，将切除的脑组织块放入盛有冰冻蔗糖型人工脑脊液（ACSF）的培养皿中（D），并清除血凝块、血管和脑膜，以利于后续切片。若组织块大于多电极阵列（MEA）孵育槽的尺寸，需使用刀片切取适当大小的组织块（E），并将其粘附于振动切片机的样品载板上（F）。切取厚度为 400 µm 的切片，借助刮匙（G）将其转移至镜纸片上（H），然后放入界面式孵育槽中孵育（I）。记录前，将切片浸入盛有 ACSF 的培养皿中，去除镜纸，并用刮匙将切片转移至盛有 ACSF 的 MEA 芯片上（J）。吸除液体，使切片贴附于 MEA 表面（K），并使用铂金固定锚将其固定。将 MEA 芯片放入放大器中（L），开始灌流并记录信号。
图 3：人脑皮层切片中癫痫发作的多电极阵列（MEA）记录。 (A) 图 i 显示了由 MEA 电极记录的人脑皮层切片活动的一个代表性轨迹。在正常人工脑脊液（ACSF）条件下，可观察到类似痫样间歇期的自发性活动（小灰色矩形框，放大显示于图 ii）；当开始灌注无镁离子（0 Mg2+）且含 6 mM 钾离子（6 mM K+）的 ACSF 后，约 15 分钟延迟后出现首次癫痫样发作，随后以每 2–3 分钟一次的频率持续发生。图 iii 展示了图 i 中大灰色矩形框内的癫痫发作事件，并采用放大时间尺度显示。蓝色轨迹表示如蓝线及箭头所指示区域的进一步放大活动。图 iv 显示了图 iii 数据经 250 Hz 高通滤波后的结果，进一步放大后（蓝色轨迹）可见多单元放电活动。(B) 在 0 Mg2+ 6 mM K+ ACSF 条件下，来自全部 MEA 电极的癫痫发作代表性记录。每个方块代表 12 × 12 MEA 阵列中的一个电极，显示 80 秒的时间窗口；虚线表示皮层表面相对于 MEA 阵列的位置。
讨论
耐药性癫痫是一种罕见病症，可通过人体组织进行研究 体外这使得研究癫痫患者的大脑皮层成为可能，该组织表现出某些特定缺陷，而这些缺陷在动物模型中仅能部分重现。本文所述方法可用于制备和记录人类术后脑组织 离体 保持细胞活性和网络结构完整，使其能够自发产生癫痫样活动。保留与记录到的活动相似的特性 体内 研究病理性活动发生机制至关重要。此外，此类方法可用于探索人体组织，避免依赖并不完善的疾病动物模型。然而，人体组织研究需要神经外科医生与实验实验室之间的密切配合。组织运输过程中需采取特殊措施，避免造成机械性损伤。此外，可用的标本数量和组织量均十分有限。最后，获取合适的对照组织是主要难题。在此制备条件下，术后组织在正常人工脑脊液（ACSF）中可自发产生类似痫样间歇期的放电活动。7,8在改良的致惊厥人工脑脊液（proconvulsive ACSF）中也可诱发类似发作的事件，从而可研究癫痫发作的启动机制以及从发作间期向发作期的转变过程。
在界面条件下，人体组织可保持活性长达10小时。当观察到多单位放电或场电位自发出现，并且通过提高细胞外钾浓度和/或降低镁浓度以增强兴奋性后可诱发出相应活动时，即认为脑片具有活性。尽管活动存在变异性，这可能反映了不同病理状态和皮层区域之间的差异，但我们仅在显示自发性发作间期放电及可诱发发作期放电的健康脑片中探讨组织的致痫特性。为了维持组织的活力和电活动，采用界面式孵育槽在36–37 °C下保存脑片，使其在使用MEA系统记录前完成恢复。事实上，多个研究团队已明确证实，与传统的烧杯式储存相比，基于界面的储存系统在维持神经网络活动（如自发的尖波-涟波或胆碱能诱导的振荡）方面具有显著优势，且温度对这些活动的保持至关重要9,10。此前已有研究利用界面储存方法记录来自人海马和下托脑片的癫痫样电活动1,11。在当前的MEA技术中，脑片经界面条件恢复后，将在浸没式条件下、以高流速（5–6 ml/min）和37 °C环境中，使用MEA系统记录其网络电活动。MEA芯片较小的直径（1.8 cm）形成一个容积较小的记录腔室（<1.5 ml），结合较高的灌流速度，显著改善了脑片的供氧状况，而供氧已被证明是维持自发性和药理诱导性网络电活动的关键因素9,10。此外，循环ACSF用量的减少也有利于开展药理学测试。
然而，切片过程会对组织造成损伤12。神经元结构和氯离子稳态在组织表面（50 µm）均出现紊乱。MEA芯片记录到的电活动主要来自组织表层，无法深入采样，因此这些信号可能源于受损区域。然而，我们的数据显示，局部检测到的细胞外场电位可在大多数MEA电极上记录到，且已有研究证明这些信号是在距离记录位点100至200 µm范围内整合产生的13，这表明在本实验体系中记录到的癫痫样发作活动不太可能来源于受损区域。此外，在使用钨电极进行的可深入穿透组织的研究中，人类脑组织记录到的癫痫样活动与癫痫患者中观察到的活动相似1,7,8。
另一个局限性是 离体 组织记录的一个局限是不同脑区间连接的中断，从而限制了动态神经调节。这或许可以解释为何在此类组织中无法自发记录到类似痫性发作的事件，而需要通过离子操控或药理学刺激增强兴奋性来触发。因此，在本方案中，通过联合改变细胞外K+ 从 3 到 6 mM 以及外部 Mg 的减少2+ 从 1.3 mM 到 Mg2+-无 ACSF，以增强组织兴奋性并去除 Mg2+依赖性NMDA受体阻断。事实上，先前已有研究证实，使用Mg²⁺诱导人新皮层和海马脑片产生癫痫样活动2+-无钙人工脑脊液（ACSF）中记录到的电图性癫痫发作相似 体内14此外，已有研究表明，在长时间暴露于Mg后，从颞叶脑片中记录到的癫痫样放电会对临床常用的抗惊厥药物产生耐受性。2+无自由基 ACSF15,16从而为研究耐药性癫痫样发作事件提供了一个模型 体外.
多电极阵列（MEAs）可用于记录场电位以及由神经元动作电位组成的多单元放电活动 离体因此，与探索由神经元群体同步活动产生的场电位的脑电图（EEGs）相比，微电极阵列（MEAs）是一种更强大的电生理学工具。 体内，但无法获取单个神经元的行为信息17尽管更新型的微电极能够记录 体内 由神经元动作电位组成的多单元放电活动，具有侵入性，因此其应用主要局限于颅内记录期间的研究目的。特别是，微电极阵列（MEA）记录技术是研究癫痫事件时空模式、控制发作起始与传播的机制以及传统和新型抗癫痫药物作用的首选方法之一。值得注意的是，为了揭示癫痫样放电的细胞类型及其信号传导基础，应将尖峰分类技术与药理学检测相结合应用于MEA记录。尽管MEA能够获取单个动作电位，但其无法提供有关突触特性及生物物理特性的信息。未来，应将其他技术与MEA记录相结合，以更全面地采样细胞行为、神经网络活动及突触信号传递。例如，可将用于揭示神经元或胶质细胞行为以及离子动态变化的荧光成像技术与MEA记录相结合。此外 事后检验 组织学分析还可揭示特定细胞类型、蛋白质或受体的具体改变，从而将癫痫活动的定位与神经结构的特定重组相关联。MEA系统还可嵌入膜片钳装置中，以实现单个细胞或电导活动与群体活动之间的关联分析。未来，若能像培养器官型脑片一样实现人脑组织切片的长期培养，则可应用光遗传学工具，对特定细胞类型进行转染或感染操作。
披露
本视频的制作及开放获取出版由Multichannel Systems提供资助。
致谢
本研究得到了以下资助：N.R. 获得法国国家研究局（ANR，神经科学空白计划）、脑科学研究联合会（FRC）、巴黎市政府（新兴计划）、法国国家健康与医学研究院（INSERM）和拉匹提耶-萨尔佩特里埃医院（转化研究合同）的资助；E.D. 获得法兰西岛神经科学研究中心（NeRF）的资助；G.H. 获得巴黎皮埃尔与玛丽·居里大学（UPMC，融合计划）和巴黎脑与脊髓研究所的资助。
材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 脑切片孵育室-2：界面式 | AutoMate Scientific, Inc. | S-BSC2 | 需另配独立的温度控制器 |
| 双通道温度控制器 | Multichannel Systems, Germany | TC02 | 可同时连接并使用两个界面式孵育室。 |
| 用于将TC01与带外部参考PT100的S-BSC2连接的专用电缆 | Multichannel Systems, Germany | CA3 | 参考PT100置于切片附近 |
| 带PT100的6针插头连接器 | Multichannel Systems, Germany | TS-PT100 | CA3电缆的外部参考装置 |
| 用于从120通道微电极阵列记录数据的MEA工作站 | Multichannel Systems, Germany | MEA2100-120 | 包含MEA2100-120前置放大器和MEA2100接口板。www.multichannelsystems.com |
| 适用于MEA2100-120的微电极阵列 | Multichannel Systems, Germany | 120MEA200/30 | 电极间距：200 µm；电极直径：30 µm；玻璃环高度：6 mm。可提供不同配置（间距、直径、环）。 |
| 视频显微镜台 | Multichannel Systems, Germany | MEA-VMT-1 | 台下配备视频显微镜，用于对放置在台面上的放大器中的MEA电极区域成像，并将图像传输至计算机。 |
| 灌流套管 | Multichannel Systems, Germany | PH01 | 可加热灌流套管，内置温度传感器；温度可通过TC02控制器编程调节 |
| MC_Rack | Multichannel Systems, Germany | 用于数据采集与记录的软件 | |
| 磁性灌流固定架 | Multichannel Systems, Germany | MPH | 用于固定PH01组件的磁性灌流固定架，可将灌流系统连接至放大器接地端 |
| Neuroexplorer | Nex Technologies | 数据分析软件；info@neuroexplorer.com | |
| 蠕动泵（驱动单元） | Gilson | F155001 | 0.01 至 48 rpm |
| 蠕动泵（泵头） | Gilson | F117800 | R2 双通道 |
| 超声吸引器 | Integra Life Sciences, USA | Cusa Excel + | 可用于皮层的钝性软脑膜下分离 |
| 神经导航系统 | Isis Solutions, France | Surgiscope | 可在术前MRI上实时识别脑结构 |
| 振动切片机 HM 650 V | Microm | 将组织块切片为厚度400 μm的切片 |
参考文献
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