Abstract
في الجسم الحي البحوث الطبية الحيوية أمرا حيويا لترجمة في نتائج المختبر إلى التطورات السريرية. المؤسسات الأكاديمية صغيرة ذات موارد محدودة تجد من المستحيل تقريبا لبناء وصيانة مرافق القوارض النموذجية للأبحاث. وقد أثبتت الأبحاث الزرد ليكون بديلا قيما لفي الجسم الحي البحوث في علم الصيدلة، علم وظائف الأعضاء، وتنمية والدراسات الوراثية. توضح هذه المقالة أن منشأة الزرد وظيفي يمكن أن يبنى بطريقة سهلة وميسرة. علينا أن نبرهن على مثل هذا المرفق يمكن أن يبنى في حوالي يوم عمل واحد مع الحد الأدنى من الأدوات والخبرات. وبلغت تكلفة حوض للأسماك الزرد 27 منشأة 1.8 L شيدت في هذه الدراسة حوالي 1500 $. ونحن نقدر أن المحافظة على عمل 150 مستعمرة الأسماك الأولية لمدة 3 أشهر هو 1،000 دولار. هذا الطلاب المعنيين في المشروع، تم تقديمها للaquaculturing من الزرد ليقترح البحث.
Introduction
في الجسم الحي نماذج ضرورية في إجراء البحوث الطبية الحيوية شامل لأنها تسمح للفي مجال البحوث المختبر إلى أن تترجم على مستوى النظام والعضوي. على سبيل المثال، قد أثبتت الأبحاث مع الثدييات الصغيرة، وهما القوارض، الضروري في تطوير عقاقير وتحسين العقاقير المتاحة. ومع ذلك، فإن التعقيد (ماليا ولوجستيا) قد يجعل من المستحيل تقريبا لبناء وصيانة مرافق القوارض ليقترح التجريب في المؤسسات البحثية الصغيرة الأكاديمية. ومع ذلك، في الجسم الحي البحوث يمكن أن يؤديها باستخدام الأنواع الحيوانية الأخرى التي تتطلب اللوجستية أقل تفصيلا. الزرد (دانيو rerio) وقد استخدمت بنجاح لتكون نموذجا في الجسم الحي لدراسة علم الوراثة والتنمية والفيزيولوجيا المرضية، والصيدلة 1،2،10،11،12. التسهيلات اللازمة لإيواء الزرد لإجراء التجارب هي بسيطة نسبيا وأقل تكلفة بالمقارنة مع صمرافق odent. كيم وآخرون. 3 وقد وصفت مؤخرا بالتفصيل نظام السكن الزرد 80 دبابة التي يمكن أن يبنى على ما يقرب من 1،500 دولار، والذي يشمل كلا من قطع الغيار وتكاليف العمالة. هذا يقف في تناقض صارخ مع ما يقرب من 8500 $ التي من شأنها أن تكون هناك حاجة لشراء نظام 80 دبابة جاهزة من أي عدد من الموردين التجاريين. ومع ذلك، فإن الوصف الذي قدمه كيم وآخرون. قد تكون معقدة وصعبة لمتابعة بالنسبة للمستخدمين المبتدئين للبحوث الأسماك. ونحن نعتقد أن منشأة الزرد يمكن بناؤها بطريقة مبسطة للاستثمار من 1500 $.
إنشاء منشأة في الجسم الحي في المؤسسات الأكاديمية صغيرة يوفر كلياتهم أداة إضافية التي لإنتاج الأبحاث أكثر قوة وشامل. في المختبر البيانات التي تدعمها في الجسم الحي النتائج إنتاج عام البحوث الطبية الحيوية أكثر شمولا من البيانات التي تم الحصول عليها باستخدام فقط في النهج المختبر. ولذلك، فإنسوف تنفيذ منشأة الأبحاث في الجسم الحي يعزز إلى حد كبير نجاح مؤسسة في المساعي البحثية الشاملة (التعرض الطالب الأبحاث والمنشورات، والاتصالات، والسعي من التمويل الخارجي، الخ.).
بناء منشأة الزرد مثل واحد الموصوفة في هذه الدراسة هو المثالي للمؤسسات الأكاديمية البحثية مع مرافق محدودة (أو المؤسسات في الجسم الحي دون مرافق البحوث) خلال تشنجا الأوقات المالية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
ملاحظة: هذه البروتوكولات اتباع المبادئ التوجيهية للIACUC من المشيخية كلية.
1. المواد اكتساب المدرج في الجدول 1.
2. تجميع 5 الجرف كروم وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. وسوف تستخدم هذه لإيواء مرفق.
3. بناء خزان للمياه ونظام الترشيح (أرقام 1A و 2).
- باستخدام الشكل 1A كدليل، تخطيط ال 18 غالون دلو، ومضخة والفلاتر ومصباح الأشعة فوق البنفسجية لتحديد موقع التثبيت النهائي والحجم.
- مرة واحدة وضعت أجزاء من وقياس وقطع ¾ "الأنابيب البلاستيكية لطول اللازمة للتجميع. تختلف أطوال جميع الأنابيب وفقا لاحتياجات مساحة محددة والقيود.
- تجميع الأنابيب والتجهيزات على النحو المنصوص عليه في السابق باستخدام التمهيدي والاسمنت PVC، انظر أدناه (3.3.2 و3.3.3).
- الرمال قطع حواف الأنابيب مع الصنفرة حتى أنهم سلس إلى لمسةد لا يوجد الحطام.
- رئيس وخارج الأنابيب وداخل المناسب مع التمهيدي PVC شراؤها مع مسحة المضمنة من التمهيدي PVC.
- تدعيم الأنابيب وتركيب معا من خلال تطبيق الأسمنت PVC إلى خارج الأنبوب باستخدام مسحة المدرجة. أكرر لجميع الخطوات التي تحتاج إلى التدعيم PVC.
- وضع دلو 18 غالون إلى جانب واحد من البناء الرف.
- تثبيت موصل الحاجز في جانب خزان.
- إرفاق ¾ "أنابيب PVC إلى الحاجز.
- إرفاق الطرف الآخر من ¾ "الأنابيب إلى مدخل المضخة باستخدام ¾" الخيوط جعل المناسب.
- ربط مرشحات إلى المضخة باستخدام اثنين من 90 درجة المرفقين و¾ "الأنابيب PVC.
- استخدام مرشح واحد ورقة تليها واحدة تنشيط مرشحات الكربون من أجل تصفية الحطام وخفض مستويات الكلور والمواد الكيميائية في الماء.
- قم بتوصيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية إلى accordi المرشحاتنانوغرام لتعليمات الشركة الصانعة.
- إرفاق مضخة ونظام التصفية إلى الجانب العلوي من الرف الأول من رف باستخدام العلاقات السلك. تختلف ترتيب التجمع والمرفق وفقا لحجم وتخطيط الرف / الرف الذي تم اختياره.
- إضافة 1 bioball لكل جالون من الماء إلى خزان المياه مرة واحدة يتم تجميع المضخة ونظام التصفية وتعلق على الرف.
4. بناء الخط الرئيسي العرض (أرقام 1B و 2).
- قياس وقطع قطعة من ¾ "الأنابيب البلاستيكية لتوصيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية إلى العرض الرئيسي
- استخدام ¾ "نقطة الإنطلاق PVC لبدء خط الإمداد الرئيسي من خلال ربط نقطة الإنطلاق إلى ¾" العادم PVC القادمة من فلتر الأشعة فوق البنفسجية. .
- إضافة صمام على الخروج إلى أسفل نقطة الإنطلاق PVC لتكون بمثابة استنزاف لاحمرار صيانة النظام.
- بدء تشغيل خط الإمداد الرئيسي من الجزء العلوي من ¾ "نقطة الإنطلاق PVC عن طريق قياس وقطع ¾" PVCالأنابيب إلى الطول المطلوب لتوفير أنابيب تغذية لكل من الرفوف على الرف.
- تثبيت ¾ "المحملات PVC للخطوط الأفقية التي ستدخل كل رف من رفوف.
- اختياريا (والمقترح)، إضافة ¾ "على الخروج صمام لكل الرف خط إمداد للسماح لعزل كل رف وتصميم وحدات من هذا النظام.
- استخدام ¾ "أنابيب PVC كورقة ضغط الحد من خط على الرف العلوي. في حالة تشغيل هذا الخط في الجزء الخلفي من الرف، واستخدام هذا الجرف للتخزين. إنهاء تخفيض الضغط سطر في خط العادم الرئيسي (الشكل 1B) مع ¾ "صمام على الخروج.
- مرة واحدة وقد تم الانتهاء من الخطوات المذكورة أعلاه، رئيس وتدعيم الأنابيب البلاستيكية معا كما فعلت سابقا عند بناء نظام خزان والترشيح.
5. بناء الخط الرئيسي العادم (أرقام 1C و 2).
- تشغيل طول العمودي للخط العادم الرئيسي إلى الجانب الآخر من و رفROM خط الإمداد الرئيسي. استخدام أنابيب 2 "PVC لهذا الخط الرأسي لاستقبال خط الإمداد الرئيسي في أعلى واستنزاف خطوط من الدبابات الأسماك من كل رف.
- قطع قطعة من 2 "الأنابيب البلاستيكية لالرأسي خط العادم الرئيسي واستخدام 2" المحملات PVC لاستقبال حوض للأسماك خطوط هجرة من كل الرف. إنهاء خط العادم الرئيسي في خزان الأسهم لطرد المياه المعاد تدويرها أكثر من فلتر الاسفنج.
- قطع بوصة واحدة فتح كامل طول 2 "PVC القطع الأنابيب ونعلق على رأسي خط العادم الرئيسي مع PVC المحملات لخطوط الصرف الأفقية من الدبابات الأسماك.
- تتويج 2 "خطوط هجرة أفقية مع 2" غطاء PVC.
- رئيس وتدعيم القطع باستخدام التجهيزات الضرورية (وصلات، الحلمات أو المرفقين).
6. بناء خزانات الأسماك (الشكل 3).
- مع الحفر، وقطع 1 1/8 "ثقب في الجزء الخلفي من حوض للأسماك 1" تحت الحافة العليا مع رأى حفرة.
- نعلق وتشديد 90 درجة 3/4 "الخيوط PVC الكوع إلى محول الذكور لإنشاء أنبوب العادم حوض للأسماك. إضافة قطعة من شبكة غرامة قبل الشد الجوز عقد لمنع الزرد يمر نظام العادم.
- وضع خزان الأسماك مع نهاية أنبوب العادم في فضاء مفتوح من خط تصريف وراء الدبابات
7. بدء نظام المياه
- في عدة حاويات، مثل تلك المستخدمة للخزان، وقياس ثلاثة أضعاف كمية المياه الواردة في هذا النظام. اسمحوا الوقوف هذا الماء في درجة حرارة الغرفة لتكييف لمدة 48 ساعة.
- إضافة الماء إلى النظام والسماح لها تعمم مدة لا تقل عن 3 أيام.
- تغيير الماء في النظام بقوة طوال 3 أيام الأولى من الدورة الدموية من أجل تخليص النظام من الملوثات ثار يقيمون داخل الأنابيب.
- إضافة الزرد المبتدئين والسماح للدورة النيتروجين إلى الحصول على المنشأة. تطبيع الرقم الهيدروجيني إلى ثابت 7. حافظ على سبعة الزرد في 1.8 L، وإطعامهم مرتين يوميا خلال أيام الأسبوع، ومرة واحدة يوميا خلال عطلة نهاية الأسبوع على النحو الذي اقترحه ينبو 4 و 6 مكناب.
- مراقبة نترات (<75 ملغ / L) تم الحفاظ عليها، النتريت (<10 ملغ / لتر)، والأمونيوم (0 ملغم / لتر) يوميا خلال الأسبوع الأول بعد إضافة الأسماك، ومستويات مرتين أسبوعيا مرة واحدة المطلوب مع التغييرات المياه العادية .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
بناء نظام مضخة وFlters
مرة واحدة يتم تجميعها الرف واقامة الخطوة الأولى هي لبناء مضخة وفلتر النظام. وترتبط عوامل التصفية لمضخة نظام وتقع فوق مستوى السفلي من الرف الأول، والذي يسمح لسهولة الصيانة واستبدال فلتر. وبالمثل، يتم توصيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية مع الأنابيب البلاستيكية للتصفية والذي عقد في مكان مع العلاقات الأسلاك البلاستيكية للسماح السهل استبدال مصباح الأشعة فوق البنفسجية حسب الحاجة (الشكل 4A). مباشرة بعد المضخة يتم تثبيت مرشح ورقة، فلتر الكربون المنشط، ومصباح الأشعة فوق البنفسجية عبر الأنابيب PVC. تضاف Bioballs إلى خزان لتوفير سطح لنمو البكتيريا، والذي يحول النفايات السامة الأمونيا إلى نترات. واحد bioball لكل غالون من المياه في هذا النظام هو منطقة كافية للسماح نمو البكتيريا. غطاء الخزان البلاستيك يمكن تركيبها بحيث أنه في حالة تجاوز سوف bioballs تبقى في الخزان وفرص كونتامينايتم الحد من نشوئها. على الرغم من حدث تجاوز من غير المحتمل جدا، وهو نظام تجفيف (إضافة استنزاف الأنابيب في الجزء العلوي من الخزان) هو إضافة السهلة التي يمكن إدخالها على النظام.
بناء لإمدادات الخط الرئيسي
والخطوة الثانية هي لتجميع خط إمداد المياه الرئيسي الذي سوف تغذي كل مقصورة التي سوف تحتوي على الدبابات الزرد (الشكل 4B). يتم توصيل هذا الخط إلى مصباح الأشعة فوق البنفسجية مع قطعة من الأنابيب البلاستيكية. هذا الخط يمتد عموديا وأفقيا إلى رف من خلال نقطة الإنطلاق PVC. يتم استخدام نهاية الجزء السفلي من نقطة الإنطلاق لربط قطعة من الأنابيب البلاستيكية التي من شأنها أن تكون بمثابة صمام استنزاف للنظام بأكمله.
الخطوط الرئيسية التي تغذي الدبابات تشغيل أفقيا إلى أربعة أقسام: الجزء العلوي من الرف الثاني، أعلى الرف الثالث، أعلى الرف الثالث، وأسفل الرف الخامس. منذ الجزء العلوي من الثانية والثالثة والرابعة خطوط الرف توفير المياه إلى خزانات الأسماك تشغيلها في midlin(ه) من الرفوف. كل من هذه الخطوط يكون الفردية على الخروج والصمامات، والذي يسمح للسيطرة المقصورات الفردية.
ومرفق متعددة الري 9 الميناء إلى نهاية الخطوط الأفقية، وهذه الري توريد المياه إلى خزانات الأسماك من خلال مرونة ¼ "أنابيب (الشكل 4B). كل ميناء مشعب الري لديه صمام بني في على الخروج. وبالإضافة إلى ذلك، يتم وضع صمام على الخروج في نهاية الأنبوب تعلق على كل منفذ، بالقرب من مدخل حوض للأسماك، ليسهل الوصول إليها والتحكم في تدفق المياه. سيتم إدراج الأنابيب إلى خزان من حفر حفرة في غطاء. وهذا سيساعد في الحفاظ على أنابيب إدراجها بقوة في الخزان.
ويستخدم الخط الذي يمتد على الجزء العلوي من الرف الخامس باعتباره المخلص الضغط، ويتم التحكم مع صمام الفردية على الخروج. فمن المستحسن أن يكون هذا الخط تشغيل في الجزء الخلفي من الرف الخامس حتى أن هذه المنطقة يمكن أن تستخدم للتخزين. منذ ماييعمل ن الخط في خط الوسط من جانب من الرف، وانها جلبت إلى الخلف باستخدام الكوع PVC وقطعة من الأنابيب البلاستيكية، ومن ثم تشغيله طوليا (أفقي) كخط الضغط المخلص باستخدام الكوع آخر PVC وقطعة من الأنابيب البلاستيكية. خط الضغط المخلص ينتهي في خط العادم الرئيسي الذي يمتد عموديا على الجانب الآخر من الرفوف وينتهي في خزان للمياه (يتم هذا الخط العادم من 2 "الأنابيب البلاستيكية، انظر أدناه).
بناء العادم الخط الرئيسي
والخطوة الثالثة هي لتجميع نظام العادم، والذي يمتد أفقيا إلى الرف، في الجانب حيث يتم وضع خزان المياه (الشكل 4C). هذا النظام تم إنشاؤها باستخدام 2 "الأنابيب البلاستيكية ويجمع الماء الذي يأتي من خط المخلص الضغط، ومن خزان الأسماك يستنزف (انظر بناء حوض للأسماك أدناه). خط العادم الرئيسي يمتد عموديا، وربط خط الضغط المخلص على أعلى رف وتنتهي في إعادة المياهservoir. أيضا، خط العادم الرئيسي يتلقى هجرة من الدبابات الأسماك من خلال أنابيب أفقية 2 "PVC التي تتصل خط العادم الرئيسي عبر المحملات PVC. هذه مواسير الصرف الأفقية لديها 1 "قطع طولية لاستقبال مياه الصرف من خزانات الأسماك (انظر أدناه). هذه خطوط هجرة أفقية تعمل في الخلف وعلى الأجزاء السفلى من الرفوف ولها المنحدر البسيط الذي يسمح الماء ينضب لتشغيل إلى خط العادم الرئيسي عن طريق الجاذبية. تضاف منصات فلتر الاسفنج الى خطوط هجرة أفقية بحيث يقع حوض للأسماك مياه الصرف على الإسفنج ومرشحات من أصل الحطام. وهناك صورة لنظام تجميعها كلها في الشكل 5.
بناء خزانات الأسماك
ويرد حوض للأسماك تمثيلي في الشكل (6). يتم وضع نهاية للأسماك خط خزان استنزاف في خط هجرة الأفقي (انظر أعلاه القسم على خط العادم). يتم إدراج شبكة سلكية في خط التصريف في حوض للأسماك لمنعالزرد من السباحة للخروج من الخزان. هذه الدبابات معينة لها الأغطية التي تمنع الأسماك من الهروب، وكذلك تقليل فرص التلوث. إذا حدث تجاوز الأغطية دبابات سيمنع الأسماك من السقوط على الأرض. الدبابات مع الأغطية مثالية ولكن إذا تم بناء النظام الذي يحتوي على الدبابات دون أغطية ثم قد يتم حفر حفرة صغيرة بالقرب من أعلى الخزان. وهذا سوف يسمح للمياه للهروب في حين منع الأسماك من الهرب.
تعمل
يمكن الحفاظ على مستعمرة الزرد التي كتبها البروتوكولات المتوفرة، وأنشأ موضح في مكان آخر 3- 6. لفترة وجيزة، منشأتنا يسمح للمضخة نظام أن تعمم وحدة تخزين النظام ما يقرب من 75 مرات في الموارد البشرية، عن طريق ضبط معدل التدفق لكل الكبار (أو حوض للأسماك اليرقات) في حوالي 85 مل / دقيقة (أو 45 مل / دقيقة لحوض للأسماك اليرقات) . ويحتفظ نوعية المياه عن طريق الترشيح البيولوجي النشط والتغييرات المياه على نطاق صغير (~ 5٪ من حجم النظام) حسب الحاجة. الرصد اليوميمن درجة الحموضة، والموصلية، الأوكسجين المذاب (DO) المستويات، ودرجة الحرارة ضرورية للحفاظ على شروط متسقة. المجموعات هي تجاريا المتاحة لقياس درجة الحموضة والقيام المستويات. الموصلية متر متاحة للشراء أيضا. من أجل اختبار هذه المتغيرات يوميا، وإزالة 250 مل من الماء من الخزان وإجراء التحليل. ينبغي الحفاظ على مستوى الرقم الهيدروجيني في 7.2، يجب أن يكون DO أقل من 6 ملغ، والتوصيل بين 500 ميكرو ثانية و 1،300 ميكرو ثانية. (SOURCE HERE) يجب الحفاظ على درجة الحرارة في 28.5 درجة مئوية. صيانة النظام العادي (3-4 أسابيع) تتضمن تغيير تقريبي 30٪ من المياه وتنظيف واستبدال منصات تصفية والفحم.
الشكل 1: ثلاثة مكونات رئيسية مرفق الزرد. A. وتقع نظام مضخة والمرشحات في الجزء السفلي من الرف (أولاالجرف) وربط خزان مخزون المياه مع خط إمداد رئيسي. B. خط العرض الرئيسي مستمد من مصباح الأشعة فوق البنفسجية وامدادات المياه الى الرفوف العلوية ثلاثة التي تحتوي على خزانات الأسماك. لاحظ أنه يتم تزويد كل حجرة الرف بشكل مستقل، ويمكن التحكم بها بشكل فردي (أو إيقاف تشغيله) عن طريق صمام. يحتوي هذا الخط الرئيسي أيضا صمام استنزاف الرئيسي في نهاية الجزء السفلي، وعند نهاية العليا يستمر كخط المخلص الضغط الذي ينتهي في خط العادم الرئيسي. C. خط العادم الرئيسي يتلقى المياه من خط الضغط المخلص ومن مختلف الأسماك حجرات الخزان وتنتهي إلى الخزانات مخزون المياه. لاحظ أن كل رف لديه خزان الأسماك خط العادم التي هي الأنابيب البلاستيكية وهي طوليا مفتوحة لاستقبال المياه لخزانات الأسماك الفردية. هذه الخطوط ويميل قليلا للسماح للمياه لتشغيل عن طريق الجاذبية إلى خط العادم الرئيسي.الرجاء الضغط هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: ثلاثة مكونات رئيسية مرفق الزرد تجميعها وظيفية بسهولة ملاحظة أن دبابة مخزون المياه لديها بالفعل bioballs. فإن الماء من خط العادم الرئيسي تقع على فلتر الاسفنج وضعت على شبكة فوق مستوى الماء (لوضوح هذا ليس هو مبين في الشكل). لاحظ أن لوضوح الرف الثاني له فقط بعض الدبابات الأسماك يصور، والري يظهر له أنابيب إمدادات 4 فقط، والخط الأسماك خزان العادم شفافة. كل رف من رفوف يمكن ان تحمل تسعة 1 الدبابات L الأسماك ويكون الري 9 الميناء.
الشكل 3: وحدة حوض للأسماك يتم الحصول على حوض للأسماك في متجر للحيوانات الاليفة العادية ولها قدرة 2 L هي التي شيدت A. نظام تجفيف خزان الأسماك من خلال حفر 1 1/8 "ثقب في الجانب الخلفي لل. الدبابة، ثم "وضعت القطع الأنابيب PVC في المقلوب" 3/4 L "شكل باستخدام 3/4" الكوع PVC. وهذا النظام استنزاف تقع في الجانب المفتوح من حوض للأسماك خطوط العادم الموجود في الجزء الخلفي من الدبابات الأسماك. B. صورة تصور تركيب شبكة في النظام استنزاف حوض للأسماك. شبكة يمنع الزرد من أن ينضب لخطوط العادم.
الشكل 4: بناء الأجزاء الفردية. A. مرشح ومضخة نظام الثلاث هو على الرف السفلي من النظام. يتم توصيل مضخة لثلاثة ميكان مرشحات كال يليه فلتر الأشعة فوق البنفسجية للقضاء على الملوثات من المياه النظام. B. خط العرض الأفقي ينتهي في مشعب الري 9 الميناء، والتي من شأنها توفير المياه العذبة والأكسجين إلى كل دبابة. خط العرض إلى كل رف لديه صمام على الخروج التي يمكن استخدامها لوقف المياه إلى كل رف لأغراض التنظيف والحجر الصحي. C. الأسماك خط خزان العادم يصب في خط العادم الرئيسي لإعادة إدخال الدورة الدموية. يصب خط تخفيف الضغط أيضا في خط العادم الرئيسي.
الشكل 5: الانتهاء من النظام يحتوي نظام الانتهاء مضخة والمرشحات نظام، خط العرض الرأسي الرئيسي، وهو خط العرض الأفقي لكل الرف، خط خزان العادم، وهو خط تخفيف الضغط، وخط العادم الرئيسي لنظام الدورة الدموية الواردة .
ithin صفحة = "دائما"> 
الشكل 6: حوض للأسماك الممثل يحتوي حوض للأسماك خط تصريف الذي سيربط مع خطوط تصريف الأفقية في النظام.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
والغرض الرئيسي من هذه المقالة هو لإثبات أن بناء منشأة الزرد وظيفية ليست معقدة ويمكن أن يبنى من قبل الباحثين المبتدئين الأسماك مع الحد الأدنى من المعرفة البناء. وعلاوة على ذلك، تعرض هذه المقالة أن المواد اللازمة لهذا المرفق الزرد وظيفية يمكن الحصول عليها بسهولة وكلفة معقولة من متاجر الحيوانات الاليفة العرض المحلية أو المتاجر. مرة واحدة وقد تم الحصول على جميع المواد والأدوات بناء النظام والدبابات الأسماك يستغرق حوالي يوم عمل واحد. الجولة الأولى لل72 ساعة يسمح لأي فشل في النظام، مثل تسرب أو انخفاض ضغط المياه، يتم تحديدها. يسمح هذا المدى الأول أيضا للملوثات داخل النظام ليتم إزالتها من التداول. على سبيل المثال، قد يحتوي على الغراء PVC المواد العضوية الخطرة التي سيتم إزالتها خلال أول عدة ساعات من التداول. النظام لديه صمام استنزاف الرئيسي الذي يسمح ويسهل تعديل حجم والماء بديلا عن العدسات اللاص تعصب. بالإضافة إلى ذلك، فإن النظام لديه خط المخلص الضغط الذي يسهل أيضا تعديل ضغط المياه. هذا الخط هو مفيد عندما سيتم استخدام واحد فقط أو اثنين من مقصورات (رفوف) لأنه يسمح للتنظيم ضغط المياه.
هذا المرفق هو نمطي في تصميم السماح لاستخدام 1 أو 2 أو 3 حجرات (36 الدبابات الأسماك من 1.8 L) لتلبية احتياجات قدرات الباحثين الأفراد. الصمامات على الخروج وضعت في كل حجرة تسهيل عزل أجزاء مختلفة من النظام. هذا النظام صمام مفيد أيضا لتجنب نشر العدوى المحتملة، وتسهيل تنظيف النظام من خلال المقصورات. وبالإضافة إلى ذلك، كل الأسماك إمدادات المياه دبابات واثنين من الصمامات، واحدة في الري 9 ميناء واحد في أنابيب مرنة عند مدخل حوض للأسماك. هذا النظام صمام مزدوج يسمح ضبط ضغط المياه، وكذلك تسهيل إجراءات التنظيف أو استخراج الأسماك أو التلاعب.
ر "> وثائق صحيحة من الأمونيا والنتريت والنترات ضروري لوظيفة المناسبة للمرفق. ولهذا، فإن bioballs مهمة لأنها توفر سطح كافية لالبكتريا الآزوتية النمو. وبمجرد أن مستعمرة الأسماك مستقرة، يمكن للمنشأة يمكن تعديلها بسهولة لاستخدام الدبابات الأسماك أكبر أو أصغر، كما أن منشأة يمكن تعديلها لتربية الزرد التالية البروتوكولات المتاحة في أدبيات 5. وعلاوة على ذلك، ومرفق يمكن تعديلها لإضافة وحدات أو رفوف أخرى لتوسيع قدرات النظام .تدفق المياه العذبة في خزان توفر ما يكفي من الاوكسجين النقي بحيث ليست هناك حاجة لإضافة مكساج إضافية. تبادل الهواء الذي يحدث في خزان المياه هو مصدر كاف من الأكسجين. إذا تم استخدام خزانات أكبر ثم يمكن إضافة مصدر الأكسجين الإضافي. كما تجدر الإشارة إلى أنه بدون تدفق المياه العذبة في خزان الأسماك سوف يختنق، لذلك فمن الأهمية بمكان أن تدفق المياه بالبريد رصده عن كثب لضمان أي شيء يتم حظر خطوط المياه. ومن الضروري أن درجة حرارة الماء الإبقاء على 28.5 درجة مئوية. ويمكن تحقيق درجة حرارة ثابتة من خلال الحفاظ على درجة حرارة الغرفة التي يقع النظام في 28.5 درجة مئوية. بدلا من ذلك، مصدر حرارة الحوض يمكن شراؤها من أجل الحفاظ على درجة حرارة ثابتة. الحفاظ على نوعية المياه لا بد من النتائج التجريبية متسقة. هناك العديد من المصادر المتاحة للمساعدة في تحديد المعلمات بالضبط نوعية المياه على أساس الظروف التجريبية.
يتم تنظيف خزانات الأسماك كل 7 - 10 أيام وبعد ذلك رش مع 70٪ كحول قبل إعادة استخدامها. واقترح أيضا أن الرف الكروم تنظيفها وتجفيفها في هذه المرحلة لمنع الصدأ وبناء. إذا لاحظت علامات التلوث، وتطهير خزانات فردية مع محلول التبييض 2٪ 8. يتم مراقبة الصحة العامة مع إيلاء اهتمام خاص لعلامات العدوى (تورم، وتقرحات الجلد، exolpthalmia، قبالة اللون، الخ.)، مرض فقاعة غاز (بسبب تركيز فوق إشباع الغاز، والتغيرات السريعة في درجات حرارة المياه، ومشاكل في نظام السباكة)، وتضخم الخيشومية (مستويات عالية من الأمونيا والنحاس والزنك أو فتاة الكورس نشط في الماء) ، الجنف (بسبب نقص فيتامين C) أو البيض المرتبطة التهاب وfibroplasias (بسبب احتباس الإناث البيض الذي يدفع خارج جدار البطن).
بناء هذا المرفق هو مرن ويسمح لنظام أصغر أو الموسعة. من خلال اتخاذ الأفكار البناء الأساسية، ويمكن ترتيب هذه التسهيلات لتناسب الاحتياجات البحثية الأساسية من مختلف الأحجام. لأن البناء قد تختلف من مؤسسة، الخطوة الأكثر أهمية في البروتوكول هي الجولة الأولى 72 ساعة، والرصد اليومي لالأمونيوم والنترات والنتريت ومستويات خلال الأسبوع الأول من البناء. نوعية المياه ممتازة سوف تساعد في الحفاظ على صحة الأسماك. العديد من البروتوكولات الحالية المتاحة للحصول على التنفسي الأسماك بأسعار معقولةم يحتاج الى الهواء الطلق تدفق المياه 3. وجود المياه محمية من الهواء الطلق يقلل من فرصة للتلوث المياه والتبخر. الصيانة على نظام مغلق هو الحد الأدنى بالمقارنة مع أنظمة الهواء الطلق المشتركة.
إذا تنشأ مشاكل في بناء منشأة (التسريبات، انخفاض ضغط المياه، الخ.) واحد يمكن أن تحل محل أنبوب مدعومين ببساطة قطع بعيدا مجال الاهتمام في المرفق واستبدال الأجزاء في نفس تدريجي الطريقة كما المذكورة أعلاه . قد يكون هذا النظام عرضة لفقدان المياه كبيرة بسبب التسربات الصغيرة التي قد تصبح خطرا على الأسماك إذا ما تركت دون أن يلاحظها أحد. الحد الأدنى للاستثمار تعويم جهاز للإيقاف سيتم الكشف عن عندما انخفض مستوى الماء دون عتبة آمنة وإيقاف تشغيل النظام. قد يكون هذا ضروريا إذا الرصد الدقيق لنظام غير متوفر. مع التعديلات الصحيحة، وهناك عدد قليل جدا من القيود التي يواجهها هذا النظام إلى جانب عدم وجود حراك. مرة واحدة وهذا النظام هو بناءإد أنه من الصعب جدا على التحرك بدون تقطيع بعض أجزاء وrecementing لهم في الموقع الجديد. هذا القيد التنقل يعني أن النظام سوف تحتاج من الناحية المثالية أن تستمر في مساحة عمل واحدة. إذا كان المطلوب التنقل هناك تعديلات صغيرة قد تكون المبذولة لزيادة المرونة. إضافة النقابة في بداية كل العرض الجانبي، خط تخفيف الضغط، وتصريف المضخة، وفوق صمام استنزاف. خطوط هجرة يمكن تركيبها الجافة بدلا من تثبيته في المكان. وإضافة اقتران مرنة لقسم مضخة مساعدة أيضا في التنقل. وهذا هو مبلغ إضافي
بناء بسيط وصيانة هذا النظام يعني أن البروتوكولات الحالية وجدت في الأدب متاحة لمؤسسات البحوث صغيرة 1،2،10-12. صيانة بسيطة مما يجعل هذا النظام المثالي للبحث الطالب الجامعي. هذا النظام هو ممتاز للبحث والتدريس مختبرات مستقلة، أيضا.
في الختام، هذا النوع منالمرفق هو بأسعار معقولة، وسهلة لبناء وظيفية لفي الجسم الحي التجريب. هذا المرفق هو المثالي للمؤسسات ذات الموارد المحدودة ومحدود المساحة تربية الحيوانات. البحث الزرد هو المنطقة التي يتم استخدامها لأنواع متعددة من الدراسات، بما في ذلك الأدوية، علم وظائف الأعضاء، والتنمية، أو حتى الدراسات الجينية. في الواقع، وعدد كبير من متحولة متوفرة أو الزرد المعدلة وراثيا يدعم خطوط مبتكرة للبحث في تقريبا جميع مجالات الطب الحيوي. وبالإضافة إلى ذلك، فإن هذا النظام يمكن استخدامها لتعزيز فرص البحوث والتجارب الفصول الدراسية للتخصصات العلمية في المؤسسات الجامعية في الغالب الصغيرة وإلهام الجيل القادم من العلماء الطبية الحيوية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح لهذه الورقة.
Acknowledgments
فإن الكتاب أود أن أشكر مكتب البحوث من مدرسة المشيخية كلية الصيدلة للحصول على الدعم المالي لهذا المشروع خلال حفل توزيع جوائز الصيدلة الصغيرة للبحوث والتعاون (SPARC) جائزة. الكتاب أشكر السيد جون Smink، مدير مختبر أبحاث الحيوانات المائية، جامعة كليمسون، كليمسون، SC لبلده الفني مراجعة مخطوطة المساعدة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Item | Brand | Quantity | |
| 74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit | Style Selections | 1 | |
| 18-Gallon General Bucket/Tote | Centrex Plastics: LLC Rugged Tote | 1 | |
| 6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord | Master Electrician | 1 | |
| 9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp | Smartpond | 1 | |
| Whole House Water Replacement Filter | Whirlpool | 6 | |
| Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing | Whirlpool | 2 | |
| Thread Seal Tape | William H Harvey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC PVC Cement | Oatey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC Primer | Oatey | 1 | |
| 1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing | Mister Landscaper | 1 | |
| 1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve | Mister Landscaper | 33 | |
| 9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter | Mister Landscaper | 6 | |
| Drop-In Filter with House | Whirlpool | 6 | |
| 2-in Dia 90-Degree PVC Elbow | LASCO | 3 | |
| 2-in Dia 90-Degree Tee | LASCO | 3 | |
| 3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow | LASCO | 15 | |
| 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 7 | |
| 3/4-in Dia PVC Tee | LASCO | 12 | |
| 2-in Dia PVC Cap | LASCO | 3 | |
| 1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 2 | |
| 3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve | American Valve | 5 | |
| 1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | Lasco | 8 | |
| 3/4-in Dia PVC Cap | Lasco | 1 | |
| 2-In x 5-Ft Pvc Pipe | Charlotte Pipe | 4 | |
| ¾-In x 10-Ft Pvc pipe | Charlotte Pipe | 3 | |
| 11/16x1-7/80 PVC ring | SXT | 10 | |
| ½” PVC male adapter | SXT | 1 | |
| ¾” PVC coupling | SXT | 1 | |
| ½” PVC female adapter | SXT | 1 | |
| link | |||
| 1.8 L Dual Beta Keeper | Top Fin | 27 | |
| ¾” PVC male adapter (w/ #18 O-ring) | SXT | 28 | |
| 90-degree ¾” threaded PVC elbow | SXT | 27 | |
| Fine Mesh | N/A | 1 yard | |
| Bulkhead Connector | N/A | 1 | |
| Hacksaw | N/A | 1 | |
| Drill | N/A | 1 | |
| Hole saw | N/A | 1 | |
| Adjustable Wrench | N/A | 1 | |
| Pliers | N/A | 1 | |
| Tape Measure | N/A | 1 | |
| Safety Glasses | N/A | 1 | |
| Work Gloves | N/A | 1 |
References
- Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , 3rd ed, Academic Press. New York, New York. (2010).
- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P.
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196 (2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
