现货正确的组织多组织块每一次

Summary

试件定位标记（点）的目的是充当定向工具在单个组织识别在多组织石蜡块中提供帮助。这些协议表明它是如何容易地从普通的，低成本的组织学材料构成，并作为在石蜡块和切片的可靠视觉标记。

Abstract

多组织石蜡块提供高通量分析以更高的效率，实验的均匀性，并且减少了时间和成本。组织芯片弥补大多数多组织石蜡块，但越来越多的研究人员正在使用含多个人，可以提供很多的组织芯片的优点，但没有规划和设备的大量投资较大的组织非摆着块。任何多组织分析的关键部件是用于识别每个单独的组织的取向方法。虽然方法存在以维持适当的取向，并识别在多组织块的组织，大多不是非常适合于非排列的块，可在阵列内消耗宝贵的空间和/或难以生产在标准组织学实验室。试件方向标签（SPOT）是一种简单，低成本的定向工具，这显然是在石蜡块和所有的组织切片可见FO- [R可靠的标本鉴定阵列和非阵列布局。当场提供了超过现有的取向方法用于非排列块的优点，因为它不需要任何直接修改到组织，并允许在组织片的布置的灵活性。

Introduction

嵌入在一个单一的石蜡块从多个个体的组织样品的能力使得护理和个人之间的容易的侧方比较，消除了幻灯片之间的变异，并降低切片和染色标本的成本和工作量。这些多组织块通常产生含有在非阵列布局从多个个体组织或者组织微阵列（TMA）或石蜡块。样本标识的保养是任何多组织分析的成功是至关重要的。使用的TMA因为它们的发展，提高分析的效率，减少幻灯片之间变化，节省宝贵的组织资源，并减少的时间和实验¹成本研究者已经。的TMA的正确取向可以采用多种方法来完成，包括组织核心^2-4，芯组的非对称布置^3，5（ 例如，CONTRO之间空格，行或列升与处理），"信标"芯^6，以及位于该TMA基质³外指定取向芯。虽然这些方法工作以及组织芯片，​​最消耗宝贵的核心TMA空间和组织芯片与差距和空间作为标识符可能会造成混乱的组织核心耗尽了时间。此外，这些方法不适合于在多组织块使用未经阵列形式，因为它们依赖于均匀微阵列芯作为标识符的紧密有序图案异常。大多数非排列多组织块必须适应非均匀组织，根据定义，不显示所述结构化阵列网格使这些象差立场标。

虽然有许多优点，使用一个TMA，最大缺点之一是芯的小尺寸，这并不总是代表很大程度上异质组织^1。非排列的多块组织提供了许多的t他好处TMA的，但包含较大的组织样本，或从动物研究整个器官。使用单核组织微阵列具有不同的一致性....

Protocol

1.施工现场的

1. 添加50毫克牛血清白蛋白（BSA）的1毫升组织标记染料在15ml锥形管或2 ml离心管，涡旋1分钟，或直至完全溶解。
   注意:对于这个协议，使用生化级BSA。而其他等级和纯度都没有经过测试，预计品位和纯度不会对现货的成功显著的影响。
2. 热9毫升羟乙基在15ml的锥形管在微波中，在30％的功率，持续10秒的增量琼脂糖处理凝胶直到凝胶完全融化。
3. 结合熔融加工的凝胶和染料BSA溶液在单一的15毫升锥形管中，并用移液管充分混合。涡的解决方案。
4. 放置锥形管在冰箱中几个小时或直至固体。
5. 使用长而细，金属铲或探针从锥形管轻轻松开彩色凝胶塞。
6. 使用手术刀或刀片来CUt是凝胶横插分成5毫米厚的切片。取出圆端和处置废物（ 图2A）。
7. 将凝胶塞部分平面中组织学盒并保持在70％乙醇中1小时。至少3的变化，在24小时内发生变化的70％的乙醇溶液每2-4小时。
8. 手动处理通过乙醇系列（1小时每凝胶部分:70％乙醇，80％乙醇，95％乙醇，100％乙醇（3×的变化），然后清除在清除溶液3次1小时的每个（ 例如，脂族烃（二甲苯替代））在这个协议中使用，二甲苯也可以接受），并渗透有熔融石蜡（3×为每1小时），可以手动或以组织processer。
   注:在充分脱水在100％乙醇中，染料可能会泄漏从凝胶塞这可能会影响在自动组织处理器其它组织和....

Results

当场显示为圆形，在石蜡块色彩鲜艳点（ 图1A和图2D），在所有的石蜡切片，并通过H＆E或IHC染色程序保留在玻璃载片上（ 图1B - 1D和2D）。这种明显的视觉提示助剂既在识别每个单独的组织片的组织学技术人员和研究人员，并简化通信作为组织学技术人员可以使用该视觉提示来指示组织片的研究者从幻灯片在显微镜收集数据的排列。组织取向图应包括与提供给研究者的幻灯片和详细解释所以会有在显微分析没有混淆。 图2A示出切片凝固，着色的琼脂糖凝胶塞的结果。 图2B示出嵌入的结果在切片琼脂糖凝胶塞S在石蜡块中。 图2C示出了使用真皮冲，以产生光点核的结果。

Discussion

成功制备的斑点和利用需要认真遵守一些技术步骤。羟乙基琼脂糖熔化应缓慢并且在低热完成。在高的热迅速熔化可导致琼脂糖一些击穿不到最佳效果。当切割染料载货插头插入件进行处理，确保每一块的厚度大于4.5毫米，不超过7 mm。的圆形端，因为它们不是均匀5mm的厚度被除去废物。件小于5mm将导致该就有可能被用尽之前由邻近组织材料用尽切片的创建短斑点。为了确保现场出现过块的整体，件需要至少4.5-5毫米。以确保蜡的适当浸润，然而，件应不超过7 mm。当脱水染料片为蜡渗透，染料会稍微浸出件在罗威ř浓度的乙醇。浸出不会影响最终产品，斑点将仍然是强烈的染色和清晰可见。浸出可能会影响其它组织，虽然如此，组织切片不应在同一浴进行处理作为染料片，直到片已达到100％的乙醇。

当把这些点进入摆着块，确保所有其它组织的位置是将现场之前完成。由于现场被渗透与石蜡，收件人块熔化的蜡就可以开始融化当场核是否允许坐太久。先安排所有的组织块，加当场核心，并立即块转移到冷板，以防止斑点的任何熔化。

当场就可以进行修改，以适应大多数组织学实验室的工作流程。染料的颜色可以.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
组织凝胶标本处理凝胶	Thermo Scientific	HG-4000-012	http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html
>组织标记染料	三角生物医学科学公司	TMD-5	任何组织标记染料很可能就足够了。
Arraymold 套件 A 2 mm（60 芯）	Arraymold	20015A	任何手动组织阵列仪的工作原理都类似。