调优并行分段流动列和启用多重检测

Summary

在这里，我们提出了一种作和调整平行分段流式色谱柱以实现多重检测的方案。

Abstract

主动流速技术 （AFT） 是一种新型的色谱柱技术，旨在克服流速异质性，从而提高分离效率和灵敏度方面的性能，并实现多重检测。这种形式的 AFT 使用平行分段流 （PSF） 柱。PSF 色谱柱出口端接头由 2 个或 4 个端口组成，可多路复用以连接多达 4 个检测器。PSF 色谱柱不仅允许多路检测平台，还可以同时组合破坏性和非破坏性检测器，而无需额外的死体积管。通过每个端口的流量也可以通过压力管理进行调整，以适应特定检测器的要求。为了使用 PSF 色谱柱实现多重检测，可以控制许多参数，以确保最佳的分离性能和结果质量;即每个端口的管尺寸、每种检测器的端口选择和流量调整。该协议旨在展示如何使用和调整在多重检测模式下运行的 PSF 色谱柱。

Introduction

主动流技术专栏

主动流技术（AFT）层析柱最近开发来克服低效率与流量异质^1-6相关联的分离并且还使多重检测。在这个特殊的沟通我们详细介绍了并行的操作过程分段流程（PSF）柱多重检测。 PSF中列的关键的功能的优点是:（1）从柱床的径向中心区域的流动被从流动的周边或壁区域分离，（2）流动相必须由一个检测要处理的体积源被还原，和（3）检测源可以复用，以未经灌输检测延迟在每个检测处理，或随后迫使一个柱后流动流^7,8的分束扩大样品信息。 PSF中柱设计中的关键功能，使一个多重检测的dvantage是小说出口配件和玻璃料组件，图1是在船尾柱的照片比现有柱。重要的是要明白，分裂过​​程使用并行分段流动列是不一样的柱后流流拆分获得是重要的。在后柱流动流分割整个样本频带从前缘到尾的均等取样的四肢（即，轴向地），从而，每一个流动流等于相对于效率和灵敏度;灵敏度的幅度由此被除以分割数。在PSF，然而，分割处理的样品带径向，轴向未。因此，中央口采样峰顶 - 高峰最集中的地区。因此，这里的灵敏度最高的峰不被漫拖尾区域稀释。将样品从外围端口洗脱是效率不如在CENTRA升区，但是，因为带被径向采样，而不是沿轴向，所述峰的宽度窄于将一个采样过程，其将上述峰在轴向上，也就是 ，一柱后分裂的情况。因此与浓度相关的检测器的灵敏度不会降低。

Protocol

注:该协议包含有关如何使用PSF列上加上多个探测器多重检测高效液相色谱系统的说明。该协议已被写入假设读者已经在色谱仪及各种HPLC检测方法的基本知识和经验。

注意:请参阅材料安全数据表（MSDS）的所有材料和试剂使用前（ 即 MSDS甲醇）。确保使用一切适当的安全措施处理溶剂和高效液相色谱法（HPLC）洗脱时。确保适当使用高效液相色谱仪，分析天平和检测仪器仪表工程控制，保证使用个人防护用品（防护眼镜，手套，实验室外套，全长长裤和封闭趾鞋）。

1.设置高效液相色谱仪

1. 准备高效液相色谱仪，用超纯水（例如，100％的Milli-Q水）林Ea和100％甲醇的线B作为流动相和清除泵按照制造商的要求。如果所使用的检测器之一是MS的，因为它是在这里，添加0.1％甲酸两者流动相A和B的
2. 设置HPLC仪器组件和检测器，如图2。这需要相对于所述柱的探测器方便放置以便最小化检测器和塔之间的死体积。灵活性在HPLC系统配置是可取的。

2.设置的UV-Vis和MS检测器

1. 设定UV-Vis检测到所需的波长依赖于感兴趣的样品（例如，280纳米）。
2. 坐落在积极模式总离子计数（....

Results

一个复用HPLC分析进行了使用PSF模式（ 图1）的后列，并设置为如图 2所示。这种类型的设置允许的咖啡样品同时通过^{UV-Vis，DPPH•}和MS的总分析离子计数（TIC）模式。咖啡样品作出答复^DPPH•的化合物然后可以很容易地匹配到紫外可见和MS -基于保留时间对准的TIC响应，如图3中，由于同时记录色谱图。其中正响应来自MS-TIC检测器看到的那样，被记录的峰的分子量。 表1列出的^DPPH•峰的保留时间，并且这样的峰在UV-Vis和/或MS的响应检测器上，从而提供的分子量。该易于匹配不同的检测过程之间的峰值允许自动对焦筛选和表征AST和更有效的形式为一个复杂的样品，如咖啡。

Discussion

这项研究涉及的表征和使用高效液相色谱多重检测采用平行分段流动（PSF）列咖啡剖析。复使用的HPLC柱的PSF使关键化学实体的表征和鉴定通过减少而它需要使用常规的多检测处理的一小部分时间内获得更大程度的分子的特定信息的样品的数据的复杂性。该PSF列不仅可为多重检测平台，同时还兼具破坏性和非破坏性检测相结​​合，无需额外的死体积和管道。 ^{DPPH•，UV-Vis}和MS（TIC）进行多路复用的意式浓缩咖啡的分析。

一个4口PSF柱用于咖啡使用三种不同的检测器复用的分析。 PSF中柱出口的中央端口被连接到THRE的质谱仪和两个Ë外围端口被连接到任何一个^DPPH•检测系统或UV-Vis检测器。第三可用外设端口不使用，因此，阻止了柱塞，但是这可能已被用于样品的集合，或为另一个检测器。这一复用组向上调整过程是特异性的检测器，其中，分割流量测量发生后检测器，用于紫外-可见和^DPPH•检测系统。由于MS是一种破坏性检测器，流量百分比是由差（总标称流量减去向其他出口端口的流）确定。

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
HPLC 仪器			用于多重检测的多种检测器选择。选择的探测器可能需要额外的仪器，例如 泵。
平行分段流 HPLC 色谱柱	Thermo Fisher Scientific	未定义	即将商业化
甲醇	任何品牌		HPLC 级
PEEK 管	任何品牌		各种长度和内径
柱塞	任何品牌		用于阻塞未使用的外围端口。
PEEK 切管器	任何品牌
分析秤天平	任何品牌
秒表	任何品牌
洗脱液采集容器	任何品牌		1-2 ml 样品瓶可用作洗脱液采集容器