定量自体荧光眼底视网膜疾病的评价

摘要

视网膜色素上皮 （RPE） 通过回收视觉周期副产物来支持感觉视网膜，这些副产物积累为脂褐素。这些产品是自发荧光的，可以在体内进行定性成像。在这里，我们描述了一种使用共聚焦扫描激光检眼镜定量成像 RPE 脂褐素的方法。

摘要

视网膜色素上皮 （RPE） 与上覆的感觉视网膜并列，并支持视觉系统的功能。RPE 执行的任务包括吞噬作用和通过溶酶体衍生的细胞器加工外光感受器片段。这些降解产物储存并称为脂褐素颗粒，部分由双视黄醇组成，其具有较宽的荧光吸收和发射光谱，临床上可通过共聚焦扫描激光检眼镜 （cSLO） 检测为眼底自发荧光。脂褐素积累与年龄增长有关，但在视网膜的获得性和遗传性退行性疾病中也以各种模式存在。因此，研究其积累模式并将这些模式与上覆感觉视网膜的变化相关联对于了解视网膜疾病的病理生理学和进展至关重要。在这里，我们描述了我们实验室和其他人采用的一种技术，该技术使用 cSLO 来量化健康和患病眼睛中 RPE 脂褐素的水平。

引言

视网膜色素上皮细胞（RPE）支持感官视网膜通过众多方法¹的功能。年龄相关性黄斑变性（AMD）是在工业化国家无法治疗失明的最重要的原因，其特征是在RPE中的变化，包括颜料的损失，功能和萎缩损失。在AMD和在正常的老化中，RPE积聚含有吞噬感光体的片段，称为脂褐素颗粒的荧光，溶酶体衍生的细胞器。 RPE脂褐素的累积已经认为表明氧化功能低下^1，但最近的研究表明，视网膜色素上皮形态学老年眼睛保持正常高脂褐素水平^2。然而，脂褐质分布异常模式，脂褐素的具体损失，都记录标志物AMD和AMD的进展，无论是组织学和临床^3,4

缺陷PROCESRPE脂褐素唱也已显示在某些遗传性视网膜变性发生。患有斯特格病（STGD）遭受聚积在RPE脂褐素在年轻的时候，最终建立类似于AMD ⁵所示视力丧失。这些结果表明，脂褐质积聚本身可能是有毒的和驱动RPE功能障碍^6,7。然而，受试者STGD随着时间的推移了详细的影像学研究并未证实焦点脂褐素的积累导致了随后的RPE损失^8。因此，尽管脂褐质的异常是视网膜变性的标记，对于脂褐素的直接毒性作用尚未得到证实。

视网膜色素上皮是视网膜的最后的细胞层，但是产生从眼底的多数荧光信号。可使用共焦扫描激光眼底镜（CSLO），其允许六执行从RPE衍生产生和自体荧光（AF）的检....

方案

伦理学声明:就读于这些研究所有患者均按照医学在纽约大学法学院批准的机构审查委员会的监督，以便完成。

1.患者的选择和成像前期准备

注意:需要以下物质:0.5％托眼用溶液，2.5％苯肾上腺素滴眼液，CSLO配备谱域光学相干断层扫描（SD-OCT）和内部荧光参考。

1. 成像之前，根据制造商的说明适当的设置CSLO进行数据采集。
2. 安装在CSLO内部荧光参考。注意:内部荧光基准，从制造商购买的，被容纳在一个金属环，并直接放置在照相机镜头的后面。如果使用从其它制造商的CSLO，可能有不同的结构比其在所述此协议。
   1. 为了插入引用到CSLO，扭动镜头将其删除，旋开机器的金属环，并包含引用的新的金属环代替它。
      注意:内部荧光基准是将QAF技术必不可少的，因为它允许校正在激光功率和检测器灵敏度/增益变化。
3. 招募成像患者接受常规散瞳检查，并获得有关过去的眼部历史和可能与眼部表现的调查结果基本医疗条件的背景资料。
4. 扩张0.5％托和2.5％苯的学生。关键的一步:扩张小学生至少6毫米。注:这是光线通过不间断的本质，从而为眼底的最佳可视化和测量。
5. 成像前，正确定位患者的CSLO，用下巴搁在腮托，额头抵靠foreheað休息，外侧眼角与指标正确对齐。

2....

结果

采用此技术，研究QAF在健康¹³和疾病状态^10-12。在健康的眼睛（ 图1），从RPE发射AF时相对均匀地分布在整个眼底（ 图1A）。减少强度被认为是在黄斑中心区域由于黄斑色素阻挡光，并在两侧和图像的角由于眼睛和照相机的光学系统。血管暗，并应在明确的重点公采集的图像。 图1B说明了从图1A的QAF水平的相应热图表示。冷色调对应强度较低的区域，同时温暖的颜色对应于高强度的领域。最大强度通常被在第二同心8段环（在图1B中所示）。这个区域也是成像相关variabil少受性比区域更接近图像边界，并在这里黄斑色素对QAF水平有很大的影响的中央区域的外侧。因此，可用于大部分数据这枚戒指的平均强度分析^13。 图2给出与AMD展示的地理萎缩（GA），AMD的一种高级形式的眼睛有代表性的分析。 AMD结果的这种形式在RPE损.......

讨论

异常RPE脂褐素分布，是否增加或减少，是视网膜疾病的敏感标记物和一般与感官视网膜功能的丧失相关。在这里，我们描述了RPE脂褐素的评价QAF的应用。内部荧光参考掺入纠正可变激光功率和探测器的灵敏度⁹与我们的标准化的成像技术使得AF水平的可靠的定量。这是我们的目标，该方法将在诊断和视网膜疾病的监测帮助，并最终在评估治疗性干预，如药物或基因疗法的功效。 QAF也可协助处于危险对于如AMD条件的个体的分层。

我们已经产生QAF数据的一个大的规范数据库被用作治疗视网膜病变¹³的解释的参考工具，并且已经在几个疾病STA还描述QAF工商业污水附加费，包括Stargardt病^10，公牛的眼睛黄斑病变¹²和最佳的疾病^11。在健康的视网膜上，有民族之间不同QAF水平，显著高于QAF白人比黑人和亚洲人，并表明女性QAF水平高于男性。也许最引人注目的是，QAF随着年龄的患者，如以前荧光分光光度计测量¹⁴随RPE脂褐素水平对应。虽然当前规范的数据只向上延伸到60岁，看来患者有7.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Spectralis HRA + OCT	海德堡工程
0.5% 托吡卡胺滴眼液			任何品牌均可使用
2.5% 去氧肾上腺素滴眼液			任何品牌均可使用
内部荧光参考	海德堡工程
IGOR Pro 软件	WaveMetrics