一种分离EOB-DTPA并随后与天然Ga(III)络合的方法 68本文介绍了Ga，以及对所有化合物的全面分析和标记效率的研究。 体外 稳定性与 n-放射性标记复合物的辛醇/水分配系数
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本文内容
摘要
摘要
我们展示了一种从其 Gd(III) 复合物中分离 EOB-DTPA（3,6,9-三氮杂-3,6,9-三(羧甲基)-4-(乙氧基苄基)-十一烷二酸）的方法，以及制备其新型非放射性 即， 天然 Ga(III) 以及放射性 68Ga配合物。通过核磁共振（NMR）波谱、质谱和元素分析对配体及Ga(III)配合物进行了表征。 68Ga 通过标准洗脱方法从 68Ge/68镓发生器。用于评估的实验 68在pH 3.8–4.0条件下进行EOB-DTPA的Ga标记效率测定。采用已建立的放射性薄层色谱（radio TLC）和放射性高效液相色谱（radio HPLC）分析技术，测定示踪剂的放射化学纯度。作为初步研究的 68Ga标记示踪剂的亲脂性 n-辛醇/水分配系数 68通过萃取法测定pH 7.4溶液中镓的存在形态。 体外 在生理pH条件下，对示踪剂在不同介质中的稳定性进行了测定，结果显示其分解速率各异。
引言
钆塞酸二钠是配体EOB-DTPA的Gd(III)复合物的通用名1，是肝胆磁共振成像（MRI）中常用的一种对比剂2,3。由于其可被肝细胞特异性摄取并具有较高的肝胆排泄率，因此可用于局灶性病变和肝肿瘤的定位2-5。然而，MRI技术存在某些局限性（例如，对比剂的毒性，对幽闭恐惧症患者或体内有金属植入物的患者适用性有限），这促使人们寻求替代的诊断工具。
正电子发射断层扫描（PET）是一种分子成像方法，通过向体内引入少量放射性物质（示踪剂），利用PET扫描仪记录其在体内的分布情况。6 PET是一种动态成像技术，能够实现图像的高空间和时间分辨率，并对结果进行定量分析，且无需使用MRI对比剂，避免了其可能带来的副作用。通过将PET获取的代谢信息与来自其他成像方法的解剖学数据相结合，可进一步提升其信息价值，其中最常见的方式是在PET/CT扫描仪中与计算机断层扫描（CT）进行融合成像。
适用于正电子发射断层扫描（PET）的示踪剂，其化学结构必须包含一种可作为正电子发射源的放射性同位素。正电子的寿命很短，因为它们几乎会立即与周围组织中原子壳层的电子发生湮灭。在湮灭过程中，会释放出两个能量均为511 keV、运动方向相反的γ光子，这些光子被PET扫描仪所探测。7,8 为了形成示踪剂，PET核素可以共价结合到某一分子上....
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方案
1. EOB-DTPA 及 Ga[EOB-DTPA] 的制备
注意：使用前请查阅所用有机溶剂、酸和碱的所有相关材料安全数据表（MSDS）。所有步骤均应在通风橱中进行，并使用个人防护装备（安全眼镜、手套、实验服）。
- 从钆塞酸中分离EOB-DTPA
- 将3 ml的0.25 M钆塞酸注射液加入烧瓶中。向搅拌的溶液中加入500 mg（5.6 mmol）草酸。
- 搅拌1小时后，使用减压抽滤装置通过砂芯漏斗过滤悬浮液。分别用3 ml水洗涤残渣3次。
- 合并水相滤液，并将溶液连接pH电极。向滤液中加入12 M盐酸，直至pH约为-0.1。
- 除去溶剂 在真空中 得到无色残余物。在惰性气体下储存。
- 用乙酸乙酯彻底清洗残渣（至少三次），以去除过量的草酸。干燥残渣 在真空中.
- 将残留物在室温下重新溶解于2 ml水中，然后将溶液置于冰浴中冷却。保持冰浴条件，逐滴加入0.5 M氢氧化钠水溶液，直至观察到无色胶状固体形成。
- 倾去水相。再用1 ml冷水分两次洗涤固体。干燥固体 在真空中 得到第一产物组分。
- 从倾析水的合并组分中分离出第二个产物组分 通过 柱层析（硅胶，甲醇/水 4/1）。24 除去溶剂 在真空中.....
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结果
配体EOB-DTPA和非放射性Ga(III)配合物进行了分析 通过 1H 和 13C{1H} 核磁共振波谱、质谱和元素分析。所列出的结果如下 表1 并如图所示 图1-6 验证物质的纯度。
洗脱 68Ge/68镓发生器产生了400-600 MBq的溶液 68Ga。所描述的标记程序可生成所需的示踪剂 68Ga[EOB-DTPA]，表现为放射性高效液相色谱峰，保留时间为2.8 min（图7）。与Ga[EOB-DTPA]标准品在220 nm波长下的紫外-可见检测器中的保留时间（2.7 min， 图8）证实标记成功。不协调的 68Ga 在.......
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讨论
EOB-DTPA 可通过多步合成法获得33，也可从含钆塞酸的市售对比剂中分离得到。为此，可使用过量草酸将中心的 Gd(III) 离子沉淀。去除草酸钆和过量草酸后，可在 pH 1.5 的冷水中通过沉淀法分离得到配体。然而，为了提高产率，也可对滤液进行柱层析纯化，或将其作为后续步骤。两种方法均可得到分析纯的配体，总产率可达 70%（图 1-3，表 1）。
我们发现，与使用氢氧化钠相比，采用氨水调节pH值来分离Ga[EOB-DTPA]更具优势，因为副产物氯化铵可通过升华法从极性很强的残留物中除去。via 上述条件下，该过程进行得较为缓慢。由于在五天后仍可检测到不可忽略量的氯离子，因此用甲醇将残余的盐分洗涤除去。尽管该后处理过程会导致部分Ga[EOB-DTPA]损失，但最终仍以分析纯度获得产物，总收率为46%（图4-6，表1）。对于EOB-DTPA及其Ga(III)配合物的分离，应考虑采用反相色谱作为纯化的替代方法，.......
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披露
作者无任何利益冲突需要披露。
材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 普雷莫维斯特 | Bayer | - | 0.25 M |
| 氯化镓(III) | Sigma-Aldrich Co. | 450898 | |
| 去离子水 | - | - | 使用Auma-Tec GmbH的自来水去离子设备制备 |
| 12 M盐酸 | VWR | 20252.29 | |
| 氢氧化钠 | Polskie Odczynniki Chemiczne S.A. | 810925429 | |
| 草酸 | Sigma-Aldrich Co. | 75688 | |
| 乙酸乙酯 | Brenntag GmbH | 10010447 | |
| 硅胶 | Merck KGaA | 1.10832.9025 | Geduran Si 60 0.063-0.2 mm |
| TLC硅胶60 F254 | Merck KGaA | 1.16834.0001 | |
| 甲醇 | VWR | 20903.55 | |
| 乙醇 | Brenntag GmbH | 10018366 | |
| 乙醚 | VWR | 23807.468 | 储存于KOH板上 |
| 氨水溶液（25%） | VWR | 1133.1 | |
| pH电极 | VWR | 662-1657 | |
| 搅拌加热装置 | Heidolph | 505-20000-00 | |
| 泵 | Ilmvac GmbH | 322002 | |
| 烧结片 | - | 定制设计 | |
| NMR波谱仪 | Bruker Coorporation | - | Ultra Shield 400 |
| 质谱仪 | Thermo Fisher Scientific Inc. | - | |
| 元素分析仪 | Hekatech GmbH Analysentechnik | - | EuroVector EA 3000 CHNS |
| 重水 D2O | euriso-top | D214 | 99.90% D |
| 标记步骤所需材料/设备 | |||
| 68Ge/68Ga 发生器 | ITG Isotope Technologies Garching GmbH | A150 | |
| 泵送与分配系统 | Scintomics GmbH | - | Variosystem |
| 30%盐酸（超纯级） | Merck KGaA | 1.00318.1000 | |
| 超纯水 | Merck KGaA | 1.01262.1000 | |
| 氯化钠（超纯级） | Merck KGaA | 1.06406.0500 | |
| 乙酸钠（超纯级） | Merck KGaA | 1.06264.0050 | |
| 冰醋酸（超纯级） | Merck KGaA | 1.00066.0250 | |
| 二水合柠檬酸钠 | VEB Laborchemie Apolda | 10782 | >98.5% |
| PS-H+ 羧酸酯柱（S） | Macherey-Nagel | 731867 | Chromafix |
| apo-转铁蛋白 | Sigma-Aldrich Co. | T2036 | |
| PBS缓冲液（片剂） | Sigma-Aldrich Co. | 79382 | |
| 人血清 | Sigma-Aldrich Co. | H4522 | 来源于人男性AB型血浆 |
| 烧瓶、色谱柱、等 | 定制设计 | ||
| pH电极 | Knick Elektronische Messgeräte GmbH & Co. KG | 765-Set | |
| 二元泵（HPLC） | Hewlett-Packard | G1312A (HP 1100) | |
| 紫外-可见检测器（HPLC） | Hewlett-Packard | G1315A (HP 1100) | |
| 放射性检测器（HPLC） | EGRC Berthold | ||
| HPLC C-18-PFP色谱柱 | Advanced Chromatography Technologies Ltd. | ACE-1110-1503/A100528 | |
| HPLC玻璃小瓶 | GTG Glastechnik Graefenroda GmbH | 8004-HP-H/i3µ | |
| 移液器 | Eppendorf | - | |
| 塑料小瓶 | Sarstedt AG & Co. | 6542.007 | |
| 塑料小瓶 | Greiner Bio-One International GmbH | 717201 | |
| 活度计 | MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH | - | Isomed 2010 |
| 镊子 | 定制设计 | ||
| 培养箱 | Heraeus Instruments GmbH | 51008815 | |
| 涡旋混合器 | Fisons | - | Whirlimixer |
| 离心机 | Heraeus Instruments GmbH | 75003360 | |
| γ计数器 | MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH | - | Isomed 2100 |
| 色谱用水 | Merck KGaA | 1.15333.2500 | |
| 色谱用乙腈 | Merck KGaA | 1.00030.2500 | |
| 三氟乙酸 | Sigma-Aldrich | 91707 | |
| TLC放射性扫描仪 | raytest Isotopenmessgeräte GmbH | B00003875 | 配备β塑料探测器 |
参考文献
- Weinmann, H. J., et al. A new lipophilic gadolinium chelate as a tissue-specific contrast medium for MRI. Magn. Reson. Med. 22, 233-237 (1991).
- Stroszczynski, C., et al. Aktueller Stand der MRT-Diagnostik mit leberspezifischen Kontrastmitteln.
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重印与许可
