一个反对臭虫评估杀虫剂效果的方法，臭虫臭虫，鸡蛋和一龄期

摘要

杀虫剂评估经常靶向成虫，而不是不成熟的阶段。在这里，我们提出了一个协议有比较第一若虫臭虫阶段评估对臭虫的杀虫剂鸡蛋。这些协议可能会调整其他昆虫，以评估非成人的生命阶段杀虫剂效力。

摘要

对害虫杀虫剂的毒性标准评价上成虫主要进行。评价是基于剂量 - 反应或浓度 - 响应曲线，其中死亡率随着剂量或杀虫剂的浓度增大。标准致死浓度（LC _50）和致死剂量（LD _50），导致在测试群体的50％的死亡率测试可以挑战用于评估对非成虫生命阶段的杀虫剂，如鸡蛋和早龄或若虫阶段的毒性。然而，这一信息对于理解在所有臭虫生命阶段的杀虫剂效力，从而影响控制和治疗工作是必不可少的。该协议使用修改臭虫鸡蛋标准浸渍生物测定和治疗若虫龄第一次接触杀虫试验。这些测定产生浓度-响应曲线，以进一步量化的LC ₅₀值杀虫剂评估。

引言

臭虫一个显著城市害虫可导致血液流失，皮肤过敏，失眠，抑郁和焦虑中的人类宿主^{1，2，3，4，5，6。}消除和控制臭虫的成本高，很多时候需要用灭虫公司⁷家多次访问。多次访问通常需要，因为臭虫的神秘行为与杀害他们的困难。特别是，臭虫蛋是困难的，因为它们的小的尺寸和由蛋壳保护胚胎的控制。

目前，许多灭虫公司在美国各地的普遍做法是将一个家使用化学杀虫剂臭虫。这非常出名该鸡蛋是很难控制，所以很多企业都实施了再治疗⁸两个星期的时间框架。这使得臭虫蛋足够的时间来孵化，这样一龄中脱颖而出，据称是更容易杀死杀虫剂。然而，在研究中评估针对床虱卵和第一龄液体杀虫剂的功效缺乏。

虫卵已记录在案，是最困难的阶段，生活在城市害虫控制，比臭虫等，此外还有许多农业害虫。大多数的这些困难已被归因于蛋壳，而很少有研究报告杀虫剂抗性。抵抗卵期已被记录在骚扰锥蝽 ^{9，pediculus}的头虱 ^10， 小菜蛾 ^{11，Rhyzopertha}多米尼加 ^12， 臭虫臭虫^13，以及多个存储产品甲虫（ 即 锯谷盗，赤拟谷盗，Cryptolestes棕象甲和Rhyzopertha多米尼加 ）。 ¹⁴在通过蛋壳与杀虫剂渗透相关的卵期和未成熟阶段，以及并发症抗性的发展，就必须对针对这些生命阶段杀虫剂功效的生物测定的需要。

该协议提供了一个一步一步的程序确定共同臭虫的卵和一龄阶段的杀虫剂的功效， 臭虫臭虫 。这两种协议是浓度-响应测定法，以允许LC ₅₀值的量化。浓度 - 响应测定法通常用于毒理学研究，然而，这协议已被改编为容易处理臭虫卵和第一龄组。这些测定法可适于各种昆虫卵和未成熟的生命阶段。

方案

注:此协议包括两个检测杀虫剂分开处理床虱卵和第一龄。两个协议都使用相同的杀虫剂进行的，然而，这些协议必须适应，以保证杀虫剂曝光和容易地操纵标本。

1.鸡蛋浸杀虫剂含量

1. 从殖民地拉交配，精心喂养成年雌性臭虫和女性（5-10）放入一个培养皿滤纸。有至少十个重复，以确保有足够的蛋的杀虫剂测定。检查是否女性每天都下蛋。
   1. 一旦他们下蛋，把女性从培养皿英寸（6厘米×5厘米），且每天把它们纳入新的培养皿新滤纸并记录新老培养皿的日期。
   2. 在开始测定之前使鸡蛋4岁至5天。敏感性杀虫剂改变胚胎发育过程中，Sø以控制蛋年龄是重要的。 ð光照，相对湿度60％，和27°C:在12:12大号保持所有生命阶段。
2. 一旦卵适当年龄，使用软尖镊子滤纸轻轻取下臭虫鸡蛋。轻轻刮去附连到使用镊子滤纸上的蛋的底部，然后不施加在蛋大的压力，以限制投掷臭虫鸡蛋轻轻抓住。
3. 将拆卸下来的臭虫鸡蛋打入各自的内部塑料培养皿组。从摩擦每个培养皿的底上用织物柔软剂片外丢臭虫鸡蛋限制静电。臭虫卵治疗组（5-10鸡蛋每组）一次全部。考虑一组复制和使用至少五个（或更多）复制该测定。
4. 制备杀虫剂的连续稀释液以获得一系列5个不同浓度（的0.21-21微升/毫升为吡虫啉（0.1％）/β氟氯氰菊酯（0.5％）和一个控制用溶剂（自来水）溶液只。使各20毫升浓度的具有足够量的浸渍试验。
5. 切离心管（50ml）中在35毫升线内侧使用具有切割轮附件旋转工具，然后切孔进入离心机管（直径= 2.54厘米），使用与铝相同的旋转工具的帽氧化物研磨石附件。离开5厘米在盖的边缘切割时，使帽将牢固地拧入管（ 图1）。
6. 切细网状成正方形大到足以放入帽（约5 ^平方厘米）。在拧紧网，消除了任何的颠簸，到使用离心管盖离心管。
7. 放置使用油漆刷的基团臭虫蛋（一个复制）到离心管内的网格。浸组切割离心管的内部臭虫的成杀虫剂浓度为5秒。
8. 取下离心管出来日。Ë杀虫剂的解决方案。里面直接放置离心管到实验室组织干后用蛋网格。
9. 删除该组鸡蛋了使用小，细鬃油漆刷的离心管，将它们放入一个干净的培养皿用干净的过滤纸。
10. 记录卵死亡率（未能孵化）14天，以确保所有的鸡蛋有足够的时间来孵化。
11. 正确使用雅培的配方（％测试的死亡率 - ％的死亡率控制/ 100 - 控制死亡率×100），在控制治疗的死亡率。
12. 插入与相应的浓度记录死亡率到分析软件¹⁵计算的LC ₅₀值。

2.一龄杀虫剂含量

1. 单独一组精心喂养臭虫（5成年男性和5成年女性），最好是喂前1天，并将它们放入一个培养皿英寸（6厘米×5厘米），用滤纸规定晨报G和产蛋。允许成年臭虫交配和产卵约7-9天。对于饲养，使用循环热水周围血液¹⁶玻管的人工喂养系统。在这项研究中，使用defibronated兔血。
2. 取下培养皿大人英寸（6厘米×5厘米），并允许卵孵化成培养皿内第一龄。大约需要7-9天的臭虫鸡蛋在室温下孵化。
3. 收集使用油漆刷同龄不喂食物的第一龄。年龄可以通过每天除去第一龄和记录它们孵出当天确定。它们放入新的，干净的培养皿中，直到杀虫剂检测。首先龄若虫不是很耐干燥剂，所以杀虫剂检测应尽快完成。
4. 对于试验，准备吡虫啉/β-氟氯氰菊酯的连续稀释来获得一系列5种不同浓度和控制的SOLU化只用溶剂。标记为在美国臭虫控制配方产品被用于这些研究中，因此，溶剂为水（根据标签）。
5. 吸管每杀虫剂浓度和水为对照组到各个滤纸的150微升等分试样（＃1; 4.2厘米直径的）。分发杀虫剂在使用移液器通过围绕滤纸的整个边缘和中心涂敷液滴整个滤纸。
6. 单独放置处理滤纸上个别硬质纤维板板（7 cm ^2）的顶部。
7. 第一龄的释放基团（5至10元组）到个别滤纸，同时仍然与杀虫剂湿和覆盖培养皿的倒底部的第一龄。
8. 放置一个重量上培养皿以防止第一龄臭虫逸出处理过的表面的顶部上。
9. 24小时后接触到的所有第一龄臭虫的死亡记录杀虫剂的浓度。
10. 正确使用雅培的配方（％测试的死亡率 - ％的死亡率控制/ 100 - 控制死亡率×100），在控制治疗的死亡率。
11. 插入记录死亡率和浓度成分析软件¹⁵计算的LC ₅₀值。

结果

卵浸入5种不同浓度的吡虫啉/β氟氯氰菊酯的（微升/毫升）。第一龄被置于五个不同浓度的吡虫啉/β氟氯氰菊酯（ 图2）处理过的表面。

我们使用C.臭虫的三个不同的群体:哈兰，里士满，和Epic中心（ 表1）。哈伦应变易受拟除虫菊酯类杀虫剂和哈罗德·哈伦博士于2005年被收购。里士满和Epic中心菌株既要抗溴氰菊酯。里士满株来自老年组的家在弗吉尼亚州里士满，2008年史诗中心收集的菌株收集2008年在俄亥俄州辛辛那提。

更高的LC ₅₀值表明，高浓度的被要求杀死的50％测试人口鸡蛋从里士满和Epic中心株。到鸡蛋类似，从里士满和Epic中心种群第一龄需要更高浓度的杀虫剂杀死试验人口的50％。在LC

讨论

该测定的一个关键步骤是确保在测定之前从表面取出的鸡蛋不会受到损坏。 许多昆虫将它们的卵粘在基质上，因此，可能需要进行初步测试以确保去除不会导致死亡。与对照组（未去除臭虫）相比，该测试可以通过处理组（从滤纸上去除臭虫）的多次复制进行。治疗组和对照组之间类似的低死亡率（或无死亡率）将确保切除不会导致卵子死亡。因此，杀虫剂测定记录的任何死亡率都应是由于杀虫剂处理造成的。可以使用一龄进行相同的初步实验，以确保采集方法不会杀死实验昆虫。稍后进行的所有实验都应包括未接受杀虫剂但用溶剂处理的对照复制品（对于这些实验，自来水是溶剂）。

应以配方产品的推荐标签率进行初步实验，然后连续稀释以确定正确的浓度，以产生20-80%的死亡率浓度响应曲线。在尝试确定适当的浓度时，以前对相同昆虫或化合物的杀虫剂研究也可能很有见地。需要根据昆虫、生命阶段和所使用的化合物来修改浓度。每次进行实验时都应提出新的解决方案。

一龄暴露于湿残留物对于获得高死亡率是必要的。尽管这个生命阶段被认为比年长的若虫和成虫更容易受到杀虫剂的影响，但使用配方产品仍然很难获得高死亡...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
培养皿	Fisher Scientific Inc.	08-757-105	塑料
滤纸	Whatman1001-042
羽量级镊子	Fisher Scientific Inc.	4750
坦普里德 SC（吡虫啉/联苯菊酯）	拜耳作物科学
运输 GHP（啶虫脒/联苯菊酯）	FMC Corp.
离心管		06-443-18	50 mL;平顶螺纹
细网		7250C
KimWipe		06-666A	11 cm x 21 cm
小油漆刷			任何小油漆刷
硬板板			复合木材或瓷砖 从家装店购买金属就足够
weights			皿的重量固定在表面上的任何类型的金属螺钉