方法文章

斑马鱼中高血糖的急性和慢性模型：评估高血糖对神经发生及放射性标记分子生物分布影响的方法

12.5K 次观看

⸱

DOI：

10.3791/55203

⸱

2017年6月26日

 ,  ,  ,  ,  , 
1UMR 1188 Diabète athérothombose Thérapie Réunion Océan Indien (DéTROI), Saint-Denis de La Réunion, France, Université de La Réunion, INSERM, 2RIPA (Radiochimie et Imagerie du Petit Animal), Cyclotron de la Réunion Océan Indien CYROI, 3CHU de La Réunion

本文内容

摘要

本研究描述了在斑马鱼中建立急性与慢性高血糖模型的方法。目的是研究高血糖对生理过程的影响，例如稳态神经发生及损伤诱导的神经发生。本研究还强调了利用斑马鱼结合正电子发射断层扫描/计算机断层扫描（PET/CT）技术追踪放射性标记分子（此处为[18F]-FDG）的应用。

摘要

高血糖是一种导致心血管和脑功能障碍的主要健康问题。例如，高血糖与卒中后神经系统并发症风险增加相关，并被证实会损害神经发生过程。有趣的是，成年斑马鱼最近被确立为模拟高血糖/糖尿病以及研究基础性和再生性神经发生的相关且有用的模型。本研究提供了建立高血糖斑马鱼模型的方法，以探讨高血糖在稳态和脑修复条件下对脑细胞增殖的影响。急性高血糖通过向成年斑马鱼腹腔注射D-葡萄糖（2.5 g/kg体重）建立。慢性高血糖则通过将成年斑马鱼浸入含D-葡萄糖（111 mM）的水中持续14天来诱导。文中描述了针对上述不同方法的血糖水平测定技术。此外，还演示了研究高血糖对基础性和再生性神经发生影响的方法，包括端脑的机械损伤操作、脑组织解剖、石蜡包埋及切片机切片，以及免疫组织化学实验流程。最后，本文还介绍了利用斑马鱼作为研究放射性标记分子（此处为[18F]-FDG）在体内分布情况的相关模型，并采用PET/CT进行检测的方法。

引言

高血糖是指血糖水平过高。尽管它可能反映一种急性应激状态，但高血糖也是一种常导致糖尿病诊断的状况，糖尿病是一种胰岛素分泌和/或作用抵抗的慢性疾病。2016年，全球患有糖尿病的成年人数量已达4.22亿，每年有150万人死于该疾病，使其成为一个重大的健康问题1。事实上，未受控制的糖尿病会导致多种生理紊乱，影响心血管系统、肾脏以及周围和中枢神经系统。

有趣的是，急性和慢性高血糖可能改变认知功能，并促进痴呆和抑郁症的发生2,3,4,5,6。此外，高血糖患者在发生缺血性脑卒中后，其功能预后、神经功能恢复及生存率均较差7,8,9,10,11。另有研究显示，高血糖/糖尿病通过影响神经干细胞活性以及新生神经元的分化、迁移和存活，进而影响成体神经发生——即新神经元生成的过程2,12。

与哺乳动物不同，硬骨鱼类（如斑马鱼）在整个大脑中均表现出强烈的神经发生活性，并在成年期展现出卓越的脑修复能力13,14,15,16。值得注意的是，这种能力的实现得益于神经干细胞/前体细胞（包括放射状胶质细胞和成神经细胞）的持续存在17,18,19。此外，斑马鱼近年来已逐渐成为研究代谢紊乱（包括肥胖症和高血糖/糖尿病）的模型生物20,21,22。

尽管斑马鱼是研究高血糖和神经发生的公认模型，但很少有研究探讨高血糖对脑内稳态和认知功能的影响12,23。为了确定高血糖对基础状态及损伤诱导的脑细胞增殖的影响，通过腹腔注射D-葡萄糖建立急性高血糖模型。此外，通过将斑马鱼浸入添加D-葡萄糖的水中复制慢性高血糖模型12。斑马鱼在科研中具有诸多优势：价格低廉、易于饲养、在发育早期阶段身体透明，且其基因组已被测序。在本研究背景下，斑马鱼还具备若干额外优势：（1）其生理过程与人类相似，使其成为生物医学研究的重要工具；（2）由于其广泛而强烈的神经发生活性，可用于快速评估高血糖对脑内稳态和神经发生的影响；（3）作为一种替代模型，有助于减少科研中哺乳动物的使用数量。最后，斑马鱼还可用于通过PET/CT技术测试放射性标记分子及潜在治疗剂的生物分布情况。

以下实验方案的总体目标是直观展示如何建立斑马鱼急性与慢性高血糖模型，利用斑马鱼评估高血糖条件下脑组织的重塑，并通过PET/CT监测放射性标记分子（此处为[18F]-FDG）。

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

方案

野生型成年斑马鱼（Danio rerio）在标准光照周期（14/10 小时明/暗）和温度（28 °C）条件下饲养。所有实验均遵循法国及欧洲共同体关于实验动物使用指南（86/609/EEC 和 2010/63/EU），并经当地实验动物伦理委员会批准。

1. 建立斑马鱼急性高血糖模型

  1. 通过将400 mg三卡因（MS-222）粉末溶解于97.9 mL水中和2.1 mL 1 M Tris/HCl缓冲液（pH 9）中，配制三卡因储备液。调节pH至7，分装后于-20 °C保存。
  2. 取5 mL三卡因储备液加入100 mL鱼用水中，配制成成年斑马鱼麻醉液（终浓度：0.02%三卡因）。
  3. 将一条斑马鱼（3至6月龄）从养殖缸转移至麻醉液中，直至其停止活动。
  4. 使用剪口的移液器取出鱼体，并用吸水纸迅速擦干。
  5. 称量鱼体重量。
  6. 准备一支含有D-葡萄糖溶于1×PBS中的注射器，按2.5 g/kg体重剂量注射50 µL D-葡萄糖溶液。
    注意：例如，一条0.6 g重的鱼将接受50 µL 3% D-葡萄糖/PBS溶液。
  7. 将鱼体翻转至背部朝上，将注射器针头插入腹腔内。
  8. 缓慢注入D-葡萄糖/PBS溶液，随后将鱼放回水中。
  9. 观察鱼体直至其完全恢复，然后将其放回养殖缸，直至达到进行血糖测定所需的时间。
    注意：注射后1.5小时测定血糖水平。

2. 建立斑马鱼慢性高血糖模型

  1. 准备一个2升的清洁鱼用水水箱。
  2. 将40 g D-葡萄糖溶解于2升鱼用水中，使D-葡萄糖终浓度为111 mM。
  3. 将5至7条成年斑马鱼浸入含D-葡萄糖的水中。
  4. 每2天更换一次含D-葡萄糖的鱼用水，以避免细菌或其他微生物的生长。
  5. 经过14天处理后，在测量血糖水平前，将鱼短暂放入清水中，以去除体外残留的D-葡萄糖。

3. 斑马鱼血糖水平的测定

  1. 用冰覆盖鱼类以实现快速安乐死。
    注意：不要使用过量的三卡因（tricaine），因为它会引起血糖水平的显著波动。不要将鱼在冰中放置过久，否则会导致血液凝固。
  2. 用吸水性纸巾擦拭鱼体，彻底去除水分，以避免在测量血糖时造成血液稀释。
  3. 使用解剖镊摘除一只眼睛，并等待眼窝充满血液。
  4. 将血糖试纸插入血糖仪中，然后将试纸插入眼窝内。
  5. 测量血糖水平。

4. 高血糖后脑细胞增殖的分析

  1. 溶液与缓冲液：要求与制备
    1. 通过将100 mL 10x PBS加入900 mL蒸馏H₂O中，配制1 L的1x PBS2O (dH2O）并混匀。
    2. 用0.2%去垢剂配制1× PBS缓冲液（PBS-T；参见材料表）。
      注意：配制 1 L PBS-T 时，加入 2 mL 去垢剂（参见 材料表) 加至 1 L PBS 中。
    3. 配制乙醇梯度溶液（100% × 2、95%、85%、70%、50% 和 30%）以及 0.85% NaCl 溶液。
    4. 制备封闭缓冲液：含0.5%至1%脱脂奶粉的PBST缓冲液。
      注意：配制 200 mL 封闭缓冲液，需将 2 g 脱脂奶粉加入 200 mL PBST 中。
    5. 配制抗原修复缓冲液：柠檬酸钠。
      注意：配制 1 L 柠檬酸钠缓冲液时，将 2.94 g 二水合柠檬酸三钠盐加入 1 L 去离子水中20. 定容至 1 L 前，调节 pH 至 6。
    6. 配制4%多聚甲醛-PBS缓冲液，将4 g多聚甲醛加入100 mL 1×PBS中，在58–60 °C下加热并搅拌至完全溶解。
  2. 免疫组织化学样品制备：固定与脱水
    1. 测量血糖水平后，从鳃后方切断，将头部与身体分离。
      注意：或者，可直接取出脑组织并冷冻，用于其他实验，例如 mRNA 提取。
    2. 在4%多聚甲醛（溶于PBS，PFA-PBS）中，4 °C下固定头部过夜。
    3. 第二天，用 PBS 简短清洗头部。
    4. 在显微镜下小心解剖脑组织。用 PBS 冲洗固定后的头部，并用针将头部固定在解剖显微镜下。用镊子去除眼睛和颅骨顶部。小心取出脑组织并置于 1× PBS 中。
    5. 依次用1×PBS洗涤固定脑组织30分钟，0.85% NaCl洗涤30分钟，70% EtOH/0.85% NaCl（v/v）洗涤15分钟，70% EtOH洗涤15分钟（两次），85% EtOH洗涤20分钟，95% EtOH洗涤20分钟，100% EtOH洗涤20分钟（两次）。最后在100% EtOH溶液中过夜孵育。
      注意：脱水后的脑组织可在4 °C条件下于100%乙醇中保存数月，再进行石蜡包埋。
  3. 免疫组织化学样品制备：石蜡包埋组织的制备
    1. 将脑组织放入小玻璃烧杯中。
      注意：请勿使用塑料容器，因为甲苯可能损坏某些塑料。
    2. 除去乙醇，并用甲苯替代，以确保脑组织完全浸入甲苯中。用甲苯进行两次，每次30分钟的浸泡。
    3. 除去甲苯，将脑组织放入包埋盒中。将封闭的包埋盒置于58–60 °C的熔融石蜡系列烧杯中（每个烧杯中30分钟）。打开包埋钳加热装置。完成石蜡浸透后，取出包埋盒，将少量液态石蜡倒入模具中。
    4. 将融化的石蜡倒入模具中，并将脑组织放入其中。使用预热的包埋镊子，以脑组织的前后方向为参考，调整其位置。将模具置于包埋机的冷却部位，使石蜡凝固。
    5. 出于技术原因，将脑组织沿前后轴摆放。脱模后修整石蜡块，并将其固定于包埋盒中，确保熔化的石蜡方向正确，以便进行横切面切片。
    6. 将石蜡包埋块插入切片机的臂架中。先切去50 µm厚的切片，直至暴露出脑组织样本层面。修整石蜡块以形成梯形切面，并将切片厚度调整为7 µm。使用毛笔收集石蜡带，并将其置于黑色纸张上。每隔3至4个切片，轻轻切割一次。
    7. 将载玻片置于加热板上，并用去离子水覆盖2哦，水。
    8. 将切好的带状组织轻轻置于水面上。当石蜡带充分展开或铺平后，用吸水纸吸去水分。最后几滴水用机械方法去除。将载玻片上的水去除后，置于约30–40 °C的加热板上干燥至少3小时。
  4. 免疫组织化学实验步骤
    1. 将切片依次放入三个盛有二甲苯的容器中，每个容器7分钟，以去除石蜡。
    2. 将切片置于两个盛有100%乙醇的容器中，每容器中孵育2分钟，随后依次放入95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇和30%乙醇中，各30秒。最后将切片短暂放入dH₂O中2O 和 PBS 中各洗涤两次，每次 5 分钟。
    3. 将切片置于柠檬酸盐缓冲液中，在微波炉中孵育（500 W，2 分钟），直至缓冲液开始沸腾。室温下静置 15 分钟，使切片自然冷却。
    4. 用 PBST 洗涤三次，每次 5 分钟，然后在含 1% 脱脂奶粉的 PBST 中封闭 45 分钟。加入一抗，4℃孵育过夜（例如 增殖细胞核抗原（PCNA）用于增殖细胞染色；以封闭缓冲液按1/100稀释）即 PBST，1% 脱脂牛奶
    5. 用 PBST 洗涤三次，每次 5 分钟，然后将切片与适当的二抗在室温下孵育 90 分钟（例如 山羊抗小鼠 Alexa Fluor 488（1:200）用封闭缓冲液稀释，并加入 DAPI（1:500）。
    6. 用PBST洗涤三次，每次5分钟，然后用荧光封片剂（见材料表）封片。
    7. 使用落射荧光显微镜和/或共聚焦显微镜分析染色结果。
    8. 在至少三只不同动物的兴趣区域中，对至少连续三个脑切片进行脑细胞增殖的定量分析。
      注意：或者，可按照先前所述方法，将脑组织包埋在琼脂糖中，随后进行振动切片和游离漂浮免疫组织化学。24.
  5. 研究高血糖对脑修复机制的影响
    注意：也可在端脑刺伤损伤后，按照先前所述方法，在急性与慢性高血糖条件下进行脑修复的研究。24,25,26简要地：
    1. 用三卡因麻醉成年斑马鱼。
    2. 将鱼置于解剖显微镜下并打开光源。
    3. 用一只手握住鱼。
    4. 用另一只手将一支30 G注射器垂直插入颅骨，进入右侧端脑半球的内侧区域。
    5. 将鱼放回新鲜的鱼用水、添加D-葡萄糖（111 mM）的水或对照鱼用水中。让鱼在损伤后存活7天。
      注意：其余步骤请参见第4步。

5. 通过PET/CT成像斑马鱼中放射性标记分子的生物分布：氟脱氧葡萄糖（[18F]-FDG）用于分析葡萄糖代谢

  1. 准备一个含有20 MBq [18F]-FDG生理盐水溶液的50 µL注射器。
  2. 将注射器放置在辐射防护屏后。
  3. 使用三卡因麻醉成年斑马鱼。
  4. 将鱼放置在辐射防护屏后。
  5. 将[18F]-FDG注射至腹腔内。用一小片纸巾擦拭注射部位，以防止检测到可能从鱼体腹部渗出的残留[18F]-FDG。
  6. 使用放射性同位素活度计测量注射器及纸巾上剩余的放射性活度，以计算确切的注射剂量。
  7. 将鱼置于一片新的、浸有三卡因的小型吸水纸上并轻轻包裹。将鱼连同吸水纸一起放置在PET/CT成像仪的载物床上。
  8. 将载物床插入PET/CT成像系统，并启动数据采集。
  9. 继续进行PET/CT数据采集。
  10. 操作结束后，将鱼放回少量新鲜鱼水中。
    注：或者，在注射[18F]-FDG后，可将鱼放回少量新鲜水中静置10分钟至1小时，以促进[18F]-FDG的扩散，之后再次麻醉鱼体以进行PET/CT成像。

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

结果

采用本文所述方法，对成年斑马鱼进行腹腔注射D-葡萄糖（2.5 g/kg体重），注射后1.5小时，其血糖水平显著升高（图1A）。注射24小时后，D-葡萄糖处理组与PBS对照组斑马鱼的血糖水平相似12。对于慢性处理，将斑马鱼浸入含D-葡萄糖的水溶液（111 mM）中，连续处理14天后出现高血糖状态（图1B），该结果与先前研究一致12,22。

为了研究高血糖对脑细胞增殖的影响，在诱导斑马鱼急性及慢性高血糖后，对其脑组织进行了PCNA免疫组织化学检测。尽管急性高血糖并未影响脑细胞的增殖12，但慢性高血糖显著降低了脑室周围神经干细胞的...

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

讨论

本研究描述了在斑马鱼中建立高血糖急性和慢性模型的多种方法。这些方法的主要优势在于：（1）可减少研究中使用的哺乳动物数量；（2）操作简便且实施快速；（3）经济高效。因此，此类模型可用于在大量动物中研究高血糖对多种生理过程的影响，包括动脉粥样血栓形成、心血管功能障碍、视网膜病变、血脑屏障渗漏以及稳态和再生性神经发生。本文详细介绍了在正常或损伤诱导条件下，开展高血糖对脑细胞增殖影响研究的具体操作流程。

慢性高血糖处理的一个关键局限性在于，在某些实验中，部分斑马鱼在长期浸入D-葡萄糖水（111 mM，持续14天）后并未表现出高血糖。Dorsemans及其同事（2016年）此前估计，有反应和无反应的鱼类比例分别为83%和17%。这种差异可能与个体鱼的年龄、性别以及通过生成更多胰腺β细胞来代偿高血糖的能力不同所致的易感性差异有关34,35。对于急性高血糖模型，注射后1.5小时血糖水平较为均一，表明该方法具有良好的可重复性。

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

披露

未披露任何潜在的利益冲突。

致谢

我们非常感谢留尼汪大学数字应用司（DUN）对视频的编辑工作（特别是 Jean-François Février、Eric Esnault 和 Sylvain Ducasse），感谢 Lynda-Rose Mottagan 提供配音，Mary Osborne-Pellegrin 对配音进行校对，以及感谢 CYROI 平台的支持。本研究得到了留尼汪大学（研究质量奖金、激励机制项目）、留尼汪大区议会、欧洲联盟（CPER/FEDER）以及 Philancia 协会资助项目的资助。ACD 获得了法国国民教育、高等教育与研究部和留尼汪大学（博士合同）提供的博士后奖学金资助。

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
1 mL 鲁尔锁注射器BD, USA309628
4',6'-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）Sigma-Aldrich, GermanyD8417
7 mL 小型平口实验室容器Dutscher, France080171
D-葡萄糖Sigma-Aldrich, Germany67021
数码相机Life Sciences, JapanHamamatsu ORCA-ER
一次性底模 Simport, CanadaM475-2
驴抗兔 Alexa Fluor 488Life Technologies, USAA21206
包埋中心Thermo Scientific, USAShandon Histocentre 3
荧光显微镜Nikon, JapanEclipse 80i
氟脱氧葡萄糖（18F-FDG）Cyclotron, France
血糖仪测试条LifeScan, FranceOne-Touch 143 Ultra
羊抗鼠 Alexa Fluor 594Life Technologies, USAA11005
活体成像系统TriFoil Imaging, CanadaTriumph Trimodality 
切片机Thermo Scientific, USAMicrom HM 355 S
单克隆小鼠抗PCNA抗体DAKO, USA克隆 PC10
多聚甲醛（PFA）Sigma-Aldrich, GermanyP6148-500G
多克隆兔抗GFAP抗体DAKO, USAZ033429
载玻片干燥台Electrothermal, USAMH6616
氯化钠Sigma-Aldrich, GermanyS9888
柠檬酸三钠二水合物 Prolabo, France27833.294
无菌针头BD Microlance 330 G 1/2 ; 0.3 mm× 13 mm
学生型 Dumont #5 镊子Fine Science Tools91150-20
学生外科剪刀Fine Science Tools91400-14
Superfrost Plus Gold 载玻片Thermo Scientific, USAFT4981GLPLUS
手术显微镜Leica, FranceM320-F12
组织包埋盒Simport, CanadaM490-10
组织包埋介质LeicaBiosystems, USA39602004
甲苯Sigma-Aldrich, Germany244511
三卡因 MS-222Sigma-Aldrich, GermanyA5040
吐温 X-100Sigma-Aldrich, GermanyX100-500 mL
Vectashield 封片剂 Vector Laboratories, USAH-1000
二甲苯Sigma-Aldrich, Germany534056
鱼类品系AB
磷酸盐缓冲盐水（10X PBS），pH 7.4（配制1升）配制10X PBS时，加入以下盐类，并用蒸馏水定容至1升 
氯化钾（分子量：74.55 g/mol）：2.00 gSigma-Aldrich, Germany746436
磷酸二氢钾（分子量：136.09 g/mol）：2.40 gSigma-Aldrich, Germany795488
氯化钠（分子量：58.44 g/mol）：80.00 g Sigma-Aldrich, GermanyS9888
磷酸氢二钠（分子量：141.96 g）：14.40 gSigma-Aldrich, Germany795410

参考文献

  1. W. Diabetes. , Available from: http://www.who.int/diabetes/en (2016).
  2. Ho, N., Sommers, M. S., Lucki, I. Effects of diabetes on hippocampal neurogenesis: links to cognition and depression. Neurosci Biobehav Rev. 37 (8), 1346-1362 (2013).
  3. Cukierman, T., Gerstein, H. C., Williamson, J. D. Cognitive decline and dementia in diabetes--systematic overview of prospective observational studies. Diabetologia. 48 (12), 2460-2469 (2005).
  4. Gaudieri, P. A., Chen, R., Greer, T. F., Holmes, C. S. Cognitive function in children with type 1 diabetes: a meta-analysis. Diabetes Care. 31 (9), 1892-1897 (2008).
  5. Brismar, T., et al. Predictors of cognitive impairment in type 1 diabetes. Psychoneuroendocrinology. 32 (8-10), 1041-1051 (2007).
  6. Ojo, O., Brooke, J. Evaluating the Association between Diabetes, Cognitive Decline and Dementia. Int J Environ Res Public Health. 12 (7), 8281-8294 (2015).
  7. Capes, S. E., Hunt, D., Malmberg, K., Pathak, P., Gerstein, H. C. Stress hyperglycemia and prognosis of stroke in nondiabetic and diabetic patients: a systematic overview. Stroke. 32 (10), 2426-2432 (2001).
  8. Stead, L. G., et al. Hyperglycemia as an independent predictor of worse outcome in non-diabetic patients presenting with acute ischemic stroke. Neurocrit Care. 10 (2), 181-186 (2009).
  9. Kagansky, N., Levy, S., Knobler, H. The role of hyperglycemia in acute stroke. Arch Neurol. 58 (8), 1209-1212 (2001).
  10. Gilmore, R. M., Stead, L. G. The role of hyperglycemia in acute ischemic stroke. Neurocrit Care. 5 (2), 153-158 (2006).
  11. Desilles, J. P., et al. Diabetes mellitus, admission glucose, and outcomes after stroke thrombolysis: a registry and systematic review. Stroke. 44 (7), 1915-1923 (2013).
  12. Dorsemans, A. C., et al. Impaired constitutive and regenerative neurogenesis in adult hyperglycemic zebrafish. J Comp Neurol. , (2016).
  13. Schmidt, R., Strähle, U., Scholpp, S. Neurogenesis in zebrafish - from embryo to adult. Neural Dev. 8, 3(2013).
  14. Kizil, C., Kaslin, J., Kroehne, V., Brand, M. Adult neurogenesis and brain regeneration in zebrafish. Dev Neurobiol. 72 (3), 429-461 (2012).
  15. Grandel, H., Brand, M. Comparative aspects of adult neural stem cell activity in vertebrates. Dev Genes Evol. 223 (1-2), 131-147 (2013).
  16. Lindsey, B. W., Tropepe, V. A comparative framework for understanding the biological principles of adult neurogenesis. Prog Neurobiol. 80 (6), 281-307 (2006).
  17. März, M., et al. Heterogeneity in progenitor cell subtypes in the ventricular zone of the zebrafish adult telencephalon. Glia. 58 (7), 870-888 (2010).
  18. Chapouton, P., Jagasia, R., Bally-Cuif, L. Adult neurogenesis in non-mammalian vertebrates. Bioessays. 29 (8), 745-757 (2007).
  19. Lindsey, B. W., Darabie, A., Tropepe, V. The cellular composition of neurogenic periventricular zones in the adult zebrafish forebrain. J Comp Neurol. 520 (10), 2275-2316 (2012).
  20. Sarras, M. P., Intine, R. V. Use of Zebrafish as a Disease Model Provides a Unique Window For Understanding the Molecular Basis of Diabetic Metabolic Memory. Zebrafish. , 2611-2619 (2012).
  21. Oka, T., et al. Diet-induced obesity in zebrafish shares common pathophysiological pathways with mammalian obesity. BMC Physiol. 10, 21(2010).
  22. Capiotti, K. M., et al. Persistent impaired glucose metabolism in a zebrafish hyperglycemia model. Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol. 171, 58-65 (2014).
  23. Capiotti, K. M., et al. Hyperglycemia induces memory impairment linked to increased acetylcholinesterase activity in zebrafish (Danio rerio). Behav Brain Res. 274, 319-325 (2014).
  24. Schmidt, R., Beil, T., Strähle, U., Rastegar, S. Stab wound injury of the zebrafish adult telencephalon: a method to investigate vertebrate brain neurogenesis and regeneration. J Vis Exp. (90), e51753(2014).
  25. Diotel, N., et al. Effects of estradiol in adult neurogenesis and brain repair in zebrafish. Horm Behav. 63 (2), 193-207 (2013).
  26. Rodriguez Viales, R., et al. The helix-loop-helix protein id1 controls stem cell proliferation during regenerative neurogenesis in the adult zebrafish telencephalon. Stem Cells. 33 (3), 892-903 (2015).
  27. Kaslin, J., Ganz, J., Brand, M. Proliferation, neurogenesis and regeneration in the non-mammalian vertebrate brain. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 363 (1489), 101-122 (2008).
  28. Kroehne, V., Freudenreich, D., Hans, S., Kaslin, J., Brand, M. Regeneration of the adult zebrafish brain from neurogenic radial glia-type progenitors. Development. 138 (22), 4831-4841 (2011).
  29. Alunni, A., Bally-Cuif, L. A comparative view of regenerative neurogenesis in vertebrates. Development. 143 (5), 741-753 (2016).
  30. März, M., Schmidt, R., Rastegar, S., Strähle, U. Regenerative response following stab injury in the adult zebrafish telencephalon. Dev Dyn. 240 (9), 2221-2231 (2011).
  31. Wullimann, M., Rupp, B., Reichert, H. Neuroanatomy of the zebrafish brain: A topological atlas. , Birhaüser Verlag. Basel, Switzerland. 1-144 (1996).
  32. Pellegrini, E., et al. Identification of aromatase-positive radial glial cells as progenitor cells in the ventricular layer of the forebrain in zebrafish. J Comp Neurol. 501 (1), 150-167 (2007).
  33. Zupanc, G. K., Hinsch, K., Gage, F. H. Proliferation, migration, neuronal differentiation, and long-term survival of new cells in the adult zebrafish brain. J Comp Neurol. 488 (3), 290-319 (2005).
  34. Sarras, M. P., Intine, R. V. Use of Zebrafish as a Disease Model Provides a Unique Window For Understanding the Molecular Basis of Diabetic Metabolic Memory. iConcept Press. , 2611-2619 (2013).
  35. Connaughton, V. P., Baker, C., Fonde, L., Gerardi, E., Slack, C. Alternate Immersion in an External Glucose Solution Differentially Affects Blood Sugar Values in Older Versus Younger Zebrafish Adults. Zebrafish. , (2016).
  36. Prasad, S., Sajja, R. K., Naik, P., Cucullo, L. Diabetes Mellitus and Blood-Brain Barrier Dysfunction: An Overview. J Pharmacovigil. 2 (2), 125(2014).

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

重印与许可

申请许可以重复使用本 JoVE 文章的文本或图表

申请许可

标签

PET CT

相关文章