神经发育复检新生幼鼠

摘要

行为测试是确定脑损伤后的结果的黄金标准，并可以识别发育障碍的婴儿和儿童的存在。神经反射是这些异常的早期指标。在新生儿啮齿动物很容易地完成发育反射测试的主机进行了开发和说明。

摘要

神经发育反射测试是在临床实践中通常使用的，以评估中枢神经系统的成熟。神经反射也被称为原始反射。他们是敏感的，并与后来的结果是一致的。反射异常被描述为不存在，持久性，再现，或延迟反射，其是处于对神经发育障碍的高风险的婴儿的预测指标。神经发育障碍，如脑瘫的动物模型，通常表现出发育异常反射，如将人类婴儿进行观察。所描述的技术评估各种新生大鼠神经发育反射的。神经反射测试提供了研究者的测试方法，是不是在如此年轻的动物，否则可用。这里介绍的方法，目的是协助调查人员在审查新生大鼠的发育里程碑检测早发BR的方法AIN损伤和/或确定治疗性干预的有效性。这里介绍的方法，目的是为研究者提供的一般准则。

引言

神经反射，或发展的里程碑，是对人类新生儿和婴儿最早使用的评估项目之一。神经反射是展示脑干和脊髓反射不由自主的和重复的动作。更高皮质网络，其特征在于演进迁移，髓鞘形成，和突触的成熟促进自愿控制和皮质抑制。在中枢神经系统演进的正常进展的改变可以破坏大脑发育，产生异常皮质布线，功能，和髓鞘形成，神经发育造成反射延迟或缺席。在神经发育残疾的高风险与人婴儿通常表现出异常的早期反射。反射异常可呈现在采集，不存在延迟，延长的存在，或再现以后的生活中，并且预测发育障碍的。 ^1，2因此，它模仿神经发育障碍的实验模型反射延迟是很重要的。

鼠害通常用作实验模型。出生的时候幼鼠是altricial，因此太不成熟承担具体的或复杂的运动，感觉和/或认知行为的任务。在这方面，他们的发育不成熟同时涉及他们的身体和器官的发育。老鼠是天生无毛为不能thermoregulate，是盲目的，无法行走。参照大脑发育，皮质相当成熟出生后发生。新生大鼠幼崽（出生当天称为1日龄; PD1）已经被建议以达到脑成熟水平是类似于23早产人脑 - 妊娠28周，而PD7-10幼仔相当于近长期人类的大脑。 ^{3，4，5，6<....}

方案

动物护理和使用委员会，健康科学阿尔伯塔大学批准了所有动物研究。

注意:虽然此协议可以适用于其他物种和品系，该协议是为Long-Evans大鼠写的。这些大鼠已经显示出具有相对于其他啮齿动物品系优越马达性能和视觉敏锐度。 ^25，26，用于定时怀孕，膳食补充，产妇炎症，和神经发育反射的协议如下。

1.实验动物

1. 当大鼠到达动物住房设施，从一天或两天的任何交互不要让他们适应新的环境。继习服，每天处理的老鼠大约五天，或者当老鼠不再显示压力的迹象。人类引起的压力可以改变测试结果和乐广告流产。
2. 一旦老鼠是舒适，养殖开始。放置两个女性和在双层养殖笼一个雄性大鼠（H = 38厘米，1800厘米²面积）过夜（3 PM -上午08点）。这些笼预防应激和拥挤。在早晨，用移液管，冲洗雌性大鼠用大约0.25毫升盐水阴道。将溶液转移到一个离心管中。
3. 两个女性和男性放回各自的传统笼养。
4. 查看在光学显微镜（100倍）下在1.2节中收集的溶液，以确定将大鼠经历其发情周期的阶段，以及是否精子都存在。如果有精子，记录日期为胚胎天（E1）（ 图1）。如果怀孕，给女性她自己在E14的笼子。

结果

本实验设计的时间轴示于图2。 ^30种的方法和结果之前已公布。 ³⁰本研究的目的是评估膳食补充妊娠期间花椰菜芽和断奶前周期是否保护， 在子宫内暴露于LPS诱导的神经发育由延迟的后代。定时怀孕的大鼠给予生理盐水（对照组，100μL）或LPS（200微克/千克在100μL无菌生理盐水稀释）上E19和E20每12小时腹膜内注射。随机选择的怀孕水坝也分别给予干燥花椰菜芽（200毫克/天）从E14到PD21的膳食补充。 LPS被用来模仿母体炎症和西兰花嫩芽被赋予作为一个潜在的治疗干预，以保护后代。幼鼠在E23天生的（ 表1）。上PD3开始，经历幼仔神经发育反射的电池和采集反射的被定义为天反射出现（ 图3， 表1）。请参阅更详细的参考文章。 ^三十

讨论

神经反射测试是不正常的皮质发育和成熟的预测指标，这可能是情况下，其中明显的神经病理学并不明显意义。在神经发育测试，关键是要确保幼崽在同一时间每天检查。鼠是夜间活动，因此，如果测试是在一天中的不同时间执行他们的昼夜节律可能会改变性能。 ³⁴测试应在安静的房间内完成为大声喧哗，可以加应力的幼崽。 ^35只幼仔需要至少1个小时，以适应新的环境中，由于传输，人工处理，和新颖的设置可以在幼仔诱导应力。 ^35只幼仔还需要直接加热灯的下方或在加热垫的测试。仔兔年轻，能力稍逊，他们能够thermoregulate。 ³⁶由于这个原因，幼仔给出15秒和30秒用于分别执行上PD6 PD3上扶正和步态。 ³⁶此外，控制幼仔不应增长出生的时候限定，以重量表示的混杂因素。窝也应扑杀至8 - 10提供等于养料和性的表示。一旦幼仔诞生了，它允许一天的老鼠形成与大坝的结合，以预防孕产妇忽视是非常重要的。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Breeding
移液管	Fisherbrand	12-711-9AM	用于阴道冲洗。
无菌盐水	Hospira	7983254	在阴道冲洗期间收集细胞的溶液。
400 和微型;L 微量离心管	Fisherbrand	05-408-120	用于盛放盐水溶液。
光学显微镜		Leica Leica ATC 2000	用于观察盐溶液。可以是实验室中使用的任何光学显微镜。
载玻片	Fisherbrand	12-552-5	将盐水溶液置于载玻片上。可以是实验室中使用的任何载玻片。
盖玻片	Fisherbrand	12-545-F	盖玻片。可以使用实验室中使用的任何盖玻片。
饮食 补充剂
西兰花芽种子	Mumm's 发芽种子		西兰花芽种子是在实验室订购和种植的。
台面种子发芽盒	Mumm's Sprouting Seeds		一个盒子用于在收获前发芽和生长种子。
250 mL 烧杯			烧杯用于浸泡种子。可以使用任何适合的尺寸烧杯。
母体炎症
脂溶脂糖 （LPS）	Sigma	L3129	用于模拟母体炎症的内毒素。
1 mL 注射器	BD 注射器	309659	用于注射怀孕的大鼠。
规格 （30 G x 1/2）	BD PrecisionGlide 针	305106	使用最小的针头以避免疼痛和不适。
无菌盐水（0.9% 氯化钠，USP）	Hospira		盐水用于溶解 LPS。
Weights
Scale	Denver Instrument		用于记录重量。可以是实验室中使用的任何刻度，小数点后 2 位。
神经发育反射
细钝棒			可以是回形针或牙签。这是为了抓握前肢和后肢。
圆形滤纸	Whatman	1001 150	直径为 15 厘米的纸，用于步态分析。
计时器	Fisher Scientific	06-662-51	用于计时分配给扶正和步态的时间。
钝面			可以是桌子的边缘。这是为了放置后肢和避开悬崖。
泡沫着陆			当幼崽进行加速扶正时。
录像机	Sony	VCT-D580RM	记录所有反射测试。必须能够以 1/1,000 fps 的
Bell			录制 用于听觉惊吓。
加热灯或垫			保持接受检查的幼犬的体温。