该协议描述了在细胞分化和非洲爪蟾胚胎发育过程中调节丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性的光遗传策略。这种方法允许哺乳动物细胞培养物和多细胞活生物体如非洲爪蟾胚胎中具有高空间和时间分辨率的可逆激活MAPK信号通路。
方法文章
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 玻璃盖玻片 | VWR | 48393 230 | 活细胞成像底 |
| 物盖玻片架 | Newcomer Supply | 6817B | 盖玻 |
| 片洗涤剂支架 | ThermoFisher | 16 000 104 | 用于清洁盖玻片 |
| 硼酸 | Sigma-Aldrich | B6768-500G | 用于制造PLL缓冲液 |
| 四硼酸二钠 | Sigma-Aldrich | 71996-250G | 用于制造 PLL 缓冲液 |
| 塑料烧杯 | Nalgene | 1201-1000 | 用于清洁盖玻片 |
| 氢氧化钠 | Sigma-Aldrich | 221465-2.5KG | 用于调节pH |
| 值 聚-L-赖氨酸氢溴酸盐 | Sigma-Aldrich | P1274-500MG | 用于涂层盖玻片 |
| 焦碳酸二乙酯(DEPC)处理过的水 | ThermoFisher Scientific | 750024 | 用于DNA制备 |
| 盖玻片 镊子 | Ted Pella | 5645 | 盖玻片处理 |
| 组织切片皿 | Thermofisher | 12565321 | 细胞培养皿 |
| 无菌离心管 | ThermoFisher | 12-565-271 | 缓冲液储存 |
| 转染试剂 | ThermoFisher | R0534 | 转染 |
| CO2 非依赖性培养基 | ThermoFisher | 18045088 | 用于活细胞成像 |
| 聚二甲基硅氧烷 (PDMS) | Ellsworth Adhesives | 184 SILELAST KIT 0.5KG | 形成细胞腔室 |
| 质粒大提试剂盒 | Qiagen | 12965 | 质粒制备 |
| DMEM 培养基 | ThermoFisher | 11965-084 | 细胞培养培养基成分 |
| F12K 培养基 | ThermoFisher | 21127022 | 细胞培养培养基成分 |
| 马血清 | ThermoFisher | 16050122 | 细胞培养培养基成分 |
| 胎牛血清 | Signa-Aldrich | 12303C-500 mL | 细胞培养培养基成分 |
| 青霉素-链霉素-谷氨酰胺 | ThermoFisher | 10378016 | 细胞培养培养基成分 |
| 胰蛋白酶 (0.25%)、酚红 | ThermoFisher Scientific | 15050065 | 用于哺乳动物细胞解离 |
| 琼脂糖 | Fisher Scientific | BP1356-100 | 用于 DNA 制备 |
| Ficoll PM400 | GE Heathcare Life Sciences | 17-5442-02 | 用于胚胎缓冲液 |
| L-半胱氨酸盐酸盐一水合物 | Sigma-Aldrich | 1.02839.0025 | 卵母细胞制备 |
| ApaI | ThermoFisher | FD1414 | 用于质粒 |
| Dnase I | ThermoFisher | AM2222 | 用于在 体外 转录测定中去除 DNA 模板 |
| 索引匹配材料(浸油) | Thorlabs | MOIL-20LN | 用于匹配样品基板和物镜之间的索引 |
| 蓝色 LED | Adafruit | 301 | 用于光遗传学刺激的光源 |
| 电阻器套件 | Amazon | EPC-103 | 限流电阻器 |
| 铝箱 | BUD Industries | AC-401 | 灯箱 |
| 面包板 | Jekewin | 837654333686 | 用于制作 LED 阵列 |
| 连接线 | Electronix Express | 27WK22SLD25 | 用于制作 LED 阵列 |
| 继电器模块 | Jbtek | SRD-05VDC-SL-C | 用于间歇性光控制 |
| 直流电源 | TMS | 直流电源-LW-(PS-305D) | LED |
| 硅电源 电源 头部 | Thorlabs | S121C | 用于光强测量 |
| 功率计 | Thorlabs | PM100D | 用于光强度测量 |
| 显微镜 | Leica Biosystems | DMI8 | 用于活细胞成像 |
| 生物安全柜 | ThermoFisher | 1300 Series A2 | 用于哺乳动物细胞处理 |
| CO2 培养箱 | ThermoFisher | Isotemp | 用于哺乳动物细胞培养 |
| 体视显微镜 | Leica | M60 | 用于胚胎显微作 |
| 显微注射器 | Narishige | IM300 | 用于胚胎显微注射 |
| 微量移液器拉拔器 | Sutter Instruments | P87 | 拔针器 |
| 体外 转录试剂盒 | ThermoFisher | AM1340 | 用于 体外 转录。该试剂盒包括无核酸酶水、SP6 RNA 聚合酶、核糖核苷酸混合物、帽类似物、胆酸锂沉淀溶液和离心柱 |
| RNA 纯化试剂盒 | Qiagen | 74104 | 硅胶膜离心柱,用于纯化合成的 RNA |
| 对流烘箱 | MTI 公司 | EQ-DHG-9015 | PDMS 固化 |
| 离心混合器和特氟龙容器 | THINKY | AR310 | 用于混合 PDMS |
| 硅片 | UniversityWafer | 452 | 用于制造 PDMS 的底座 设备 |
| 刀片 | Techni Edge | 01-801 | 用于切割 PDMS |
| 毛细管玻璃 | 萨特仪器 | BF100-58-10 | 用于制造注射针。nbsp; |
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