更正：一只小鼠，两种培养：单只小鼠两个神经发生区成体神经干细胞的分离与培养

摘要

对视频《一只小鼠，两种培养：从小鼠个体的两个神经发生区分离与培养成年神经干细胞》作出更正。许多微（µ）符号被意外更改为毫（m）符号：需修正“实验方案”中的 1.1、1.3、3.6、3.7、6.2、6.6、8.1、9.1.6、9.2.2 和 9.2.5 节，以及“结果”部分的图 1 说明。

摘要

对视频《一只小鼠，两种培养：单只小鼠两个神经发生区成体神经干细胞的分离与培养》（One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice）进行了更正。此前多个微（µ）符号被误改为毫（m）符号，需修正以下部分：方案中的 1.1、1.3、3.6、3.7、6.2、6.6、8.1、9.1.6、9.2.2 和 9.2.5 节，以及结果部分的图1说明。

第1.1节实验方案已从以下内容更改：

实验开始前至少两天，准备用于贴壁单层培养的多聚-D-赖氨酸（Poly-D-lysine, PDL）/层粘连蛋白（Laminin）包被培养板。制备包被培养孔或培养瓶时，加入足量的PDL（10 mg/ml，溶于dH₂O中），使其完全覆盖培养表面。₂O）包被表面，室温孵育过夜。移除溶液，用 dH₂O 洗涤培养皿三次。₂O. 室温晾干。加入层粘连蛋白（Laminin，5 mg/ml，溶于冷的DMEM:F12培养基），37 °C过夜孵育。去除层粘连蛋白溶液，立即使用包被板或于-20 °C保存备用。

至：

在开始实验前至少两天，准备用于贴壁单层培养的多聚-D-赖氨酸（PDL）/层粘连蛋白（Laminin）包被培养板。制备包被培养孔或培养瓶时，加入足量的PDL溶液（10 µg/ml，溶于去离子水dH₂O中），使其完全覆盖培养表面，并在室温下孵育过夜。弃去PDL溶液，用去离子水dH₂O洗涤培养器皿三次，随后静置晾干。加入层粘连蛋白溶液（5 µg/ml，溶于冷的DMEM:F12培养基中），于37 °C孵育过夜。孵育结束后弃去层粘连蛋白溶液，可立即使用包被好的培养板，或在加入层粘连蛋白后于-20 °C保存，待需要时取出使用。

方案第1.3节已从以下内容更改：

在解剖当天，通过将神经基础培养基与2% B27、1× GlutaMAX、2 µg/ml 肝素、50 单位/ml 青霉素/链霉素、20 ng/ml 纯化的鼠源性受体级表皮生长因子（EGF）以及20 ng/ml 重组牛成纤维细胞生长因子（FGF-2）混合，配制适量的培养基。将培养基在水浴中预热至37 °C。

至：

在解剖当天，通过将神经基础培养基与2% B27、1× GlutaMAX、2 mg/ml 肝素、50 单位/ml 青霉素/链霉素、20 ng/ml 纯化的鼠源性重组表皮生长因子（EGF）以及20 ng/ml 重组牛成纤维细胞生长因子（FGF-2）混合，配制适量的培养基。将培养基在水浴中预热至37 °C。

第3.6节实验步骤已从以下内容更改：

加入培养基至总体积为 5 ml，然后将细胞悬液通过 40 mm 筛网，以去除碎片和未解离的组织团块。

至：

加入培养基至总体积为 5 ml，将细胞悬液通过 40 µm 筛网，以去除碎片和未解离的组织团块。

第3.7节实验方案已从以下内容更改：

在 300 × g 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，并将所得沉淀重悬于 200 ml 生长培养基中。

至：

在 300 × g 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，并将所得沉淀重悬于 200 µl 培养基中。

第6.2节实验步骤已更改为：

加入50 ml Accutase，37 °C孵育2-3分钟（观察细胞是否变圆并脱落）。

至：

加入50 µl Accutase，37 °C孵育2-3分钟（观察细胞是否变圆并脱落）。

第6.6节实验步骤已从：

后续传代时，将细胞重悬于200 ml培养基中，使用血细胞计数板进行计数。按1 × 10⁴ 个细胞/cm²的密度接种于适当大小的包被培养孔或培养瓶中。

至：

后续传代时，将细胞重悬于 200 µl 培养基中，使用血细胞计数板计数，并按 1 × 10⁴ 个细胞/cm² 的密度接种至适当大小的包被培养板孔或培养瓶中。

第8.1节实验步骤已从：

将一只动物的解离后SVZ或DG组织用20 ml培养基稀释，使用10 ml多通道移液器，每孔加入200 µl，接种于96孔板中。

至：

将一只动物的解离后SVZ或DG组织用20 ml培养基稀释，使用10 ml多通道移液器，每孔接种200 µl，均匀接种于96孔板中。

第9.1.6节的实验方案已从以下内容更改：

取出10 ml细胞悬液，与等体积的台盼蓝混合，使用血细胞计数板进行活细胞计数。

至：

取10 µl细胞悬液，与等体积的台盼蓝混合，使用血细胞计数板进行活细胞计数。

第9.2.2节实验方案已从：

向每个需要传代的孔中加入 100 ml 的 0.05% 胰蛋白酶-EDTA，并在室温下孵育 3 分钟。

至：

向每个需要传代的孔中加入100 µl 0.05%胰蛋白酶-EDTA，于室温孵育3分钟。

第9.2.5节实验方案已从：

将含有解离后神经球的200 µl转移至含有1.5 ml生长培养基的24孔板的新孔中。在37 °C、5% CO₂条件下培养，直至形成次级神经球。

至：

将含有解离后神经球的200 µl液体转移至新的24孔板孔中，每孔预先加入1.5 ml培养基。在37 °C、5% CO₂条件下培养，直至次级神经球形成。

图1的描述已更新，原内容为：

图1. 成年小鼠前体细胞可培养为贴壁单层细胞（A）或神经球（B：侧脑室下区，C：齿状回）。比例尺为50 mm。

至：

图1. 成年小鼠前体细胞可培养为贴壁单层细胞（A）或神经球（B：侧脑室下区，C：齿状回）。比例尺为50 µm。

方案

对视频《一只小鼠，两种培养：单只小鼠两个神经发生区成年神经干细胞的分离与培养》One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice 进行了更正。多个微（µ）符号被误改为毫（m）符号，需修正以下部分：方案中的 1.1、1.3、3.6、3.7、6.2、6.6、8.1、9.1.6、9.2.2 和 9.2.5 节，以及结果部分的图1说明。

第1.1节实验方案已从以下内容更改：

在开始实验前至少两天，准备用于贴壁单层培养的多聚-D-赖氨酸（PDL）/层粘连蛋白（Laminin）包被板。制备包被板时，加入足量的PDL（10 mg/ml溶于dH₂O）以覆盖培养表面，于室温孵育过夜。移除溶液后，用dH₂O洗涤培养器皿三次，静置晾干。加入层粘连蛋白（5 mg/ml溶于冷DMEM:F12培养基），于37 °C孵育过夜。移除层粘连蛋白溶液后，可立即使用包被板，或在-20 °C保存带层粘连蛋白的包被板，待需要时取出使用。

至：

在开始实验前至少两天，准备用于贴壁单层培养的多聚-D-赖氨酸（PDL）/层粘连蛋白（Laminin）包被培养板。制备包被培养孔或培养瓶时，加入足量的PDL溶液（10 µg/ml，溶于dH₂O中）以覆盖表面，并在室温下孵育过夜。移除溶液后，用dH₂O洗涤培养器皿三次。静置使其自然风干。加入层粘连蛋白溶液（5 µg/ml，溶于冷的DMEM:F12培养基中），于37 °C孵育过夜。移除层粘连蛋白溶液后，可立即使用包被板，或在-20 °C条件下保留层粘连蛋白储存，待需要时取出使用。

第1.3节实验步骤已从：

在解剖当天，通过将神经基础培养基与2% B27、1× GlutaMAX、2 µg/ml 肝素、50 单位/ml 青霉素/链霉素、20 ng/ml 纯化的小鼠受体级表皮生长因子（EGF）以及20 ng/ml 重组牛成纤维细胞生长因子（FGF-2）混合，配制适量的培养基。将培养基在水浴中预热至37 °C。

至：

解剖当天，通过将神经基础培养基与2% B27、1× GlutaMAX、2 mg/ml 肝素、50 单位/ml 青霉素/链霉素、20 ng/ml 纯化的小鼠受体级表皮生长因子（EGF）以及20 ng/ml 重组牛成纤维细胞生长因子（FGF-2）混合，配制适量的培养基。将培养基在水浴中预热至37 °C。

第3.6节实验步骤已从：

加入培养基至总体积5 ml，将细胞悬液通过40 mm筛网过滤，以去除碎片和未解离的组织团块。

至：

加入培养基至总体积5 ml，将细胞悬液通过40 µm筛网过滤，以去除碎片和未解离的组织团块。

第3.7节实验步骤已从：

在 300 ×g 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，并将所得沉淀重悬于 200 ml 生长培养基中。

至：

在 300 × g 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，并将所得沉淀重悬于 200 µl 培养基中。

第6.2节实验步骤已从以下内容更改：

加入50 ml Accutase，在37 °C孵育2-3分钟（观察细胞是否变圆并脱落）。

至：

加入50 µl Accutase，37 °C孵育2-3分钟（观察细胞是否变圆并脱落）。

第6.6节实验方案已从：

后续传代时，将细胞重悬于 200 ml 生长培养基中，使用血细胞计数板进行计数。按 1 × 10⁴ 个细胞/cm² 的密度接种于适当大小的包被培养孔或培养瓶中。

至：

后续传代时，将细胞重悬于200 µl培养基中，使用血细胞计数板进行计数。按1 × 10⁴ 个细胞/cm²的密度接种于适当大小的包被培养孔或培养瓶中。

第8.1节实验步骤已从以下内容更改：

将一只动物的解离后SVZ或DG组织用20 ml培养基稀释，使用10 ml多通道移液器，每孔接种200 µl，分装至96孔板中。

至：

将一只动物的解离后SVZ或DG组织用20 ml培养基稀释，使用10 ml多通道移液器，每孔接种200 µl，均匀分配至96孔板中。

第9.1.6节的实验方案已从以下内容更改：

吸取10 ml细胞悬液，与等体积的台盼蓝混合，使用血细胞计数板进行活细胞计数。

至：

取10 µl细胞悬液，与等体积的台盼蓝混合，使用血细胞计数板进行活细胞计数。

第9.2.2节协议内容已从：

向每个需要传代的孔中加入 100 ml 的 0.05% 胰蛋白酶-EDTA，并在室温下孵育 3 分钟。

至：

向每个需要传代的孔中加入 100 µl 的 0.05% 胰蛋白酶-EDTA，并在室温下孵育 3 分钟。

方案第9.2.5节已更改为：

将含有解离后神经球的200 µl转移至一个新的24孔板孔中，该孔内已含有1.5 ml生长培养基。于37 °C、5% CO₂条件下孵育，直至次级神经球形成。

至：

将含有解离后神经球的 200 µl 溶液转移至新的 24 孔板孔中，每孔预先加入 1.5 ml 培养基。在 37 °C、5% CO₂ 条件下孵育，直至继代神经球形成。

图1的描述已从：

图1. 成年小鼠前体细胞可培养为贴壁单层细胞（A）或神经球（B：侧脑室下区，C：齿状回）。比例尺为50 mm。

至：

图1. 成年小鼠前体细胞可培养为贴壁单层细胞（A）或神经球（B：侧脑室下区，C：齿状回）。比例尺为50 µm。