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方法文章

用于大鼠的触屏持续注意力任务(SAT)

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DOI:

10.3791/56219

2017年9月15日

本文内容

摘要

持续性注意,即持续监控环境中间歇且不可预测的事件,是认知功能的关键方面。本文详细介绍了如何利用触摸屏操作箱检测大鼠的持续性注意能力。我们展示了雄性和雌性大鼠在该任务中表现相当,表明该方法适用于两性注意力研究。

摘要

持续性注意是指在较长时间内监控间歇性且不可预测事件的能力。这种注意过程支持认知的其他方面,并在某些神经发育性、神经精神和神经退行性疾病中受到破坏。因此,识别损害或改善持续性注意的机制在临床上具有重要意义。这类机制通常首先通过啮齿类动物模型发现。因此,已开发出多种用于测试啮齿类动物持续性注意的行为程序。其中一种方法由 McGaughy 和 Sarter(1995 年)首次描述,称为持续性注意任务(sustained attention task, SAT),训练大鼠区分信号试次(短暂的灯光呈现)与非信号试次。信号持续时间很短,因此需要集中注意力才能察觉。通过引入干扰刺激(例如闪烁的笼内灯)可进一步增加注意负荷。我们已将该任务改进用于触摸屏操作箱,其配置为在箱体一侧安装触摸屏,可用于呈现刺激并记录反应。本文详细阐述了我们在触摸屏操作箱中实施 SAT 的实验方案。此外,我们提供了雄性和雌性 Sprague-Dawley 大鼠在该任务中的标准行为表现指标。两性在该任务中表现相当,突显了其在注意研究中的适用性,尤其随着越来越多的研究人员在实验设计中纳入雌性啮齿类动物。此外,SAT 在日益普及的触摸屏操作箱中易于实施,进一步提升了其应用价值。

引言

从注意缺陷多动障碍(ADHD)到精神分裂症再到阿尔茨海默病,多种疾病均以注意力受损为共同特征1,2,3。其中,持续性注意力缺陷——即对间歇性且不可预测事件进行持续监控的能力下降——尤为突出,因为持续性注意力对于选择性注意、分配性注意以及其他认知过程至关重要4,5。即使在健康人群中,维持注意力困难也会对认知功能产生负面影响,损害日常活动能力6。因此,阐明持续性注意力的神经生物学基础及其失调机制,有助于开发改善认知功能的干预措施,从而惠及大量人群。

为了阐明参与正常与受损注意力的神经环路和分子机制,许多研究人员转向了非人动物模型,在这些模型中可以对执行注意力任务时的特定细胞群和分子过程进行操控。这一努力推动了多种操作性注意力任务的发展,可用于评估持续注意力能力7,8,9,10。其中一种范式由 McGaughy 和 Sarter(1995 年)开发,称为持续注意力任务(sustained attention task, SAT)。在 SAT 中训练的啮齿类动物必须区分信号试次(信号灯短暂闪烁)与非信号试次。通过引入视觉干扰物(闪烁的笼内灯)可提高注意力负荷10。SAT 中用于评估注意力的关键参数已有充分记录,该任务已在雄性和雌性大鼠及小鼠中得到验证10,11,12。甚至已有适用于人类的版本,突显了 SAT 的转化应用价值13。重要的是,该任务的使用帮助揭示了基底前脑皮层投射系统在持续注意力中的关键作用4。具体而言,基底前脑中从Meynert核(nucleus basalis of Meynert, NBM)/无名质(substantia inominata, SI)区域投射至前额叶皮层的胆碱能神经元对“命中”(hits)至关重要,即在信号试次中做出的正确反应14,15。相比之下,该区域的 GABA 能神经元被认为介导了“正确拒绝”(correct rejections, CRs)的表现,即在非信号试次中做出的正确反应16。在该任务的基本神经环路被确立后,研究人员已识别出多种可调节此环路并损害注意力的因素,从应激激素到神经毒性蛋白均被证实具有影响17,18。总体而言,这些研究凸显了 SAT 的重要应用价值。

在实验室中实施SAT的一个局限性在于,原始操作程序需要永久配置用于该任务的作业箱,箱内需设有中央面板灯和两个可伸缩杠杆,其中一个指定用于记录击中(hits),另一个用于记录正确拒绝(CRs)。10在信号试次中,面板灯短暂亮起,随后伸出杠杆,提示4秒的反应窗口。在此窗口期间,如果按压指定的“击中”杠杆,大鼠将获得奖励(食物或水)。在信号试次中按压错误的杠杆,即“漏报”,不会获得奖励。在非信号试次中,面板灯保持关闭,随后杠杆伸出。在此类试次中,正确拒绝(CR)会获得奖励,但按压错误的杠杆,即“虚报”,不会获得奖励。在反应窗口期间未进行任何反应则记为“遗漏”。为了提高SAT任务的可用性,我们近期将其改进用于触屏操作箱,其中一侧壁为触摸屏,既可呈现视觉刺激,也可记录鼻触反应。19触摸屏实验舱因其能够执行多种任务而日益流行(例如,配对联想学习,逆转学习, 等等。)使用一台设备20与其他触摸屏实验方法类似20,21,22, 我们对SAT的改进方法需要使用一种不透明的塑料触摸屏遮罩,称为mask,其上开有孔洞。中央的圆形孔洞允许通过在后方屏幕显示白色刺激来呈现信号,两个方形反应区域分别用于记录击中(hits)和正确拒绝(CRs),使大鼠可通过触碰进行反应19在传统实验箱中,通常通过推出杠杆来提示4秒的反应窗口,但先前的一项研究表明,也可使用音调来提示反应窗口。23在触屏SAT中,我们同样通过短暂的音调来提示反应窗口。其他训练参数(例如试验次数,试验间间隔 等等。传统SAT与触屏SAT之间的参数设置保持一致。我们此前评估了传统SAT与触屏SAT版本的执行表现,发现两者具有可比性,表明触屏SAT是测量持续注意力的有效方法。19触摸屏的改进使SAT更具多功能性,因为它现在可适用于广泛使用的触摸屏操作箱。

本实验方案详细介绍了如何在实验室中进行触摸屏SAT操作。训练流程相较于我们此前报道的任务有所调整19,旨在优化雌性大鼠的学习时间,因为雌性大鼠与雄性不同,在此前的训练流程中难以顺利进阶24。文中包含了雄性和雌性大鼠典型行为表现的结果,并提供了任务操作中常见问题的解决建议。

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方案

所有实验均按照美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)指南进行,并经天普大学(Temple University)机构动物使用与护理委员会批准。本方案采用成年(开始研究时约60日龄)雄性和雌性斯普拉格-道利大鼠(Sprague-Dawley rats,Charles River)进行。

1. 触屏SAT实验材料

  1. 确保每个触摸屏实验箱周围设有隔音屏蔽室,并在实验箱内配备室内照明灯、声音发生器、位于实验箱上方的摄像头,以及位于触摸屏对面墙壁上的颗粒分配器和带照明功能的饲喂奖励区。
  2. 若计划进行套管或电极植入手术,应使用具有较大开口的饲喂奖励区。使用45 mg的奖励颗粒,并通过面粉筛筛除粉尘,以减少颗粒残渣堵塞饲喂装置的风险。
  3. 为每个实验箱安装一块黑色丙烯酸遮罩(厚度3.175 mm,哑光表面),以限制触摸屏上的响应区域。遮罩应制备一个位于中央的圆形开口(直径28.58 mm,距底部107.95 mm,左右居中),用于光刺激显示;并在其下方偏置位置设置两个方形响应区域(均为28.57 mm × 28.57 mm),分别距离左侧边85.73 mm和右侧边85.73 mm,且均距底部34.93 mm。该遮罩的设计示意图可参见文献Wicks, et al.19
  4. 将遮罩置于触摸屏前方,哑光面朝向实验箱内部。

2. 触屏SAT实验的时间安排设计

注意:以下方案详细说明了如何设置触摸屏SAT中塑造和测试阶段的时间表参数。所有这些时间表均可应要求提供。表1展示了时间表的参数设置。

  1. 鼻触塑形参数
    1. 设置程序,使不呈现任何信号,且笼内灯光保持关闭。
    2. 将喂食器奖励区域设置为亮灯,以指示食丸的存在;当食丸被取走后,根据喂食器端口的红外光束检测结果,该灯自动熄灭。
    3. 设置程序,使任一反应区域内的鼻触均按固定比率1(FR1)强化程序给予食物颗粒奖励(,每次正确反应均给予奖励)。然而,需设置程序:若鼻触的侧向差异达到或超过五次,则大鼠必须触探非偏好侧才能获得奖励,以防止出现侧向偏好。
    4. 将训练时长设定为40分钟或完成120次有奖赏的探鼻次数。若受试对象连续两天在40分钟内完成120次鼻触,将其推进至训练计划1。
  2. 训练计划1、训练计划2和SAT的共享参数描述
    1. 规划训练程序时,保持屋内灯光开启,以增加注意力需求。
    2. 将每次实验设置为包含162个试次,可分为3个区组,每区组54个试次,试次间间隔(ITI)设定为9 ± 3 s。
    3. 确保信号试次和非信号试次为伪随机化设计,使得在三个区组中信号试次和非信号试次的数量均相同。
    4. 将程序设置为在每次实验开始时自动递送一粒食丸并点亮食丸仓指示灯。当红外光束中断信号表明大鼠头部已离开奖赏区域时,程序应关闭食丸仓指示灯并开始第一个间隔时间(ITI)。
    5. 每次试验结束后(,信号或无信号),将程序设置为在4秒反应窗口期结束时发出一个持续200毫秒、70分贝的3 kHz提示音。
    6. 如果大鼠正确响应,则设置程序在其头部离开奖励区域时开始下一次试验间隔(ITI)。如果大鼠响应错误,则设置ITI在响应结束后立即开始。如果大鼠遗漏(,无应答时),将ITI设置为在应答窗口结束后开始。
    7. 为实现平衡设计,需制定两种版本的实验流程:第一种版本指定右侧反应区域为击中区(A 版),第二种版本指定左侧反应区域为击中区(B 版)。
  3. 训练计划1参数
    1. 将所有信号持续时间设置为 500 ms。
    2. 在信号试验中,将程序设置为在呈现信号的同时,以50%的强度照亮指定用于击中反应的区域,以吸引大鼠对该正确反应区域的注意力。
    3. 在无信号试验中,保持正确拒绝的指定区域不亮。
    4. 设置程序,使错误响应触发矫正试验,在该试验中重复前一次的试验类型(,信号或非信号)再次呈现。确保在连续四次错误反应或出现一次正确反应后,结束该系列的矫正试验。矫正试验不计入任务完成所需的总共162次试验中。
    5. 若受试者连续三天达到至少70%的击中率、至少70%的正确拒绝率,且遗漏率低于20%,则将其纳入训练方案2。
  4. 训练计划 2 个参数。
    1. 将所有信号持续时间设置为 500 ms。
    2. 与训练程序1不同,在信号试验中将程序设置为保持击中反应区域不亮。
    3. 与训练计划1不同,不要让程序执行校正试验。
    4. 保持所有其他参数与训练方案1中的相同。
    5. 若受试者连续三天达到至少70%的命中率、至少70%的正确拒绝率且遗漏率低于20%,则进入SAT阶段。
  5. SAT参数。
    1. 设置三种信号持续时间:500 ms、50 ms 和 25 ms。
    2. 将程序设置为以伪随机方式呈现变量信号,使得在每一轮三个试验区组中,三种信号持续时间均出现相同次数。
    3. 将标准表现定义为:在500毫秒信号持续时间内,连续三天达到至少70%的命中率、至少70%的正确拒绝率,且遗漏率低于20%。
训练阶段最大试验次数信号持续时间 (ms)特殊条件达标标准各阶段中位天数
鼻触形状训练120无事件笼灯开启40 分钟内完成 120 次试验雄性:2 天,雌性:2 天
训练程序 1162500笼灯开启;校正试验;信号试验期间反应窗口亮度设为 50%连续 3 天,命中率 > 70%,正确拒绝率 > 70%,遗漏率 < 20%雄性:19 天,雌性:25 天
训练程序 2162500笼灯开启连续 3 天,命中率 > 70%,正确拒绝率 > 70%,遗漏率 < 20%雄性:13 天,雌性:21 天
SAT162500, 50, 25笼灯开启500 ms 条件下命中率 > 70%,正确拒绝率 > 70%,遗漏率 < 20%,连续 3 天达标雄性:18 天,雌性:12 天

表1:各训练时间表及其平均习得时间。

  1. 干扰物 SAT。
    1. 将第1和第3区组的参数设置与SAT完全相同。
    2. 编程使笼内照明灯在第2区组期间以0.5 Hz的频率闪烁。
    3. 在分析数据时,比较第1、2、3区组的表现,以分析同一实验会话中干扰物出现前、期间和之后的行为表现。
  2. 数据提取程序。
    1. 按试验区组和每个信号持续时间,分别提取SAT和干扰物SAT的以下数据(用于计算VI和命中率):
      1. 通过将命中次数除以命中与遗漏次数之和,再乘以100,计算命中率。
      2. 通过将正确拒绝次数除以正确拒绝与误报次数之和,再乘以100,计算正确拒绝率。
      3. 使用以下公式计算警觉性指数(VI),即注意力表现的综合指标:VI 公式,示意图,静态平衡,平衡计算,物理,代数表达式,研究 其中hf分别为信号试验中的命中比例和非信号试验中的误报比例。VI值范围为-1至+1,VI为0表示大鼠无法区分信号与非信号试验。在计算VI时不包括遗漏的试验。
      4. 通过确定无反应试验所占比例,计算遗漏率。

3. 大鼠触摸屏SAT实验操作步骤

  1. 倒置光照/黑暗周期的注意事项
    注意:我们在大鼠的黑暗周期进行测试,但关于光照周期中测试的注意事项,请参见讨论部分。
    1. 在黑暗周期期间进行测试时,应在黑暗周期开始至少30分钟后开始行为学测试。
    2. 设备安装完毕后,在所有训练和测试过程中均应保持行为测试室处于黑暗状态,以避免干扰大鼠的睡眠/觉醒周期。
    3. 运输过程中用黑色毛巾覆盖鼠笼,以减少光照暴露。
    4. 使用带有红色灯光的头灯,可在黑暗环境中进行免手操作,且不会干扰光/暗周期。
  2. 食物限制程序与时间安排分配
    1. 穿戴适当的个人防护装备(PPE; 例如手套、口罩、头罩、实验服、鞋套 等等。) 在处理大鼠之前。
    2. 当大鼠到达动物饲养室后,应单独或分组饲养。在我们的研究中,大多数大鼠最终需植入套管,因此需要单笼饲养。
    3. 在研究开始前5天,每天用手抓取大鼠5分钟。
    4. 在食物限制之前,记录每只大鼠自由进食时的体重,并计算其目标体重,即自由进食体重的85%。
    5. 在开始塑形前,将大鼠禁食3天。
    6. 在开始塑形前,先让大鼠在它们的饲养笼内接触15粒食物奖励颗粒。
    7. 在初次食物限制后,根据需要调整每日食物供给量,以维持大鼠在注意力任务中的表现,并使其体重保持在自由进食状态下体重的约85%,允许随时间略有增重(参见指导原则25)在开始新的实验程序之前,应比平时更严格地限制大鼠,以增强其动机。
    8. 在大鼠不进行行为学实验的每周某一天(或几天)中,应至少增加1.0 g的食物量,以补偿其在行为任务中因获得奖励而本应摄入的热量。
    9. 每次实验结束后记录每只大鼠的体重。
    10. 完成实验后至少30分钟内不要喂食大鼠,以避免大鼠将行为测试结束与喂食时间关联起来。如果大鼠为群养,应将每只大鼠单独喂食1小时,然后将其重新放回群养环境。
    11. 在研究开始前,将每只大鼠随机分配至两种训练方案(A 或 B)中的一种,并在整个训练及 SAT 程序期间保持其指定的方案不变。
  3. 每日跑步操作流程
    1. 穿戴适当的个人防护装备。
    2. 启动操作箱和计算机。
    3. 检查颗粒分配器中是否已装入颗粒,并确认触摸屏前方已插入遮罩。
    4. 通过验证喂食器能否正常分配食物,以及屏幕、灯光和音调是否正常工作,确保每个箱子功能正常。为此可编写一个简单的箱子测试程序,我们的测试程序可应要求提供。
    5. 在每个盒子中加载正确的程序,仔细核对相应版本 (即,A 或 B)。根据需要输入有关动物编号、性别、实验条件、用户姓名首字母及其他备注的相关信息(例如,输注第1天)。
    6. 从饲养室取出大鼠,并将其放入相应的盒子中。
    7. 开始实验。
    8. 通过在实验开始时设置视频摄像系统并观察数分钟,以确保所有设备正常运行。定期检查实验状态。
    9. 一次会话结束后,记录汇总数据(例如,命中率百分比、CR 百分比、遗漏百分比)以及实验记录本中的任何问题。
    10. 用10%乙醇擦拭每个饲养盒,并在每组动物之间更换垫料。
    11. 当天最后一组大鼠实验结束后,用10%乙醇彻底清洁实验箱,确保地板网格尽可能洁净,并更换垫料。
    12. 在云服务器上备份数据,并提取任何关键数据。
    13. 关闭设备电源。
    14. 每天在同一容器中同时进行动物实验。
    15. 每周训练大鼠5至6天(我们实验室每周训练大鼠6天)。

4. 行为问题排查

注意:当大鼠转入下一阶段的训练(i.e.,从鼻触训练阶段转至训练计划1、从训练计划1转至训练计划2、从训练计划2转至SAT)时,其表现下降是正常现象。然而,如果其表现随时间未见改善,或某只大鼠原本表现良好却突然变差,最常见的原因是食物限制不当。

  1. 解决食物限制相关问题
    1. 如果怀疑存在食物限制问题,应观察大鼠执行任务的过程,以帮助诊断问题所在,并检查遗漏次数,特别是整个实验阶段中的遗漏情况。
    2. 如果某只大鼠的遗漏次数较高,尤其是在第3阶段中遗漏增加,并且在箱内安静不动、不执行任务,则每日食物量减少1 g,并监测其表现,判断性能是否改善。
    3. 如果某只大鼠遗漏次数较高,频繁急切地触碰屏幕,并在实验过程中反复往返于食物出口,则每日食物量增加1 g,并监测其表现,判断性能是否改善。
    4. 当难以判断大鼠是进食过多还是过少时,先增加食物量持续2天并监测其表现;若表现未改善或恶化,则减少食物量持续2天并继续监测其表现。
    5. 若调整食物限制后表现仍未改善,将该大鼠转入下一更简单的训练阶段,具体如下所述。
  2. 不同训练阶段中表现问题的排查
    注意:若某只大鼠的习得时间超过同性别动物在该阶段达到标准所需天数平均值的两个标准差以上,则应淘汰该大鼠。我们根据自身数据对Sprague-Dawley大鼠提出了淘汰阈值建议,但不同品系可能需要调整这些数值。
    1. 训练阶段1:对于Sprague-Dawley雄性大鼠,若在36天后仍未习得,应予以淘汰;雌性大鼠若在48天后仍未习得,也应淘汰。
    2. 训练阶段2:若某只大鼠在训练阶段2连续12天表现停滞在标准以下,且已排除食物限制问题,则将其退回至训练阶段1,至少维持5天或直至达到标准。若该大鼠在退回训练阶段1后12天内仍未达到标准,则从研究中淘汰。若该大鼠通过训练阶段1并重新回到训练阶段2,但在最初开始训练阶段2后的36天(雄性)或42天(雌性)内未见改善,则从研究中淘汰。
    3. SAT阶段:若某只大鼠在SAT阶段连续12天表现停滞在标准以下,且已排除食物限制问题,则将其退回至训练阶段1,至少维持5天或直至达到标准。若该大鼠在训练阶段1的12天内未达到标准,则从研究中淘汰。若该大鼠通过训练阶段1并重新回到SAT阶段,但在最初开始SAT后的41天(雄性)或28天(雌性)内未见改善,则从研究中淘汰。
  3. 其他问题的排查
    1. 若大鼠在训练阶段2或SAT阶段出现侧向偏好(i.e.,持续在某一侧的正确击中率 >70%,而另一侧的正确拒绝率 <40%,或相反情况),应将其转入训练阶段1,该阶段包含矫正试验,可促使大鼠对两个响应区域均作出反应。将大鼠保留在训练阶段1至少5天,或直至其达到标准。若在12天内未能达到训练阶段1的标准,则从研究中淘汰该大鼠。
    2. 若大鼠停止进食、出现卟啉分泌物,或表现出疼痛与痛苦的其他迹象,应立即咨询兽医人员。

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结果

在大多数注意力研究中,大鼠首先在SAT任务中训练至达标标准,随后进行干预以破坏或改善其注意力。通常情况下,研究不会展示获取阶段的数据,但本文展示了雄性和雌性Sprague-Dawley大鼠在SAT任务中的学习获取速度。为此,我们量化了大鼠达到SAT任务标准所需的中位天数(从鼻触阶段开始计算)。需要注意的是,有少数大鼠未能在规定时间内达标(雄性n = 5,雌性n = 1)。雄性(n = 24)和雌性(n = 16)大鼠达到标准所需的中位天数(包括在规定时间内未达标者)分别为54.5天和62天(图1)。两性在获取时间上无显著差异 [U = 165.5, Z = -0.75, p = .469]。值得注意的是,雄性大鼠在获取时间上的变异性似乎大于雌性 [四分位距 (IQR) = 60.25 对比 IQR = 29.50]。

大鼠达到基线水平后,我...

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讨论

持续性注意力缺陷在神经精神、神经发育和神经退行性疾病中均有报道1,2,3,但影响注意力最佳状态或受损状态的机制尚未得到充分研究。部分原因在于,专用设备限制了啮齿类动物注意力任务的便捷推广。然而,触摸屏实验舱通过使用同一套设备灵活运行多种认知任务,正在解决这一问题20,22。本文进一步扩展了可用于触摸屏的认知任务列表20,22,详细阐述了如何在雄性和雌性Sprague-Dawley大鼠中实施触摸屏持续注意力任务(SAT)。对两性间表现的比较显示,其习得速率相当。然而,雄性在达到标准方面表现出比雌性更大的变异性。这一有趣的性别差异可能与Sprague-Dawley大鼠品系中雄性个体特质变异度较高而雌性较低的现象有关

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披露

作者无任何利益冲突需要披露。

致谢

感谢 Joy Bergmann、Attilio Ceretti、Sarah Cohen、Nina Duncan、Arron Hall、Hanna Lefebo 和 Madeleine Salvatore 在行为实验方面的协助,感谢 Vinay Parikh 博士、Brittney Yegla 博士和 Rob Cole 对 SAT 参数提供的建议。感谢 Jill McGaughy 博士在训练流程方面的指导。本研究得到了美国国立卫生研究院资助项目 NIMH 092438 和美国国家科学基金会资助项目 IOS 1552416 对 D.A.B. 的支持。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
Bussey-Saksida 大鼠触摸屏实验箱简易安装系统Lafayette Instrument80604-20包含:触摸屏、带穿孔地板的箱体底座、大型喂食器奖励区(44.5 mm 宽 × 92.5 mm 高)、扬声器、笼内照明灯、音调发生器、隔音箱(SAC);梯形动物操作区域在喂食器处宽 126 mm,在屏幕处宽 240 mm、深 332 mm,高度为 300 mm
隔音箱(SAC)Lafayette Instrument80604-20隔音效果约 35 dB;重量 38 kg;外部尺寸:600 mm 宽 × 670 mm 高 × 352 mm 深;内部尺寸:540 mm 宽 × 610 mm 高 × 532 mm 深
触摸屏用 Abet II 软件Lafayette Instrument89505版本 2.19
Whisker 多媒体系统Lafayette Instrument80698-1Abet II 触摸操作所必需
颗粒分配器Lafayette Instrument80209-4545 mg 可更换颗粒尺寸轮
摄像头Lafayette Instrument80600-CAM针对红外光过滤并聚焦
Microsoft WindowsMicrosoft推荐使用 Windows 7 64 位系统
控制器 PC-触摸屏实验箱Lafayette Instrument88530双核 Pentium 处理器;2.5 GHz 或更高;配备键盘、鼠标和显示器;已安装 PCI 卡、电缆及扩展模块;四个 RS232 端口;四个 VGA 端口
无尘精密颗粒饲料BioServeF016545 mg
黑色亚克力遮罩Everything Plastic定制产品黑色聚碳酸酯材质,一侧为哑光表面,厚度 3.18 mm;中心圆形开口,直径 28.58 mm,距底部 107.95 mm,左右居中;两个方形响应区域,每个 28.57 mm × 28.57 mm,位于下方且偏心布置,一个距左侧 85.725 mm,另一个距右侧 85.725 mm,两者均距底部 34.925 mm
多功能推车Fisher Scientific11-954-75430.75 英寸 × 18.38 英寸 × 33 英寸
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参考文献

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