方法文章

用于体内的无线双向接口记录和刺激自由行为大鼠的神经活动

DOI：

10.3791/56299

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2017年11月7日

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1Behavioral Neuroscience, Experimental and Biological Psychology, Philipps-Universität Marburg, 2Behavioral Neurosciences Institute (INeC), 3Thomas RECORDING GmbH, 4Department of Neurophysics, Philipps-Universität Marburg

本文内容

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

介绍了一种用于自由行为的大鼠多通道神经记录和刺激的无线双向系统。该系统是轻和紧凑, 因此对 animal´s 行为剧目的影响最小。此外, 这种双向系统提供了一个复杂的工具来评估大脑激活模式和行为之间的因果关系。

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

在体内电生理学是一种强有力的技术来研究的关系之间的大脑活动和行为的毫秒和微米尺度。然而, 目前的方法大多依赖于连线电缆录音或只使用单向系统, 允许记录或刺激神经活动, 但不是在同一时间或同一目标。本文介绍了一种用于同时多通道记录和刺激自由行为大鼠神经活动的新型无线双向装置。该系统通过一个单一的便携式头部阶段, 既传送记录的活动, 也可以针对 real-time 的大脑刺激使用 telemetry-based 多通道软件。头阶段配备了前置放大器和可充电电池, 允许稳定的长期录音或刺激高达1小时. 重要的是, 头部阶段紧凑, 重量12克 (包括电池), 从而对 animal´s 的影响最小。行为剧目, 使该方法适用于广泛的一系列行为任务。此外, 该方法的主要优点是大脑刺激对神经活动和行为的影响可以同时测量, 提供了一个工具来评估特定的大脑激活模式和行为之间的因果关系。这一特性使该方法对深部脑刺激有特别的价值, 在长期行为实验中允许对刺激参数进行精确的评估、监测和调整。利用下位丘作为模型结构, 验证了系统的适用性。

引言

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

神经科学中的一个基本问题是, 定义的神经元电路中的电活动是如何产生某种形式的行为的。在体内电生理学是一个强有力的技术来解决这个问题, 提供一个工具来记录或刺激大脑中的电活动, 而动物正在执行某些行为任务。但是, 当前的系统经常依赖于连线电缆录制1,2, 可能会限制移动性并防止 animal´s 行为剧目的完全表达。此外, 大多数单向系统使用, 允许记录3,4,5或刺激6,7的神经活动, 但不是在同一时间或同一目标, 使它难以解开特定的大脑激活模式和行为之间的因果关系。目前, 只有少数无线、双向系统用于体内的准备工作。但是, 它们通常是重的 (40-50 克), 由两个独立的便携式单位组成,即一个头阶段和一个连接的背包为电池电源8,9,10, 使它们更少灵活和增加电缆断线的风险, 例如在打扮行为期间。上述的无线系统都没有提供植入式微电极单元, 以获得完整的 ethologically 有效行为与实验条件的高再现性完全集成的神经活动概念。

在这里, 一个新的无线, 双向设备的在体内录音和刺激神经活动在自由行为的大鼠介绍。托马斯无线系统 (TWS) 操作通过一个可移动的顶头阶段, 可以传输多通道活动使用多达四独立录音渠道和可以是目标为电脑刺激在 real-time。此外, 一个长期植入的微电极单元兼容的 TWS 开发, 既允许神经刺激和记录。本文还介绍了一种用于记录和激励的 TWS 软件图形用户界面。本研究描述了整个设备的验证和在体内的实现。

为了验证 TWS 系统, 丘被选择为目标神经结构, 因为它的电刺激可以诱发明显的行为反应。众所周知, 下丘的电刺激诱发了大鼠的 "恐惧样" 行为反应, 如警觉性、侧身姿势、背部拱起、冰冻和逃逸 (飞行) 行为。这种反应模式模仿环境挑战引起的恐惧反应, 如感知的有害事件, 攻击或威胁生存11,12,13。人们认为, 能够引出这样一个明确而明确的行为, 将给 TWS 带来真正的挑战。

方案

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所有协议和实验都符合目前的欧洲准则 (2010/63/欧盟), 并得到了区域当局 (Regierungspr 和 #228; sidium 和 #223; en, 20/35 先生 25/2015).

1. 动物

  1. 将雄性成年大鼠 (200-250 克) 置于标准实验室条件下的3-4 组, 在手术前至少一周, 以允许习服.
  2. 手术后两天后, 家鼠成对。盖上高丙烯酸盖的单笼。避免传统的金属网盖, 因为植入物可能会卡住, 增加风险, 他们成为损坏和/或不稳定随着时间的推移.

2。立体定向手术

  1. 开始手术前, 组织并准备以下设备和材料:
    1. 获取无菌剪刀、钝端钳、铲子、外科手术器械快船队, 牙科钻头, 棉花芽. 和 #160;
    2. 获取包括异氟醚、因、盐酸曲马多、dexpantenol 眼软膏、3% 过氧化氢、聚维酮碘和70% 乙醇的药物和化学物质.
    3. 获得固定材料, 包括不锈钢螺丝、丙烯酸树脂、紫外线胶水和帽保护器.
    4. 获取微电极单元, 包括 (i) 记录单电极 (石英玻璃绝缘铂钨微电极, 锥形尖端形状, 外径:80 和 #181; m, 圆锥尖, 阻抗在1赫: 500 kOhm) 或四 (石英玻璃绝缘铂/钨4芯微电极, 外径: 100 和 #181; m, 圆锥尖端, 阻抗在1赫: 500-800 kOhm);(二) 刺激电极 (铂/铱丝 (90% 铂, 10% 铱), 芯直径125和 #181; m, 外径150和 #181; m, 阻抗和 #60; 10 kOhm) 连接到一个接触板和 (iii) 白金线参考电极 (轴直径, 100#181; 图 1A ).
    5. 获得电极支架, 用水溶性胶水粘附到微电极单元, 并预先测试至少2小时的功能 ( 图 1B ).
    6. 获取由差分前置放大器、主放大器和带通滤波器放大器组成的常规连线系统, 用于录音.
    7. 获取其他材料, 如手套、加热垫、注射器和生理盐水.
    8. 获得家庭笼子 (L x W x H:42 cm x 26 cm x 38 cm).
  2. 过程
    注: 在异氟醚麻醉下的常规立体定向手术中进行电极植入。
    1. 确保实验者戴手套、手术面罩和实验室大衣.
    2. 启动麻醉将动物置于感应室 (异氟醚 4-5%, 氧气流量1升/分, 持续时间〜5分钟).
    3. 用镊子检查反射 (尾部和脚趾反射) 的损失, 以确认深层麻醉.
    4. 将动物的头部放在固定在立体定向框架上切牙棒周围的麻醉面罩中, 并调整麻醉 (异氟醚 2-3%, 氧气流量 0.7-0.8 升/分).
    5. 固定和水平排列的动物和 #39 的头部在立体定向设备使用耳棒和上切牙酒吧.
    6. 用外科快船或剪刀和聚维酮碘消毒的外科手术场.
    7. 将动物放在加热垫上以防止体温过低, 用 dexpantenol 眼膏治疗眼睛, 防止它们干燥.
    8. 注射因 (0.3-0.4 毫升, 皮下注射, 南卡罗来纳州) 在外科领域的中心.
    9. 再次测试是否有反射丢失.
    10. 用手术刀在手术场中央做一个小切口 (1.5 厘米) 来露出头骨。轻轻地将皮肤分开, 用钳子、剪刀和刮刀将残留的组织去除.
    11. 用过氧化氢包覆的棉花芽仔细清洁颅骨.
    12. 在颅骨上钻4-5 小孔 (4.7 毫米), 用于固定不锈钢螺钉.
    13. 将微电极单元/电极支架连接到前置放大器, 并附加到立体定向微 ( 图 1B 和 1C )。
    14. 在目标区域上方的头骨上钻一个洞 (大约7毫米), 根据使用的动物的坐标从脑图集。在本研究中, 定位电极提示瞄准丘使用以下坐标, 以 bregma 为参考: 前/后, 和 #8722; 8.8 毫米;内侧/侧面, 1.5 毫米;和背/腹, 3.5 毫米 14 .
    15. 用棉芽吸收任何血液.
    16. 垂直引入微电极单元直到电极尖端到达目标区域.
    17. 将地线缆沿不锈钢螺钉和皮肤下定位.
    18. 监视尖峰活动并仔细调整电极位置与微直到到达目标结构中的活动神经元区, 并检测到适合于穗分选的信噪比的神经活动.
    19. 用紫外线胶水将微电极装置固定在头骨上, 用丙烯酸树脂覆盖接触板和螺钉.
    20. 注射生理盐水 (1 毫升的 ip) 和曲马多 (25 毫克/千克, 南卡罗来纳州), 以防止脱水, 并确保术后镇痛, 分别.
    21. 用浸在水中的刷子从电极架上断开微电极单元.
    22. 停止麻醉, 小心地将老鼠从立体定向框中移除。从微电极单元中拔下前置放大器.
    23. 在微电极单元上连接 cap 保护, 并仅在实验过程中断开.
    24. 在手术后第二天将动物在 home-cage 中保持成对.
    25. 每天监测动物的伤口感染, 体重, 健康状况和一般行为, 在手术后的7天内。在此恢复期之后, 执行 体内 电生理学和行为实验.
      注: 手术过程持续60-90 分钟。在手术过程中, 必须连续监测和麻醉的尾巴轻弹反应, 如果需要.

3。 在体内 电生理学

  1. 设备和过程
    注: 使用 TWS 进行电生理记录和刺激。
    1. 获得具有集成前置放大器和连接电池的头阶段 (四记录通道; 模拟记录输入范围: 0-12 mV pk pk; 刺激输出: 和 #177; 625 和 #181;L x W x H:24 毫米 x 22 毫米 x 12 毫米;重量: 6 克无电池, 12 克带电池;电池运行时间可达1小时)。该头部阶段适用于通过微型多极连接器 ( 图 2 ) 直接连接到植入的微电极单元.
    2. 获取电池 (锂离子累加器, 3.7-4.2 V DC, 230 毫安, 27 mm x 20 mm x 6 mm, 1 h 操作时间) 安装在头舞台顶部 ( 图 2C )。如有必要, 可使用450毫安的更换充电电池, 约2.5 小时操作时间。在电池连接到它时, 确保在头舞台上出现绿灯.
    3. 获取通过标准 USB 端口连接到个人计算机的收发器 (接收器-发射机), 并允许无线操作多达 5 m ( 图 2E ).
    4. 获取用于电刺激和记录神经活动的 TWS 软件的个人计算机 ( 图 3 和 图 4/强>).
    5. 获取栓前置放大器和在手术过程中使用的数据采集系统 (见项目 2.1.5), 以及刺激的刺激发生器, 以便在手术后一周内对清醒大鼠 TWS 的有效进行比较.
      注: 电刺激提供和单神经元细胞外活动记录从相同的植入微电极单位使用这两个系统。刺激参数 (电流强度, 脉冲和频率) 应根据脑区的目标调整到每个动物。在本研究中, 150-250 和 #181; 2500 赫兹电流被用来刺激下丘.
  2. 行为分析
    注: 一旦在收发器和动物头阶段之间没有引入金属屏障, TWS 就适用于一系列的行为任务。作为模范行为测试, 它在公开领域用于测量一般行为活动和在高加迷宫, 一个标准测试评估焦虑象行为在啮齿目动物 15 。一个摄像头被放置在开放的领域和高架迷宫的行为录音的中央。
    1. 在进行行为测试之前, 连续三天 (每天5分钟) 处理每种动物。在每个处理周期之前, 将头阶段与电池连接到先前植入的微电极单元。在处理过程中不要进行任何记录或刺激.
    2. 打开字段
      1. 将鼠放到开放字段的中心 (40 厘米 x 40 cm x 40 厘米; 红灯 ~ 30 勒), 并允许它在神经记录下探索至少5分钟的仪器.
      2. 确定逃逸阈值-最小电流强度产生运行或跳跃。在本研究中, 提供一个高频2500赫兹刺激 (脉冲宽度: 100 和 #181; s; 脉冲间隔: 100 和 #181; s) 对下位丘在 1 min 间隔增加电流强度由20-50 和 #181; 一步, 直到老鼠表现出逃跑行为.
      3. 将鼠返回到其主笼中, 清洁野外 (0.1% 醋酸溶液) 并烘干.
        注: 为了比较 TWS 与传统系栓系统的刺激效果, 上述过程是使用两种系统进行的.
    3. 提升的迷宫
      注释: 在这些实验中使用的加迷宫是由灰色丙烯酸制成, 由两个张开的手臂 (50 厘米长的 x 10 厘米宽) 和两个闭合的武器 (50 厘米长的 x 10 厘米宽, 有40厘米高的墙), 从中央 pla 延伸tform 升高50厘米, 高于地面 16 。
      1. 将大鼠置于加迷宫的中心, 朝向一个张开的手臂, 允许它在5分钟内自由地探索持续记录下的仪器.
      2. 记录输入的条目数, 以及在5分钟内打开和关闭的武器所花费的时间.
      3. 将鼠返回到其主笼中, 清洁 (0.1% 乙酸溶液) 并在每次测试前将迷宫干燥.
    4. 灌注和组织学
      1. 麻醉嗪/氯胺酮 (分别为150毫克/千克和100毫克/千克) 的鼠。
      2. 将植入的电极单元连接到刺激电缆, 并应用电刺激 (电流强度50和 #181; A, 脉冲宽度: 100 和 #181; s; 脉冲间隔: 100 和 #181; s) 在九十年代期间, 为了在电极尖端周围产生一个小病灶.
      3. 断开刺激电缆并将动物从左心室灌注, 然后用生理盐水将200毫升的4% 甲醛在0.1 米磷酸钠缓冲液中, pH 7.3 (详细说明请参阅参考 17).
      4. 取出大脑, 在4和 #176 的新鲜定影液中浸泡4小时; C.
      5. 确保主低温室的温度在-20 和 #176; C.
      6. 在干冰上冻结大脑并将其切成50和 #181; m 系列冠状截面使用低温.
      7. 根据 Paxinos 和沃森 14 的地图集, 用 cresylviolet 着色剖面以定位电极尖端的位置.

结果

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TWS 技术数据

无线系统提供4独立的记录通道和1的刺激通道。通过记录的单芯电极采集细胞外活动, 并传递到无线系统的高阻抗信号输入。记录的信号是 pre-amplified (x200) 由一个 AC 耦合, 差分输入前置放大器和带通滤波 (固定信号带宽, 500 赫兹..。5赫) 只记录多活动, 因为在本研究中, 主要的兴趣是记录单位活动, 而不是局部场电位。集成可编程增益主放大器为四记录通道 (x1、x2、x4、x8、x16、x32、x64) 提供软件可调增益。无线系统的完整信号链提供了 x200、x400、x800、x1600、x3200、x6400 和 x12800 的总体增益值。在放大和滤波后, 模拟信号通过模拟到数字转换器进行数字化, 在高频载波上进行调制, 并使用 2.4-2.5 GHz ISM 波段由无线电收发机传输。在传输路径的另一侧使用了相同的收发器类型。第二台收发器通过 USB 端口连接到个人电脑。传输路径用于双向数据传输, 将来自动物的胞外记录信号发送到计算机, 反之亦然, 从计算机向动物发出信号放大和刺激的控制参数。

利用 TWS, 可以成功地记录多脑活动, 通过刺激下丘, 在野外自由运动时, 改变动物的行为。收发器被放置在离该动物5米远的位置, 并通过 USB 端口连接到计算机 (参见图 2)。在图 5中演示了与连线和无线系统所产生的记录信号质量的比较。TWS 记录多活动与一个相似的信号质量作为一个有线录音系统。微刺激器是一个真正的无线刺激, 更新刺激参数的实时, 即刺激信号, 其参数定义与 TWS 软件传递到刺激电极连接到头部阶段在一些推动刺激按钮后毫秒。因此, 可以改变刺激参数而不把动物从笼子里拿出来。这一特性的优点是可以最大限度地减少刺激实验的时间。

TWS 软件是专门设计的, 允许通过一个图形用户界面 (图 3和图 4) 控制无线系统的所有功能 (如记录和刺激)。对于微刺激, 利用 TWS 软件的图形用户界面开发了一种刺激信号。TWS 的刺激器采用了电荷平衡恒流激励模式。该刺激模式被无线发送到集成在头部阶段无线单元的恒流刺激器。刺激电流被应用在被放置在感兴趣的目标的工作微电极之间 (例如在当前研究中的下等丘) 和一个更大的遥远的柜台电极担当 TWS 的地面或参考电极。根据刺激电极阻抗和恒定电流刺激器的电压顺应性, 可以使用最大的刺激电流范围的±625µA, 虽然在目前的实验中需要更低的电流阈值。在这里, 双相电荷平衡恒流刺激用于峰值电流高达300µA。在双相刺激的情况下, 第一个脉冲被用来引出生理效应, 第二个脉冲通常反转在刺激脉冲18期间发生的电化学过程。TWS 头阶段通过 TWS 软件的图形用户界面来提供实时的刺激模式 (参见图 4)。

TWS 软件被划分成三主要部分: a (i) 主窗口与控制为录音和刺激, a (ii) 刺激生成器窗口与所有设置选择为刺激信号参量和 a (iii) 牌局窗口为重放记录的数据文件。主窗口允许用户显示多达4记录通道的记录信号, 设置所有通道的增益并开始/停止显示信号的记录。信号数据存储在计算机硬盘上的一个文件中。文件路径在 "配置" 菜单中设置。除了记录参数, 主窗口允许启动和停止的刺激过程。在主窗口屏幕上实时显示通过刺激电极在动物大脑中传递的恒定刺激电流。在刺激参数设置窗口中 pre-adjusted 了刺激信号的参数。有可能定义单或双相刺激脉冲列车, 并设置所有常用的刺激脉冲参数, 如脉冲宽度, 脉冲幅度, 脉冲之间的时间等 (详见图 4)。在激励发生器窗口的图形显示中显示了预先选定的参数值所产生的刺激脉冲函数。

TWS 软件是根据可用性方面设计的。软件的可用性是保证无线刺激/录音实验顺利进行和安全舒适工作环境的重要因素。这也有助于提高实验的重现性。

单单元记录数据和电刺激

用 TWS 和传统的栓系记录系统, 从同一个植入电极上依次记录多细胞外丘活性。图 5显示了使用两种系统记录的有代表性的原始数据, 而动物在野外自由移动。直接比较的信号表明类似的峰值波形和噪声水平 (图 5A和5B)。在 "和 B" 中描述了尖峰形式的演示。

由于大鼠在手术后没有试图移除 TWS 头阶段, 并且在随后的几天里, 它被假定它没有明显地干扰他们的运动和没有引起不适。因此, 通过使用 TWS, 避免了连接器和电缆的去除和咀嚼等问题。事实上, TWS 头阶段的大鼠能够探索野外和迷宫 (see 电影 1) 展示正常的交叉, 饲养和梳理行为。

此外, 与 TWS 或常规系栓系统所使用的刺激参数诱发相同的行为结果, 这里逃脱行为。从100µA 开始, 刺激电流振幅逐步增加, 直至达到逃逸阈值--产生跑或跳的最小电流强度, 并引出逃逸行为。在使用这两个系统时, 4 只大鼠的个体逃逸阈值是相似的 (图 5C)。

figure-results-1
图 1:TWS 微电极单元(1) 记录单电极/四、(2) 刺激电极、(3) 电极纤维连接板、(4) 柔性连接电缆、(5) 地线、(6) 连接器板、(7) TWS 系统的男性或女性连接器 (A);TWS 微电极单元, 连接到前置放大器 (8) 和支架 (9);(B) 准备好附加到立体定向帧 (C)。请单击此处查看此图的较大版本.

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图 2: 无蓄电池电源的 TWS 头舞台安装模块 (A) 的顶部视图。总尺寸: 高度12.5 米, 深度24毫米 (19.3 毫米 + 4.7 毫米), 宽22.1 毫米, 重量: 5.96 克. 底部视图 (B) 显示电极单元连接器;蓄能器电源, 高度 9 mm, 深度 26 mm, 宽度 20 mm, 重量 6 g (C);本测试所使用的 TWS 组件概述: (1) animal´s 头骨上装有蓄电池的头台单元, (2) 连接到计算机 USB 端口的收发器单元 (3) TWS 软件 (D);老鼠的相片自由地移动和显示 TWS 顶头阶段连接到早先被植入的微电极单位 (E) 和 TWS 软件显示模范被记录的信号 (F)。TWS 头阶段提供实时刺激模式设置的图形用户界面的 TWS 软件。请单击此处查看此图的较大版本.

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图 3: TWS 软件图形用户界面, 记录屏幕.在屏幕上描述了单极性记录电极在下位丘中植入的 TWS 的记录性能。请单击此处查看此图的较大版本.

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图 4: TWS 软件图形用户界面刺激屏幕 (A) 和刺激参数规范 (B)。刺激信号参数 (C), 脉冲宽度 (PxW), 脉冲幅度 (PxA), 脉冲间延迟 (知识产权), 脉冲之间的时间 (TBP), 每列车 (PPT) 和时间之间的列车 (TBT) 是可调通过 TWS 软件图形用户界面。请单击此处查看此图的较大版本.

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图 5:用 TWS (a) 和有线录音设置 (B) 记录 extracellularly 的多信号之间的定性比较。两个录音是从相同的 TWS 微电极单元 (阻抗 0.5MOhm) 中植入的下位丘。两个记录电极接点之间的轴向距离约为400µm。有线系统和 TWS 的记录带宽相同 (500 赫兹..。5赫), 信号被取样与40赫 (有线系统) 和32赫 (TWS)。两个系统都记录了多的活动, 具有类似的信号质量。TWS 和有线录音的发射率没有明显的区别。两个记录中的神经元的动作电位波形显示在 a 和 B 中。4大鼠使用栓系系统 (TS) 或 TWS (C) 达到逃逸阈值时, 也需要类似的刺激参数。请单击此处查看此图的较大版本.

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电影 1:在加迷宫测试期间, 示范性的老鼠表现出正常的探索性行为.TWS 允许动物进入开放和闭合的武器没有导线纠缠在测试仪器, 但它是小和轻的足够, 以便它只轻微地干扰在任务本身。请单击此处查看此视频。(右键单击可下载.

讨论

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

在这里, 一个广泛的可访问的无线记录和刺激系统的电生理和行为研究在自由运动的动物提出。TWS 在行为分析中已被验证, 使用下位丘作为模型结构。TWS 方法有几个优势比现有的。首先, 该系统使用一个便携式 TWS 头阶段配备了前置放大器和充电电池, 允许稳定的长期录音多达1小时, 与相同的电池和无线操作距离长达5米. 第二, TWS 头阶段是轻和紧凑, 重量12克包括电池, 并开发, 以防止大鼠删除头部阶段和咀嚼电线。这是很好的耐受动物, 因为没有影响的 animal´s 行为剧目与和没有 TWS 头阶段被观察到, 使系统适用于一系列的行为任务。第三, 系统在 real-time 中传输。4, 通过同时进行双向记录和刺激神经活动, 该系统提供了一个复杂的工具来评估特定的大脑激活模式和行为之间的因果关系, 从而克服缺点单向系统。这一特点使该方法对深部脑刺激有特别的价值, 通常需要对长期行为实验中的刺激参数进行精确的评估、监测和调整。最后, 研制了一种可在常规立体定向手术中方便植入的集成记录、刺激和参考电极的慢性植入微电极装置。从这个角度来看, TWS 是一个综合的无线系统, 增加了刺激和记录实验的再现性。TWS 的记录质量与商业上可用的有线录音系统所产生的记录质量类似 (参见图 5)。

众所周知, 在大鼠中丘的电刺激会产生明显的逃逸行为, 其特征是奔跑或跳跃, 模仿环境挑战引起的恐惧反应11,12, 13。在本研究中, 利用 TWS 或传统系栓系统刺激下丘, 诱发了这种行为。为了测试 TWS 的刺激效果, 使用这两个系统比较了逃逸阈值--产生跑或跳的最小电流强度。TWS 头期大鼠能够快速、跳跃、跳出野外, 即显示典型的逃逸行为, 具有更大的运动自由。重要的是, 与传统的拴系系统相比, 逃逸阈值是相似的。在一起, 一个相当具有挑战性的范例被用来测试 TWS 的韧性, 它在一个无麻烦的方式中掌握。

TWS 也适合慢性电刺激实验, 因为微电极单位植入允许慢性使用。TWS 允许非常精确地调整刺激电流参数, 以便准确地检测刺激电流的频率和数量, 从而有效地引出行为反应。此外, 同样的动物被刺激与相同的电流阈值3天后和相同的期望行为反应被诱发。这表明, 刺激电极尖端周围的组织没有受到刺激电流的损害, 通常需要增加刺激电流的振幅, 并反复激励, 以引出相同的行为反应。

此外, 由于 TWS 微刺激器在图形用户界面中实时更新刺激参数, 因此可以显著缩短实验时间。其他用于临床前研究的电刺激19需要重新编程以刺激参数更新。在这些情况下, 该设备的程序是通过将动物通过电缆连接到一个编程单元。使用 TWS 时不需要这样做。

最后, 电池是固定的顶部的 TWS 头阶段和电连接到头部阶段通过一个双针磁铁连接器, 方便更换电池。其优点是, 在实验过程中, 可以改变电池, 而无需断开 TWS 头阶段从植入电极单元, 这是更舒适的动物。在目前的研究中, 我们使用的电池的操作时间只有1小时。如果实验的时间超过1小时, 建议使用额外的充电电池。TWS 可以连接到更换充电电池的容量 (i) 230 毫安为1小时操作时间或 (ii) 450 ma 约2.5 小时操作时间。两种类型的电池都可以在15分钟内完全充电。

总之, 本研究描述的操作 TWS 设计的神经刺激和记录从自由行为的小动物。本文还介绍了一套完整的植入式微电极单元、头台、接收机和软件。无线记录和刺激的质量与栓系记录系统的性能相似, 其优点是对动物更舒适、更轻便、更安全。因此, TWS 可以用来取代拴系系统, 因为它不限制动物的机动性, 并提供了一种灵活的方法, 以控制刺激和神经记录的情况下, 其他方法将是困难或不可能的。因此, TWS 可以是一个重要的工具, 以研究如何在定义的神经回路的电活动产生的某些形式的行为, 一个基本的问题在神经科学。

披露

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

共同作者托马斯和沙克托马斯是 "托马斯录音 GmbH" 的所有者, 是开发产品使用在本研究和与本文描述的一般研究题目有关。另外, 共同作者德克 Hoehl 从 "托马斯录音 GmbH 接受收入。如果公司成功地销售与本研究相关的产品, 他们可能会从财务上获益。这项研究中使用的 "托马斯录音" 设备专门用于行为神经科学, 实验和生物心理学-Philipps 大学没有任何电荷的马尔堡。

致谢

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

这项工作得到了德国工业研究协会联合会 (AiF; 赠款编号: KF2780403JL3) 的赠款研究的支持。

材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
Thomas 无线系统 （TWS） 版本 2.0Thomas RECORDING GmbHAN001165Thomas 无线系统 （TWS） 版本 2.0 是一款便携式多通道遥测系统，配有笔记本电脑、预装Microsoft Windows作系统和 TWS 控制软件。TWS包括：低噪音4通道预–和具有固定带宽、单通道常数的可编程主放大器;用于应用双相电流脉冲的电流刺激器、软件可编程的微型刺激器、植入式连接器系统和用于安装到动物的基本头部tage 单元。该系统随附一个带有 USB 端口连接的收发器，用于笔记本电脑或台式个人计算机，控制软件在 Microsoft作系统 Windows 下运行。TWS 系统可用于自由行为的小动物（例如大鼠、豚鼠）的细胞外神经刺激和记录。该系统也适用于大型动物（例如灵长类动物）。
Thomas 无线系统 （TWS） 软件ThomasRECORDING GmbH包含在 AN001165Thomas 无线系统的软件在 Windows作系统下运行Microsoft并为 Thomas 无线系统 （TWS） 提供图形用户界面 （GUI）。TWS GUI 提供对 TWS 功能的完全控制：4 通道记录和 1 通道刺激。
用于记录（4 通道）和刺激（单通道）的植入式四极Thomas RECORDING GmbHAN001132用于记录（4 通道）和刺激（单通道）的植入式四极管，用于 Thomas 无线系统 （TWS）.
记录四极管规格：四极管纤维材料：石英玻璃绝缘铂钨纤维，四管纤维外径：100&μ;m，尖端形状 D，阻抗 0.5-0.8MOHm;参比电极：尖端形状：D;阻抗：300-500kOhm;材质：石英玻璃绝缘铂/钨;刺激电极规格：纤维材质：铂/铱，直径：125µm， 漆绝缘， 尖端形状 ： D， 阻抗 ： <10kOhm，电极尺寸可由最终用户指定
用于记录（单通道）和刺激（单通道）的植入式微电极Thomas RECORDING GmbHAN001118用于记录（单通道）和刺激（单通道）的植入式微电极，用于 Thomas 无线系统 （TWS）.
记录电极规格： 电极纤维材料：石英玻璃绝缘铂钨纤维， 电极纤维外径：80µm/250&微型;m（请注明），尖端形状 D，阻抗 0.5-0.8MOHm;参比电极：尖端形状：D;阻抗。300-500 欧姆;材质：石英玻璃绝缘铂/钨;刺激电极规格：纤维材质：铂/铱，直径：125µm， 漆绝缘， 尖端形状 ： D， 阻抗 ： <用于电极植入的 10kOhm
支架Thomas RECORDING GmbHAN000838用于标准电极支架的微电极植入的特殊弯曲金属棒。该棒用于固定植入式电极。植入式电极用特殊的 Thomas RECORDING 水溶性胶 （AN001080） 固定在杆上。（不包括电极支架）
Thomas 无线系统的替换蓄电池电源 （3,7V/230mAh）Thomas RECORDING GmbHAN001208Thomas 无线系统的替换可充电电池（蓄电池），容量为 230mA，运行时间约为 1 小时。（尺寸：27mm x 20mm x 6mm，重量约 6 克）
Thomas 无线系统的替换蓄电池电源 （3,7V/450mAh）Thomas RECORDING GmbHAN001209Thomas 无线系统的替换可充电电池（蓄电池），容量为 450mA，运行时间超过 1 小时。（尺寸：48 毫米 x 30 毫米 x 4 毫米，重量约 11 克）
用于 Thomas 无线系统 （TWS） 可充电蓄能器Thomas RECORDING GmbHAN001207用于 Thomas Wirless 系统 （TWS） 可充电蓄能器（AN001209 和 AN001209）的电源供电充电器
水溶性胶Thomas RECORDING GmbHAN001080Thomas RECORDING 水溶性电极胶是一种特别选择的产品，用于神经科学研究中的植入式微电极。其独特的特性确保了电极和安装设备之间的刚性连接，尽管它很容易用温水去除。Thomas RECORDING 水溶性电极胶可以开箱即用，无需任何耗时的准备工作。Thomas RECORDING 水溶性电极胶对人类、动物或环境无害。数量：1盒10克
差分前置放大器Thomas RECORDING GmbHAN000329微型差分前置放大器，型号MDPA-2是一款2通道、差分输入前置放大器，专为从可激发组织中进行低噪声记录而设计。它旨在用于细胞外记录，并与植入植入式微电极相结合，以使用 Thomas 无线系统 （TWS） 自由移动动物应用。2 通道微型差分前置放大器 （MDPA-2） 连接到植入式微电极，以提供初始的 10 倍放大级。理想情况下，使用 Thomas RECORDING 石英玻璃绝缘铂/钨电极来产生具有高信号幅度和低噪声水平的最佳记录结果。MDPA-2 具有额外的公共接地和参比电极输入。
连接电缆Thomas RECORDING GmbHAN000330用于将 Thomas 微型差分前置放大器 （MDPA-2） 连接到主放大器和蓄能器电源的连接电缆。
用于微型前置放大器Thomas RECORDING GmbHAN000328用于微型差分前置放大器 （MDPA-2） 的可充电蓄能器电源。
蓄能器充电器 （美国）Thomas RECORDING GmbHAN000167电源AN000328的蓄能器充电器 （美国电源插座连接器）
蓄能器充电器 （欧盟）Thomas RECORDING GmbHAN000168用于电源AN000328的蓄能器充电器（欧盟电源插座连接器）
差分前置放大器/主放大器/带通滤波器Thomas RECORDING GmbHAN000677TREC 交流主放大器 （LabAmp-03） 是一款单通道差分主放大器，适用于神经生理学应用（例如使用微电极进行细胞外记录）。该仪器设计用于微型差分前置放大器，型号为 MDPA-2。LabAmp-03 的单通道包含一个高增益、低噪声差分放大器级，然后是低频和高频滤波器。该放大器有两个不同的滤波放大器，一个单单元活动 （SUA） 滤波器 –放大器和局部场电位 （LFP） 滤波放大器在信号路径中并联连接。录音模式在第一级提供两级信号增益（x10、x100），在最终放大器级中提供 4 个附加电平（x5、x10、x25 和 x50）。每个放大器对单单位活动 （SUA） 500Hz&hellip 具有不同的带通特性;20kHz 和局部场电位 （LFP） 0,1Hz…140Hz. 设备中集成了音频监视器和窗口鉴别器。LabAmp-03 具有带扬声器的集成音频监视器。该装置提供电生理信号的音频再现。该装置将音频放大器组合在一个紧凑、坚固的包装中。这特别适用于监测神经放电和肌肉收缩。音频监视器输入在内部连接到 SUA-Filter 放大器输出。LabAmp-03 随附外部电源，主电源工作电压范围为 100-240V AC/50-60Hz。
USB 示波器Thomas RECORDING GmbHAN001096USB PC Oszilloskop， 2 Kanal.这款 2 通道 PC 示波器非常适合在笔记本电脑上移动使用，并永久安装在控制柜、工业设备以及许多其他需要小型、轻便和强大示波器的应用中。该示波器连接到主放大器的信号输出，用于显示 Thomas 无线系统 （TWS） 植入式微电极期间记录的细胞外活动。用户可以使用随附的 PC 软件直接在 PC 上通过多个数据接口获取测量数据。
激励发生器多通道系统STG3008-FA电流激励发生器 （STG） 和电压驱动激励实现三种功能：电流驱动激励、电压驱动激励、控制和定时。STG 提供 2、4 或 8 个独立输出通道。STG 的每个输出通道都集成了隔离单元，能够提供任意波形。
电极帽保护Thomas RECORDING GmbHAN001193用于 Thomas 无线系统的植入式电极装置保护帽
手术设备剪刀、钝头镊子、抹刀、手术剪、牙钻和棉签
药物和化学品异氟醚、赛洛卡因、盐酸曲马多（曲马多-CT，AbZ-Pharma GmbH，乌尔姆，德国）、右泛醇眼药膏（Bepanthen，拜耳公司，勒沃库森，德国）、3% 过氧化氢、聚维酮碘（Betaisodona，Mundipharma GmbH，林堡，德国）和 70% 乙醇;
固定材料包括不锈钢螺钉（BN650 M1.2x5;4.7 mm）、丙烯酸树脂（Paladur，Heraeus Holding GmbH，Hanau，Germany）、紫外线胶（Cyberbond U3300，Cyberbond Europe GmbH，德国）和帽保护器（Thomas Recording GmbH，Giessen，德国）;
附加材料手套、加热垫、注射器和生理盐水。
小动物立体定位仪 （SASI）Thomas RECORDING GmbHAN000287应根据研究中使用的动物（大鼠、豚鼠、猴子等）选择模型
摄像机EverFocusEverFocus，型号：EQ150
开阔场地由透明或灰色亚克力制成，呈圆形，尺寸为 40x40x40 厘米
高架加迷宫由灰色亚克力制成，由两个张开的手臂（50 厘米长 x 10 厘米宽）和两个闭合的手臂（50 厘米长 x 10 厘米宽，墙壁高 40 厘米）组成，它们从离地板 50 厘米的中央平台延伸出来。
管 微型 的可充电电源 用于器

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