Summary
Ratten Angst-ähnliches Verhalten getestet durch die erhöhte plus Labyrinth hängt stark von der Testumgebung. Hier zeigen wir, wie Geräte-Einstellungen, besonders Arm Struktur, Verhalten auf das Labyrinth beeinflussen, und wir erklären ein zuverlässiges Protokoll, um Wirkungen angstlösende Medikamente zu erkennen. Dieser Bericht wird Angst Forschung beitragen.
Abstract
Die erhöhte plus Labyrinth-Test ist ein behavioral Test zur Beurteilung tierische Angst bei Nagetieren. Obwohl dieser Test auf dem Gebiet der Verhaltensforschung allgemein angewendet wird, werden oft widersprüchliche Ergebnisse aus verschiedenen Labors angeboten. Ermittlung der Gründe für die unterschiedlichen Ergebnisse, konzentrierten wir uns zuvor auf Arm-Features, die Laboratorien, die meisten vor allem die Anwesenheit/Abwesenheit leisten an den Seiten mit ausgebreiteten Armen und der Transparenz/Undurchsichtigkeit der geschlossenen Arm Wände unterscheiden. In einem früheren Bericht wir verwendet einen benutzerdefinierten gestaltete Container Ratte Verhalten auf verschiedene Kombinationen von offenen und geschlossenen Arm Designs unter sonst gleichen Versuchsbedingungen zu vergleichen, und zeigte, dass Unterschiede im Arm Funktionen experimentelle stören Ergebnisse. In Kürze öffnen Sie Arm leisten deutlich erhöhte Angst-ähnliches Verhalten bei Ratten, während transparente Arme können auch dieses Verhalten gesunken. Darüber hinaus haben wir eine höhere Empfindlichkeit des Effekts eine angstlösende Medikament in einer Kombination aus keine-zulasten offenen Arm + opak ummauerten geschlossenen Arm im Vergleich mit einer Kombination aus zulasten offenen Arm + transparente ummauerten geschlossenen Arm überprüft. In diesem Bericht stellen wir Ihnen unser Protokoll für die erhöhte plus Labyrinth Test, zusammen mit der Diskussion der wichtigsten Ergebnisse aus den vorherigen Bericht und unsere experimentelle Erfahrung. Wir glauben, dass dieser Bericht enthalten nützliche Informationen für Forscher, die beschäftigt haben oder planen, verwenden Sie die erhöhte plus Labyrinth in ihren Studien.
Introduction
Die Zahl von Patienten mit affektiven Störungen, einschließlich-Angststörung und Depression, steigt. Obwohl die Entwicklung dieser Erkrankungen genetische und umweltbedingte Faktoren beinhaltet, sind detaillierte pathogenen Mechanismen noch nicht vollständig verstandenen1. Forschung muss daher konzentrieren sich auf die Aufdeckung der zugrunde liegenden Mechanismen von affektiven Störungen sowie die Entwicklung von wirksamen Medikamenten, die weniger Nebenwirkungen haben.
Verhaltens-Tests für Versuchstiere eignen sich für die Untersuchung von höheren Gehirnfunktion, einschließlich Emotion. Wie das Verhalten der Tiere sehr variabel ist, unterscheiden sich experimentelle Ergebnisse oft zwischen Labors, auch wenn eine identische Inzucht Belastung verwendet2war. Forscher müssen also auch die grundlegenden Funktionen der experimentelle Geräte zu verstehen, die sie ergreifen, um zuverlässige und präzise Ergebnisse im Labor zur Verfügung zu stellen.
Die erhöhte plus Labyrinth Test wurde ursprünglich gegründet, um emotionale Reaktivität in Nagetieren3,4zu prüfen. Den gesamten Apparat in der Regel befindet sich 500 mm über dem Boden und besteht aus zwei offenen und geschlossenen zweiarmig, die eine plus Form zu machen. Messungen der Arm Exploration (einschließlich der Dauer und Häufigkeit der Einträge an jedem Arm), Abstand reiste und bestimmte Verhaltensweisen wie gestreckt behandelnden Haltung des unterworfenen Tiere werden Beobachtungsdaten Zeiten aufgezeichnet. Durch diese Maßnahmen wird die tierische Angst als ein experimentelles Ergebnis geschätzt.
Die erhöhte plus Labyrinth-Test dient in der ganzen Welt, aber nicht alle Labore verwenden die gleichen Apparat Design5,6, und diese Unterschiede können die experimentellen Ergebnisse beeinflussen. Unterschiede sind z. B. das Vorhandensein oder Fehlen von Felsvorsprüngen entlang der offenen Armen und/oder die Nutzung von transparent oder opak Wände für geschlossene Arme5,6. Die Vorsprünge entlang offenen Armen und die Verwendung von transparenten Wänden für geschlossene Arme wurden entwickelt, um Tiere fallen aus dem Apparat7zu verhindern und Verhaltensbeobachtungen innerhalb der geschlossenen Arme, jeweils8,9zu erleichtern. Zwar gab es einige Studien, die wie einzelne Arm Struktur Unterschiede untersucht die tierische Angst1,2,5,10,11 erkennen beeinträchtigen können , die kombinierten Auswirkungen offen (mit/ohne kurze Kante) und geschlossenen (transparenten/undurchsichtigen Wänden) Arm Features auf das Verhalten der Tiere ist noch nicht untersucht.
In einem kürzlich veröffentlichten Bericht diskutierten wir die Wirkung dieser Kombinationen von Arm-Designs auf Angst-ähnliches Verhalten in Ratten12. In Kürze öffnen Sie Arm leisten deutlich erhöhte Angst-ähnliches Verhalten bei Ratten, während transparente Arme können auch dieses Verhalten gesunken. Darüber hinaus überprüft wir höhere Empfindlichkeit des Effekts eine angstlösende Medikament in einer Kombination aus keine-zulasten offenen Arm + opak ummauerten geschlossenen Arm im Vergleich mit einer Kombination aus zulasten offenen Arm + transparente ummauerten geschlossenen Arm. In diesem Bericht werden wir vorstellen unser Protokoll für die erhöhte plus Labyrinth Test, zusammen mit Diskussion der wichtigsten Ergebnisse aus dem vorherigen Bericht. Wir glauben, dass dieser Bericht enthalten nützliche Informationen für diejenigen, die beschäftigt haben oder planen, verwenden Sie die erhöhte plus Labyrinth in ihren Studien.
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Protocol
Alle hier beschriebene experimentelle Verfahren wurden von den institutionellen Animal Care und Nutzung Ausschuss der Meiji-Universität (IACUC 14-0002(1)). genehmigt Tiere, die in die repräsentativen Ergebnisse waren wie folgt hergestellt: männliche Sprague-Dawley Ratten wurden von einer Labor-Tier-Firma gekauft und befindet sich in Gruppen von 4 Tieren pro standard Rattenkäfig (W200 D410 × × H250 mm) für mindestens eine Woche vor Beginn der der Behavioral Experiments. Die Unterbringung von Tieren-Zimmer war gepflegt, bei standard Umgebungsbedingungen für Licht (12:12 hell/dunkel-Zeitplan mit auf bei 10:00 h leuchtet), Raumtemperatur (25,0 ± 0,5 ° C), Luftfeuchtigkeit (55 ± 10 %) und Lüftung (10 x / h), und Tiere hatte ad libitum Zugang zu Lebensmitteln ( Oriental Yeast Co. Ltd, Tokyo, Japan) und Wasser. Die Tiere waren in einem standard Rattenkäfig (W410 x D250 x H200 mm, Toyoriko Co., Ltd., Aichi, Japan) mit Papier, Bettwäsche (Alpha-Dri, LSG Corporatin, Tokio, Japan) gehalten.
(1) erhöhte Plus Maze Test
- Richten Sie die erhöhten Plus Labyrinth Apparat in einem maßgeschneiderten Container (W1, 500 × D1, 500 × H2, 000 mm) (Abbildung 1A) mit einem Plus-förmigen Metallgerüst 500 mm über dem Boden, den Lauf zu unterstützen so Arme (Abbildung 1 b), in der Container-Decke, Beleuchtung beleuchten Sie die Oberfläche des Labyrinths die erforderliche Lichtstärke (Abbildung 1) und eine digitale Videokamera in der Mitte Decke ermöglichen live video-Überwachung der behavioral Tests (Abbildung 1).
- Die Arme (L500 x W100 mm) auf die Plus-förmigen Rahmen befestigen, und dann fix die quadratischen Mittelbahnsteig (W100 x D100 mm) in der Mitte der vier Arme (Abbildung 1 -F).
Hinweis: In unserem Labor haben wir zwei Arten von offenen Armen (L500 x W100 mm) und zwei Arten von geschlossenen Arme (L500 x W100 x H450 mm) (Abbildung 1). Die geschlossene Arme haben entweder transparent oder opak Wände (Abbildung 1), und die offenen Arme sollen mit oder ohne einen kurzen Felsvorsprung (H5 mm, Abbildung 1E). Die quadratischen Mittelbahnsteig (W100 × D100 mm) befindet sich im Zentrum der vier Arme (Abbildung 1 -F). So, die folgenden vier Kombinationen von Waffen zubereitet werden, nach experimentellen Zweck: offene Arme mit leisten + geschlossene Arme mit transparenten Wänden (leisten/Transparent), offenen Armen mit leisten + geschlossene Arme mit undurchsichtigen Wänden (leisten/opak), offenen Armen ohne Vorsprünge + geschlossene Arme mit transparenten Wänden (No-leisten/Transparent) und offenen Armen ohne Vorsprünge + geschlossene Arme mit opaker Wände (No-leisten/opak). Die Oberfläche der Start-und Landebahn Arm ist schwarz, um bessere Tier Verfolgung durch die automatisierte Verhalten-Analyse-Software, wie in Abschnitt 2 beschrieben Verhaltensanalyse zu ermöglichen. - Stellen Sie auf der Oberfläche des distalen Teils jeder Arm und zentrale Plattform bis ca. 100 Lux Beleuchtungsstärke.
- Vor jedem Test den gesamten Apparat mit 70 % Ethanol-Lösung reinigen und mit destilliertem Wasser abwischen.
- Klicken Sie auf "Record-Taste" auf der Harddisk-Recorder, die digitale Videokamera zu starten, die die Ratte Verhalten für das imaging-Analyse beschrieben in Abschnitt 2, Verhaltensanalyse Video aufzeichnen wird.
- Ein Tier auf der zentralen Plattform für einen offenen Arm und freie Erkundung auf dem Gerät für 5 Minuten.
- Klicken Sie auf den Button"Stop" auf der Harddisk-Recorder für die Aufnahme zu beenden.
- Die Anzahl der Kot und Urinieren nach der Rückkehr der getesteten Tieres in der Tierhaltung-Raum.
- Wiederholen Sie ab Schritt 1.4 bis zum Ende des Experiments.
Hinweis: Ein trocken Testlauf erfolgt stets vor Beginn jedes Experiment, um zu überprüfen, dass die experimentelle Einstellungen korrekt eingerichtet sind, bevor alle Versuchstiere den experimentellen Bedingungen ausgesetzt sind. Andernfalls kann einige Tiere, besonders das erste Tier unterschiedliche Umweltbedingungen (z.B. Geräusche möglicherweise induziert durch den Experimentator während der Manipulation und/oder Tier Hinweise, die möglicherweise durch das zuvor getestete Tier links) auftreten.
Hinweis: Die Experimentatoren sind in der Nähe der Container, wenn ein Tier getestet wird. Obwohl die Experimentatoren nicht sichtbar sind kann die Ratte noch in der Lage, ihnen über Geruch und/oder Ton zu spüren also.
(2) Verhaltensanalyse
Hinweis: Verhaltensanalyse erfolgt durch manuelle Beobachtung und Analyse-Software automatisiert.
-
Manuelle Beobachtung
- Nachdem das Tier auf dem Sims platziert haben, beachten Sie Folgendes: Anzahl der Einträge (ein Eintrag auf den Arm ist definiert als jede Instanz, wenn alle 4 Pfoten auf dem Arm sind), verbrachte Zeit an jedem Arm und Anzahl der gestreckt behandelnden Haltungen gegenüber einen offenen Arm , und sichern Sie die zentrale Plattform in Richtung einer geschlossenen Arm.
- Dauer und Häufigkeit der Stoppuhr und Graf für 5 min, ab wann die Türen des Behälters geschlossen sind oben festgelegten Verhaltensweisen zu messen.
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Automatisierte Analyse
- Mit dem verfügbaren Software-Programm, Folgendes aufzuzeichnen: Abstand reiste, Zeit verbrachte in verschiedene Positionen auf offenen Armen (mittleren proximalen und distalen Segmente von der zentralen Plattform), und eine Analyse von Minute zu Minute der Zeit aufgewendet offen und geschlossen Arme.
- Klicken Sie auf den startButton"" der automatisierten Analyse-Software zur gleichen Zeit, als die manuelle Beobachtung beginnt (die Aufzeichnung stoppt automatisch wenn Aufnahme Dauer festgelegt ist).
Hinweis: In dieser Studie verwendete Verhaltensanalyse-Software verfolgt das Tier über den Kontrast mit dem Hintergrund-Feld; das Tier, das eine feste Größe zugeordnet ist, wird als das hellere Objekt identifiziert und die Fortbewegung der Mittelpunkt kann somit für Tier-Tracking verwendet werden.
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Representative Results
In der vorangegangenen Studie verglichen wir die kombinierte Wirkung der offenen Arm Simsen und Transparenz der geschlossenen Arm Wände auf der explorativen Verhaltensweisen auf der Labyrinth-12. Ratten deutlich viel weniger Zeitaufwand auf offenen Armen ohne Vorsprünge als auf offenen Armen mit leisten (F [1, 60] = 13,49, P = 0,0005) (Abbildung 2A). Ähnliche Ergebnisse wurden auch für die Anzahl der Einträge in offenen Armen gefunden (F [1, 60] 11.17, P = < 0.0014)12, was darauf hindeutet, dass das Vorhandensein von Felsvorsprüngen Ratte exploratives Verhalten auf offenen Armen erhöht. Ratten zeigten deutlich weniger gestreckt behandelnden Haltung auf dem Gerät, die Arme mit transparenten Wänden als Gerät geschlossen hatte, die Arme mit undurchsichtigen Wänden geschlossen hatte (F [1,60] = 4.03, P = 0.0492) (Abb. 2 b), was darauf hindeutet, dass transparente geschlossenen Arm Wände verringert Angst-ähnliches Verhalten bei Ratten. Ratten verbrachte mehr Zeit auf das distale Segment mit ausgebreiteten Armen auf den Apparat, der transparente geschlossenen Arm Wände als Gerät mit undurchsichtigen geschlossenen Arm Wände hatten (F [1,60] = 8,00, P = 0.0983) (Abbildung 2), was darauf hindeutet, dass transparente Wände Mai auch Ratte offenen Arm exploratives Verhalten zu verringern. Darüber hinaus war offen Arm Exploration auf das distale Segment signifikant niedriger in der No-leisten/opak-Vorrichtung im Vergleich zu den Simsen/Transparent-Apparat (Abbildung 2). Zusammengenommen zeigen diese Ergebnisse, dass Nachweisempfindlichkeit für Angst-ähnliches Verhalten, je nachdem welche Arm Design verwendet, und der No-leisten/opak-Apparat abweichen kann und Simsen/Transparent Apparat kann eine relativ große Unterschied in der Empfindlichkeit.
Um Unterschiede in der Empfindlichkeit zwischen verschiedenen Arten von Arm-Design zu überprüfen, wurde ein weiteres Experiment mit angstlösende Medikament Diazepam (Abbildungen 3A–D) durchgeführt. Das No-leisten/Opak-Gerät erkannt in Kürze die Wirkung von Diazepam Hochdosis-Behandlung auf die Zeit in die offenen Arme während der leisten/Transparent-Apparat nicht (Abbildung 3A–B). Ähnliche Ergebnisse wurden auch für die Anzahl der Einträge in offenen Armen12 (Daten nicht gezeigt) gefunden. Der Mangel an keine wesentlichen Auswirkungen auf den Simsen/Transparent-Apparat kann gewesen sein, dass die basale Aktivität (Fahrzeug Behandlung) an diesem Gerät war höher als auf der No-leisten/opak-Apparat, aber dieser offenen Arm Exploration nie überschritten 33 % der die Zeit in jedem Stadium an beiden Geräten. Daher dieser engeren offenen Arm Exploration Zeitbereich machte es schwieriger, die angstlösende Wirkung von Diazepam auf den Apparat Ledged/Transparent (Abbildung 3–D) zu unterscheiden.
Abbildung 1 : Maßgeschneiderte Anlagen für erhöhte plus Labyrinth-Test Panel (A): erhöhte plus Labyrinth Testcontainer. Das Gerät befindet sich in der schwarzen Behälter und ein Monitor neben die Container Projekte live-Film Bilder aufgezeichnet während des Experiments. Zentrale (B): Plus Labyrinth Rahmen im Container unterstützt, die montierte Waffen. Gesamten Apparat ist befindet sich 500 mm über dem Boden. Feld (C): Deckenbeleuchtung, die Intensität eingestellt werden kann. Eine digitale Videokamera (siehe Pfeil) umgeben von Beleuchtung Datensätze Tierbewegungen. Panel (D): erhöhte plus Labyrinth Arme und zentrale Plattform, die ausgestattet sind, Rahmen; von links nach rechts undurchsichtige Wand geschlossen Arm, keine-Kante offen Arm, zulasten offenen Arm, Mittelbahnsteig, transparent geschlossen Wandarm. Platte (E): Nahaufnahme mit ausgebreiteten Armen; Öffnen Sie von links nach rechts, offenen Arm ohne Vorsprünge Arm mit Vorsprüngen (H5 mm). Panel (F): ein Beispiel für ein konstruiertes Labyrinth (leisten/Transparent Apparate). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2 : Offenen Arm Simsen reduzieren Angst-ähnliches Verhalten und transparente Wände teilweise verringern Angst-ähnliches Verhalten. Männliche Ratten unterzog sich die erhöhte plus Labyrinth testen mit verschiedenen Kombinationen von Arm-Strukturen (leisten/Transparent, Simsen/opak, No-leisten/Transparent und No-leisten/opak). Test-Bestellung wurde über den experimentellen Gruppen (jede Kombination von Apparat Typ) normalisiert. Dieses Verfahren normalisiert unerwartete Effekte, die aufgrund der Tageszeit der einzelnen Tests aufgetreten sein könnte. Verkleidung (A): Zeit für offenen Armen ausgegeben; Zentrale (B): Anzahl der gestreckt behandelnden Körperhaltungen; Feld (C): Zeit verbrachte im distalen Bereich mit ausgebreiteten Armen. Solide und gestrichelte Linien zeigen signifikante Haupteffekte von offenen und geschlossenen Arm Strukturen bzw. (Two-Way ANOVA, #P < 0,1 * P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001). Verschiedene Buchstaben neben den Bars in Feld (C) zeigen einen signifikanten Unterschied (Bonferroni mehrere Vergleichstest, ein < b, P < 0,0125). Die Daten wurden als Mittelwert mit SEM ausgedrückt (n = 16 pro Versuchsgruppe). Diese Zahlen wurden von unseren vorherigen Bericht12geändert. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3 : Nein-leisten/opak Apparat zeigt höhere Nachweisempfindlichkeit angstlösende Wirkung von Diazepam. Männliche Ratten unterzog sich die erhöhte plus Labyrinth mit No-leisten/opak oder Simsen/Transparent Apparat, 30 min. nach der Behandlung mit Fahrzeug (0 mg/kg), Low (0,25 mg/kg) oder High (0,5 mg/kg) Dosen von angstlösende Medikament Diazepam (intraperitoneale testen Injektion). Diazepam Lösung löste sich in normalen Kochsalzlösung 0,9 % mit einem Oberfläche aktivieren. In diesem Experiment die Test Reihenfolge von den drei Drogen Behandlungsgruppen und zwei Arten von Apparat Design wurden randomisiert entfallen alle Effekte, die durch die Tageszeit der einzelnen Tests auftreten können. Platten (A & B): Gesamt Prozent bzw. offenen Armen leisten/Transparent und No-leisten/opak Apparatur, aufgewendete Zeit (5 min). Platten (C & D): minütlich Prozent für die offenen Arme der leisten/Transparent und No-leisten/opak Apparat, beziehungsweise Zeitaufwand. Verschiedene Buchstaben neben Bars im Bedienfeld "(B) zeigen einen signifikanten Unterschied zwischen den Behandlungen (Bonferroni mehrere Vergleichstest, ein < b, P < 0.0167). Solide und gestrichelte Linien in Platten (C & D) zeigen signifikante Haupteffekte der Zeitraffer und Diazepam Behandlungen, bzw. (wiederholt Maßnahmen ANOVA, *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001). die Daten wurden zum Ausdruck gebracht, wie Mittelwert mit SEM Zahlen in den Spalten zeigen Tiere, die das Experiment abgeschlossen (Zahlen in Klammern geben Tiere, die das Gerät herunterfallen). Diese Zahlen wurden von unseren vorherigen Bericht12geändert. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
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Discussion
Mit steigender Anzahl von Patienten mit psychiatrischen Erkrankungen, einschließlich der Angststörung, ist es wichtig, innovative Studien zur Verbesserung des Verständnisses der Grundmechanismus der Angst entwickeln. Um dies zu erreichen, ist es auch wichtig, die experimentellen Verfahren zu optimieren. Damit zur Verbesserung der Anwendung der erhöhten plus Labyrinth Test, wir haben bewiesen, dass die Wirkung von Arm-Funktionen auf die experimentellen Ergebnisse mit Ratten.
Die erhöhte plus Labyrinth wurde ursprünglich gegründet, um tierische Angst in Nagetieren4testen, aber obwohl die grundlegenden Strukturen sind in der Regel konsequent (z.B.erhöhte 500 mm über dem Boden mit einer plus-Form), verschiedenen Arm Designs werden oft verwendet. Ursprünglich, das Gerät bestand aus offenen Armen ohne Vorsprünge und Arme mit undurchsichtigen Holzwände geschlossen. Jedoch vor kurzem offenere Armen entstanden mit leisten, Tiere, die das Gerät Herunterfallen zu verhindern, und geschlossene Arme wurden auch mit transparenten Wänden, Beobachtung des Verhaltens an den geschlossenen Armen zu erleichtern. Allerdings gab es keine Berichte, die die kombinierten Effekte von diesen Arm Funktionen über die experimentellen Ergebnisse in der erhöhten plus Labyrinth Test behandelt. Wie gezeigt durch unsere Ergebnisse, das Vorhandensein von offenen Arm leisten und die Transparenz von geschlossenen Arm Wände verringerte Vermeidung von offenen Arm Exploration bei Ratten (Abbildung 2) kann die Empfindlichkeit der angstlösende Wirkung von Diazepam ( verringern. Abbildung 3). Leisten/Transparent Apparat erschien mehr Exploration auf die offenen Arme Fahrzeug Förderung behandelten Ratten (Abbildung 3). Dies reduziert Verhaltenstherapie Diskriminierung in offenen Arm Exploration Aktivität zwischen Fahrzeug und Diazepam behandelt Ratten, wodurch es schwieriger zu erkennen, Unterschiede in Angst. Daher die geringere Empfindlichkeit des Simsen/Transparent Apparat kann bedeuten, dass mehr Tiere müssten getestet werden, um signifikante zeigen Wirkung im Vergleich zu No-leisten/opak Apparat.
In unserem Protokoll wurde die Dauer und die Anzahl der Einträge auf jedem Arm manuell durch gut ausgebildete Experimentatoren gemessen. Dieses Verfahren ermöglicht eine genaue Messung der Arm Einträge, definiert als alle 4 Pfoten auf einen Arm gelegt. Es stimmt zwar, dass automatisierte Tier-Tracking-Systeme gibt es für einige Verhaltensstörungen Parameter, wie z. B. Reisen Abstand in unserer Erfahrung, sie nicht immer genau und nicht-Einträge auf arme unterscheiden können, vor allem, wenn Tiere Führen Sie gestreckt behandelnden Haltungen in der Nähe der Grenze zwischen der zentralen Plattform und einen Arm. Wir empfehlen daher, mit einer Kombination von manuellen und automatisierten Beobachtungssysteme, basierend auf ihre jeweiligen Stärken für jeden Verhaltens Parameter.
Es gibt einige andere Protokoll Unterschiede zwischen Laboratorien. Beispielsweise legen einige Forscher Tiere auf der zentralen Plattform mit Blick auf eine geschlossene Arm13,14, während andere die Ratten gegenüber einer offenen Arm15,16platzieren. Darüber hinaus testen einige Forscher Verhalten sofort nach der Einnahme von Ratten aus ihrem Zuhause-Käfig, während andere den Ratten einige Zeit zum Akklimatisieren zum Testraum vor Testbeginn Verhalten erlauben. In Bezug auf erstere in Vorversuchen erlebten wir wie die Ergebnisse unterschieden sich je nach dem arm die Ratte zunächst konfrontiert; Es wurde eine erhöhte Inzidenz von Eingabe auf den Arm, dass die Ratte gelegt wurde vor. Auch, wenn die Ratten vor einem geschlossenen Arm gelegt wurden, einige Tiere aus diesem geschlossenen Arm nach dem ersten Eintrag rührte sich nicht. In einem solchen Fall ist es schwierig zu unterscheiden, ob die Ratten Konflikt zwischen der offenen und geschlossenen Arme erleben oder, die sie nur in einem geschlossenen Raum zu sein, ohne jemals zu erkennen das Vorhandensein von den offenen Armen bevorzugen. Obwohl in unserer Studie haben wir entschieden haben, legen Sie die Ratten, die mit Blick auf einen offenen Arm, um eine hohe Inzidenz von unter Konflikt, zu gewährleisten, empfehlen wir, dass weitere Studien durchgeführt werden, um sicherzustellen, dass die Wirkung von diesem Protokoll Unterschied auf experimentelle Ergebnisse richtig ist untersucht.
Die Messungen der Erforschung des distalen Segments der offenen Armen und von Minute zu Minute Analyse zur Verfügung gestellt zusätzliche detaillierte Informationen zu Ratte Angst-ähnliches Verhalten. Diese Messungen dazu beigetragen, die Unterschiede in der Empfindlichkeit zwischen den verschiedenen Arm-Designs zeigen. Dennoch berichteten Ergebnisse der Angst erforschen mit der erhöhten plus Labyrinth Test berichten oft nicht diese Art von Detailmessungen13,17,18. Daher empfehlen wir, dass Forscher auch weitere Informationen über Ratte explorative Aktivitäten berichten, einschließlich der distalen Exploration von Minute zu Minute, und Analyse auch gestreckt behandelnden Haltung.
Zusammenfassend empfehlen unsere Erkenntnisse verschiedene Apparate ihre Eigenheiten haben können. Aus diesen Tests haben wir gezeigt, dass No-leisten/opak Apparat die Wirkung von Medikamenten, die möglicherweise mit angstlösende Wirkung besser erkennen kann. Im Gegensatz dazu ist es denkbar, dass leisten/Transparent Apparat einen ähnlichen Vorteil haben kann, wenn Sie mögliche furchtauslösende Medikamente zu testen. Bisher nutzten Verhaltens Tests nicht nur für Drogen-Screening, sondern auch für Phänotypisierung Assays in mutierten Tieren. In der Tat ermöglichen erweiterte Genom Schnitttechniken schnelle Produktion von mutierten Tieren. Daher ist es sehr wichtig, Testverfahren mit besseren Präzision und Sensibilität zu besser erkennen die Schwankungen im Verhalten zu entwickeln. Dieser Bericht zeigt eine verbesserte Anwendung der die erhöhte plus Test für tierische Angst Forschung basierend auf den erwarteten Funktionen der Droge oder Ziel Gene. So glauben wir, dass unsere Bemühungen dazu beitragen werden, fördern Forschung beschäftigt die erhöhte plus Labyrinth.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Acknowledgments
Die Autoren danken Herrn Akihiro Hirano für seine Hilfe bei der Herstellung der kundenspezifischen Apparat. Die Autoren möchte Herr Kosuke Takahashi und Herr Shingo Nakajima für ihre technische Unterstützung zu danken. Diese Arbeit wurde durch Forschung an Risiko von chemischen Substanzen, Gesundheit und Labor Sciences Research Grants, Ministerium für Gesundheit, Arbeit und Wohlfahrt, Japan (H25-KAGAKU-IPPANN-003) und Research Project Grant A durch Institut für Wissenschaft und Technologie Meiji unterstützt. Universität, Japan.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Customized container (W1500 × D1500 × H2000 mm) | NA | NA | Handmade by Mr. Akihiro Hirano |
| Lighting | NA | NA | Handmade by Mr. Akihiro Hirano |
| Elevated plus maze apparatus | NA | NA | Handmade by Mr. Akihiro Hirano |
| Digital video camera | Watec | WAT-250D2 | Any suitable video camera can be attached to a hard disk recorder for recording tracking profiles. |
| Hard disk recorder | TOSHIBA | RD-R200 | Any suitable hard disk recorder can be attached to the digital video camera. |
| Sprague-Dawley rats | Charles River Laboratories Japan, Inc. | NA | Any suitable rats can be used for your study |
| Standard rat cage | Toyoriko | TP-105 | Any suitable rat cage be used for your study |
| Instrument to measure light intensity | AS ONE | 1-5818-02 | Any suitable instrument to measure light intensity |
| EthoVision XT version 8.0 | Noldus | NA | Any suitable software to measure animal behavior |
| Diazepam | Taiyo Pharmaceutical Industry | 1124402A2061 | Any suitable drug can be used for your study |
| Tween 80 | Wako Pure Chemical Industries | 9005-65-6 | Any suitable drug can be used for your study |
References
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