Summary
Råttornas ångest-liknande beteende testas av högstämt plus labyrint varierar mycket beroende på testmiljön. Visar här vi hur apparaten inställningar, särskilt arm struktur, påverkar beteendet på labyrinten och vi förklara en pålitligt protokoll för att upptäcka effekter av ångestdämpande droger. Detta betänkande kommer att bidra till ångest forskning.
Abstract
Högstämt plus labyrint test är en beteendevetenskaplig test för att bedöma djurens ångest hos gnagare. Även om detta test är i stor utsträckning inom beteendevetenskap, tillhandahålls ofta motstridiga resultat från olika laboratorier. För att identifiera orsaker till olika utfall, fokuserat vi tidigare på arm-funktioner, som skiljer sig mellan laboratorier, de flesta särskilt närvaro/frånvaro av avsatser på sidorna av öppna armar och den öppenhet/svårtydd av slutna arm väggar. I en tidigare rapport, vi använde en anpassad designade behållare för att jämföra råtta beteende på olika kombinationer av öppna och slutna arm mönster under annars identiska experimentella förhållanden, och visade att skillnader i arm funktioner som stör experimentella resultat. I korthet, öppna arm avsatser betydligt ökad ångest-liknande beteende hos råttor, medan transparenta armar kan också ha minskat detta beteende. Dessutom verifierat vi en högre upptäckt känslighet av effekten av ett ångestdämpande läkemedel i en kombination av nr-flyghöjd öppen arm + ogenomskinlig muromgärdade stängda arm jämfört med en kombination av flyghöjd öppen arm + transparent muromgärdade stängda arm. I detta betänkande införa vi vår protokoll för högstämt plus labyrint test, tillsammans med diskussion av de viktigaste resultaten från föregående rapport och vår experimentella erfarenhet. Vi anser att detta betänkande kommer att ge användbar information för forskare som har anställda eller som planerar att använda högstämt plus labyrint i sina studier.
Introduction
Antalet patienter som lider av affektiva störningar, inklusive ångest och depression, ökar. Även om utvecklingen av dessa sjukdomar innebär både genetiska och miljömässiga faktorer, är detaljerad patogena mekanismerna ännu inte helt förstått1. Forskningen behöver därför fokusera på avslöja vilka underliggande mekanismer humörstörningar, liksom utvecklingen av effektiva läkemedel som har färre biverkningar.
Beteendemässiga tester för försöksdjur är användbara för att undersöka hjärnans högre funktion, inklusive känslor. Djurs beteende är mycket varierande, experimentella resultat skiljer sig ofta mellan laboratorier, även om en identisk inavlade stammen var används2. Forskare måste således också förstå de grundläggande funktionerna i de experimentella enheter som de antar för att tillhandahålla tillförlitlig och exakt resultat i laboratoriet.
Högstämt plus labyrint test upprättades ursprungligen för att undersöka känslomässiga reaktivitet i gnagare3,4. Hela apparaten är vanligtvis ligger 500 mm ovanför golvet, och består av två öppna och två slutna armar som gör en plus form. Mätningar av arm utforskning (inklusive varaktighet och frekvens av poster på varje arm), avstånd reste och angivna beteenden såsom sträckt-behandlande hållning av betvingad djur registreras under observationella perioder. Genom dessa åtgärder beräknas djur ångest som ett experimentella resultat.
Högstämt plus labyrint test används över hela världen, men inte alla laboratorier använder samma apparater design5,6, och dessa skillnader kan påverka de experimentella resultaten. Skillnader inkluderar exempelvis närvaron eller frånvaron av avsatser längs de öppna armarna och/eller användning av transparenta eller täckande väggar för slutna armar5,6. Avsatser längs öppna armar och användningen av genomskinliga väggar för slutna armar har utvecklats att förhindra att djur faller av den apparatur7, och för att underlätta beteendemässiga observationer inuti slutna armar, respektive8,9. Även om det har gjorts några studier som undersökt hur enskilda arm struktur skillnader kan påverka förmågan att upptäcka djur ångest1,2,5,10,11 , den kombinerade effekten av öppna (med/utan kort avsats) och slutna (transparent/täckande väggar) arm funktioner på djurs beteende har ännu inte undersökts.
I en färsk rapport diskuterade vi effekten av dessa kombinationer av arm mönster på ångest-liknande beteende hos råttor12. I korthet, öppna arm avsatser betydligt ökad ångest-liknande beteende hos råttor, medan transparenta armar kan också ha minskat detta beteende. Dessutom verifierat vi högre upptäckt känslighet av effekten av ett ångestdämpande läkemedel i en kombination av nr-flyghöjd öppen arm + ogenomskinlig muromgärdade stängda arm jämfört med en kombination av flyghöjd öppen arm + transparent muromgärdade stängda arm. I denna rapport kommer vi introducera våra protokoll för högstämt plus labyrint test, tillsammans med diskussion av de viktigaste resultaten från föregående rapport. Vi anser att detta betänkande kommer att ge användbar information för dem som har anställda eller som planerar att använda högstämt plus labyrint i sina studier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla experimentella procedurer som beskrivs här har godkänts av den institutionella djur vård och användning kommittén Meiji Universitets (IACUC 14-0002(1)). Djur som används i de representativa resultat var beredd på följande sätt: manliga Sprague-Dawley-råttor köptes från ett laboratorium djur företag och inrymt i grupper om 4 djur per standard råtta bur (W200 × D410 × H250 mm) för minst en vecka före början av den beteendemässiga experiment. Djurstallar rummet bibehölls vid normala omgivande förhållanden för ljus (12:12 ljus/mörk schema med som tänds vid 10:00 h), rumstemperatur (25,0 ± 0,5 ° C), luftfuktighet (55 ± 10%) och ventilation (10 gånger / h), och djur hade ad libitum tillgång till mat ( Oriental jäst Co. Ltd, Tokyo, Japan) och vatten. Djuren förvarades i en standard råtta bur (W410 x D250 x H200 mm, Toyoriko Co., Ltd., Aichi, Japan) med papper sängkläder (alpha-dri, LSG Corporatin, Tokyo, Japan).
1. förhöjda Plus labyrint Test
- Ställa in förhöjda plus labyrint apparater i en anpassad behållare (W1, 500 × D1, 500 × H2, 000 mm) (figur 1A) med en plus-formad metall RAM 500 mm ovanför golvet att stödja kör sätt armar (figur 1B), belysning i container taket till belysa yta av labyrinten som krävs ljusintensiteten (figur 1 c) och en digital videokamera i centrum taket att aktivera live video övervakning av beteendemässiga tester (figur 1 c).
- Fixa armarna (L500 x W100 mm) på ramen för plus-formade, och sedan fixa den fyrkantiga central plattformen (W100 x D100 mm) i mitten av de fyra armarna (figur 1 d -F).
Obs: I vårt laboratorium har vi två typer av öppna armar (L500 x W100 mm) och två typer av slutna armar (L500 x W100 x H450 mm) (figur 1 d). De slutna armarna har antingen genomskinliga eller ogenomskinliga väggar (figur 1 d), och de öppna armarna är utformade med eller utan en kort avsats (H5 mm, figur 1E). Den fyrkantiga central plattformen (W100 × D100 mm) är placerad i mitten av de fyra armarna (figur 1 d -F). Således följande fyra kombinationer av armar kan förberedas enligt experimentella ändamål: öppna armar med avsatser + slutna armar med genomskinliga väggar (avsatser/Transparent), öppna armar med avsatser + slutna armar med ogenomskinlig väggar (avsatser/ogenomskinlig), öppna armar utan lister + slutna armar med genomskinliga väggar (nr-avsatser/Transparent), och öppna armar utan avsatser + slutna armar med ogenomskinlig väggar (nr-avsatser/ogenomskinlig). Ytan av arm landningsbanan är svart, att möjliggöra bättre djur spårning av automatiserade beteende analys programvara, som beskrivs i avsnitt 2, beteendeanalys. - Justera belysning intensitet på ytan av den distala delen av varje arm och central plattform till cirka 100 Lux.
- Före varje prov, rengör hela apparaten med 70% etanol lösningen och torka med destillerat vatten.
- Klicka på ”record” på den hårddisk-inspelaren att starta den digital videokamera som spelar in Råttans beteende för videon imaging analys som beskrivs i avsnitt 2, beteendeanalys.
- Placera ett djur på den centrala plattformen inför en öppen arm och låt gratis prospektering på apparaten för 5 min.
- Klicka på ”stopp” på den hårddisk-inspelaren att avsluta inspelningen.
- Räkna antalet avföring och urineringar efter återkomsten testade djuret till djurstallar rummet.
- Upprepa från steg 1.4 fram till slutet av experimentet.
Obs: En torr testkörning utförs alltid innan du börjar varje experiment för att kontrollera att alla experimentella inställningarna är korrekt inställda innan alla försöksdjur exponeras för de experimentella förhållandena. Annars kan vissa djur, särskilt det första djuret kan uppleva olika miljöförhållanden (t.ex., ljud som eventuellt orsakas av experimenter under manipulation och/eller djur ledtrådar som eventuellt lämnats av den tidigare testade djuren).
Obs: Praktiker är nära behållaren när ett djur testas. Således, även om praktiker inte är synliga råtta kan fortfarande kunna känna dem via lukt och/eller ljud.
2. beteendeanalys
Obs: Beteendeanalys utförs av manuell observation och automatiserad analysprogramvara.
-
Manuell observation
- När djuret är placerat på avsatsen, beakta följande: antal poster (en post på en arm definieras som någon instans när alla 4 tassarna är på armen), tid som tillbringas på varje arm och antal sträckt-behandlande arbetsställningar inför en öppen arm , medan backa den centrala plattformen mot en sluten arm.
- Mäta varaktighet och frekvens av de beteenden som definieras ovan av stoppur och räknas 5 min, start från när dörrarna till behållaren är stängda.
-
Automatiserad analys
- Använda tillgängliga i programmet spela in följande: avstånd reste, tid förbrukade i olika positioner på öppna armar (proximala, mellersta, och distala segment från den centrala plattformen) och en minut för minut analys av tiden spenderas på öppen och stängd armarna.
- Klicka på ”Start” av programvaran automatiserad analys samtidigt som manuell observationen börjar (stoppas inspelningen automatiskt om inspelning varaktighet är inställd).
Obs: Beteendeanalys-programvara som används i denna studie spårar djuret via dess kontrast med fältet bakgrund; djuret, som är tilldelat en fast storlek, identifieras som det ljusa objektet och locomotion dess mittpunkt kan alltså användas för djur spårning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I den tidigare studien jämförde vi de kombinerade effekterna av öppen arm avsatser och insyn i slutna arm väggar på utforskande beteenden på labyrint12. Råttorna tillbringade betydligt mycket mindre tid på öppna armar utan avsatser än på öppna armar med avsatser (F [1, 60] = 13,49, P = 0,0005) (figur 2A). Liknande resultat hittades också för antalet poster i öppna armar (F [1, 60] = 11.17, P < 0,0014)12, vilket tyder på att förekomsten av avsatser ökar råtta undersökande beteende på öppna armar. Råttor visade betydligt mindre sträckt-behandlande hållning på apparaten som hade stängt armar med genomskinliga väggar än på apparater som hade stängt armar med ogenomskinlig väggar (F [1,60] = 4,03, P = 0.0492) (figur 2B), tyder på att öppet stängt arm väggar minskade ångest-liknande beteende hos råttor. Råttorna tillbringade mer tid i distala segment av öppna armar på apparaten som hade öppet stängt arm väggar än på apparater med ogenomskinlig stängda arm väggar (F [1,60] = 8.00, P = 0.0983) (figur 2 c), vilket tyder på att genomskinliga väggar maj också minska råtta öppen arm undersökande beteende. Dessutom var öppen arm prospektering i distala segment signifikant lägre i nr-avsatser/ogenomskinlig apparaten jämfört med avsatser/Transparent apparaten (figur 2 c). Sammantaget indikerar dessa resultat att upptäckt känslighet för ångest-liknande beteende kan skilja sig beroende på vilka typer av arm designfunktioner som används, och nr-avsatser/ogenomskinlig apparaten och avsatser/Transparent apparater kan ha en relativt stor skillnaden i den upptäckt känsligheten.
För att verifiera skillnader i upptäckt känslighet mellan olika typer av arm design, utfördes ett ytterligare experiment med hjälp av ångestdämpande läkemedlet diazepam (siffror 3A–D). I korthet, upptäckt nr-avsatser/ogenomskinlig apparaten effekten av diazepam i högdos behandling på den tid som tillbringas i de öppna armarna, medan avsatser/Transparent apparaten inte (figur 3A–B). Liknande resultat hittades också för antalet poster i öppna armar12 (inga data anges). Bristen på någon betydande effekt på avsatser/Transparent apparaten kan ha varit på grund av att aktiviteten basal (fordonet behandling) på denna apparat var högre än på nr-avsatser/ogenomskinlig apparaten, men att öppna arm prospektering aldrig överskrids 33% av tid när som helst på antingen utrustning. Därför här smalare öppen arm prospektering tidsintervallet gjort det svårare att skilja den ångestdämpande effekten av diazepam på Ledged/Transparent apparaten (figur 3 c–D).
Figur 1 : Skräddarsydda utrustning för förhöjd plus labyrint test. Panelen (A): förhöjda plus labyrint test behållare. Apparaturen är placerad i behållaren svart, och en bildskärm bredvid behållaren projekt levande filmbilder inspelade under experimentet. Panelen (B): Plus labyrint ram i behållaren som stöder utrustade vapen. Hela apparaten är beläget 500 mm ovanför golvet. Panelen (C): takbelysning som kan justeras för intensitet. En digital videokamera (se pil) omgiven av belysning records djurtransporter. Panelen (D): förhöjda plus labyrint armar och central plattform som är utrustade till ramen; från vänster till höger, ogenomskinlig wall stängd nr-avsats öppen arm, central plattform, flyghöjd öppen arm, arm, genomskinlig väggen sluten arm. Panelen (E): närbild av öppna armar; från vänster till höger, öppen arm utan avsatser, öppna arm med avsatser (H5 mm). Panelen (F): ett exempel på en Byggyta labyrint (avsatser/Transparent apparatur). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2 : Öppen arm avsatser minska ångest-liknande beteende och genomskinliga väggar delvis minska ångest-liknande beteende. Hanråttor genomgick högstämt plus labyrint test med olika kombinationer av arm strukturer (avsatser/Transparent, avsatser/ogenomskinlig, nr-avsatser/Transparent och nr-avsatser/ogenomskinlig). Testning ordning var normaliserade över de experimentella grupperna (varje kombination av apparater typ). Detta förfarande normaliserar oväntade effekter som kunde ha inträffat på grund av tid på dagen för varje test. Panelen (A): tid spenderas på öppna armar; Panelen (B): antal sträckt-behandlande arbetsställningar; Panelen (C): tid tillbringade i den distala delen av öppna armar. Fast och streckade linjer visar betydande huvudsakliga effekter av öppna och slutna arm strukturer, respektive (dubbelriktad ANOVA, #P < 0,1, * P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001). Olika bokstäver bredvid staplarna i panelen (C) indikerar en signifikant skillnad (Bonferroni flera jämförelse test, en < b, P < 0.0125). Data var uttryckt som medelvärdet med SEM (n = 16 per experimentella gruppen). Dessa siffror har ändrats från våra tidigare rapport12. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3 : Nr-avsatser/ogenomskinlig apparaten visar högre upptäckt känslighet av ångestdämpande effekt av diazepam. Hanråttor genomgick högstämt plus labyrint test, med antingen No-avsatser/ogenomskinlig eller avsatser/Transparent apparater, 30 min efter behandlas med antingen fordon (0 mg/kg), låg (0,25 mg/kg) eller hög (0,5 mg/kg) doser av den ångestdämpande läkemedlet diazepam (intraperitoneal injektion). Diazepam lösning upplöstes i 0,9% normal koksaltlösning med en surface-aktiverande agent. I detta experiment, test ordning tre drog behandlingsgrupperna och två typer av apparater design randomiserades till konto för några effekter som kan uppstå på grund av tid på dagen för varje test. Paneler (A & B): Summa procent tid (5 min) på öppna armar av avsatser/Transparent och nr-avsatser/ogenomskinlig, respektive. Paneler (C & D): minut för minut procent tid spenderas på öppna armar av avsatser/Transparent och nr-avsatser/ogenomskinlig, respektive. Olika bokstäver bredvid barer i panelen (B) indikerar en signifikant skillnad mellan behandlingarna (Bonferroni flera jämförelse test, en < b, P < 0,0167). Fast och streckade linjer i paneler (C & D) visar betydande huvudsakliga effekter av time-lapse och diazepam behandlingar, respektive (upprepade åtgärder ANOVA, *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0.001). data uttrycktes som medelvärdet med SEM. siffrorna i kolumnerna visar djur som avslutade experimentet (siffrorna inom parentes anger djur faller av apparaten). Dessa siffror har ändrats från våra tidigare rapport12. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Eftersom antalet patienter som lider av psykiska störningar, inklusive ångestsyndrom-ökar, är det viktigt att utveckla banbrytande studier för att förbättra förståelsen av den grundläggande mekanismen av ångest. För att uppnå detta, är det också viktigt att optimera de experimentella procedurerna. Därför att förbättra tillämpningen av högstämt plus labyrint test, vi har visat effekten av arm funktioner på experimentella resultat med råttor.
Högstämt plus labyrint upprättades ursprungligen för att testa djur ångest i gnagare4, men även grundläggande strukturer är oftast konsekvent (t.ex., förhöjda 500 mm ovanför golvet med en plus form), olika arm mönster används ofta. Ursprungligen, apparaten bestod av öppna armar utan avsatser och stängd armar med ogenomskinlig träväggar. Dock mer nyligen öppna armar har utvecklats med avsatser att förhindra att djur faller av apparaten, och slutna armar har också utvecklats med genomskinliga väggar att underlätta observation av beteende på slutna armar. Det har dock inga rapporter som adresserade de kombinerade effekterna av dessa arm funktioner på experimentella resultaten i högstämt plus labyrint test. Som framgår av våra resultat, förekomsten av öppen arm avsatser och insynen i slutna arm väggar minskad undvikande av öppen arm prospektering i råttor (figur 2), vilket kan minska den ångestdämpande effekten av diazepam ( upptäckt känslighet Figur 3). Avsatser/Transparent apparaten verkade att uppmuntra större prospektering på de öppna armarna av fordon behandlade råttor (figur 3). Detta minskade beteendemässiga diskriminering i öppen arm prospektering aktivitet mellan fordonet och diazepam behandlade råttor, vilket gör det svårare att upptäcka skillnader i ångest. Därför lägre känslighet avsatser/Transparent apparat kan innebära att fler djur behöver testas för att påvisa signifikant effekter jämfört med att använda No-avsatser/ogenomskinlig apparater.
I våra protokoll mättes varaktighet och antal poster på varje arm manuellt av välutbildade praktiker. Detta förfarande gör det möjligt för korrekt mätning av arm poster, definierat som alla 4 tassar placeras på en arm. Även om det är sant att automatiserade animal tracking system finns tillgängliga för vissa beteendemässiga parametrar, såsom resor avståndet i vår erfarenhet som de inte alltid exakt skilja mellan poster och icke-poster på armar, speciellt när djur utföra sträckt-behandlande ställningar nära gränsen mellan den centrala plattformen och en arm. Således rekommenderar vi en kombination av både manuell och automatiserad observationssystem, baserat på deras respektive styrkor för varje beteendemässiga parameter.
Finns det andra protokollet skillnader mellan laboratorier. Till exempel placera vissa forskare djur på den centrala plattformen inför en sluten arm13,14, medan andra placerar råttorna inför en öppen arm15,16. Dessutom testar vissa forskare beteende omedelbart efter att ta råttor från deras hem-bur, medan andra tillåter råttorna tid att acklimatisera sig till beteendet testning rummet innan du påbörjar testen. Vad gäller förstnämnda fallet i preliminära tester upplevt vi hur resultaten skilde sig åt beroende på som arm råtta initialt inför; Det fanns en ökad incidens av in på armen att råttan placerades inför. Också, när råttorna placerades inför en sluten arm, vissa djur rörde sig inte ur det stängda arm efter den första posten. I sådana fall är det svårt att skilja mellan om råttor upplever konflikten mellan öppna och slutna armar eller att de bara föredrar att vara i en sluten plats utan att någonsin erkänna förekomsten av de öppna armarna. Även om i vår studie valde vi att placera råttorna inför en öppen arm, för att säkerställa en hög förekomst av att vara under konflikten, rekommenderar vi att ytterligare studier genomförs för att säkerställa att effekten av detta protokoll skillnaden på experimentella resultat är korrekt undersökt.
Mätningarna av utforskning av distala segmentet öppna armar och minut-för-minut analys upplysningar extra detaljerade om råtta ångest-liknande beteende. Dessa mätningar som hjälpte till att visa skillnaderna i upptäckt känslighet mellan de olika arm mönster. Trots detta rapporterade resultaten av ångest forskning använder högstämt plus labyrint test rapporterar ofta inte dessa typer av detaljerade mätningar13,17,18. Därför rekommenderar vi att forskarna också rapportera ytterligare information om råtta förberedande aktiviteter, inklusive distala prospektering, minut-för-minut analys och också sträckt-behandlande hållning.
Våra fynd tyder Sammanfattningsvis på att olika typer av apparaturar kan ha sina egna särdrag. Från dessa tester, har vi visat att No-avsatser/ogenomskinlig apparater bättre kan identifiera effekten av läkemedel som eventuellt kan få en ångestdämpande effekt. Däremot är det tänkbart att avsatser/Transparent apparater kan ha en liknande fördel när du testar potentiella anxiogenic droger. Hittills har beteendemässiga tester använts inte bara för drogkontroll, men också för fenotypning analyser i muterade djur. Faktiskt, avancerade genomet redigering metoder innebär snabb produktion av muterade djur. Det är därför mycket viktigt att utveckla undersökningsmetoder med bättre precision och känslighet att bättre upptäcka variationer i beteende. Detta betänkande visar en förbättrad tillämpning av förhöjt plus test för djur ångest forskning baserad på de förvänta funktionerna av generna som drog- eller mål. Således, vi anser att våra ansträngningar kommer bidra till att främja forskning som sysselsätter högstämt plus labyrint.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Författarna vill tacka Mr Akihiro Hirano för hans hjälp producera anpassade apparaten. Författarna vill tacka Mr Kosuke Takahashi och Mr Shingo Nakajima för deras tekniskt bistånd. Detta arbete stöds av forskning om risken av kemiska ämnen, hälsa och laboratorium vetenskaper forskningsanslag, hälsoministeriet, arbete och välfärd, Japan (H25-KAGAKU-IPPANN-003) och forskning projektbidrag A genom Institutet för vetenskap och teknik Meiji University, Japan.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Customized container (W1500 × D1500 × H2000 mm) | NA | NA | Handmade by Mr. Akihiro Hirano |
| Lighting | NA | NA | Handmade by Mr. Akihiro Hirano |
| Elevated plus maze apparatus | NA | NA | Handmade by Mr. Akihiro Hirano |
| Digital video camera | Watec | WAT-250D2 | Any suitable video camera can be attached to a hard disk recorder for recording tracking profiles. |
| Hard disk recorder | TOSHIBA | RD-R200 | Any suitable hard disk recorder can be attached to the digital video camera. |
| Sprague-Dawley rats | Charles River Laboratories Japan, Inc. | NA | Any suitable rats can be used for your study |
| Standard rat cage | Toyoriko | TP-105 | Any suitable rat cage be used for your study |
| Instrument to measure light intensity | AS ONE | 1-5818-02 | Any suitable instrument to measure light intensity |
| EthoVision XT version 8.0 | Noldus | NA | Any suitable software to measure animal behavior |
| Diazepam | Taiyo Pharmaceutical Industry | 1124402A2061 | Any suitable drug can be used for your study |
| Tween 80 | Wako Pure Chemical Industries | 9005-65-6 | Any suitable drug can be used for your study |
References
- Nestler, E. J. Role of the Brain's Reward Circuitry in Depression: Transcriptional Mechanisms. Int Rev Neurobiol. 124, 151-170 (2015).
- Crabbe, J. C., Wahlsten, D., Dudek, B. C. Genetics of mouse behavior: interactions with laboratory environment. Science. 284 (5420), 1670-1672 (1999).
- Handley, S. L., Mithani, S. Effects of alpha-adrenoceptor agonists and antagonists in a maze-exploration model of 'fear'-motivated behaviour. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 327 (1), 1-5 (1984).
- Pellow, S., Chopin, P., File, S. E., Briley, M. Validation of open:closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat. J Neurosci Methods. 14 (3), 149-167 (1985).
- Violle, N., Balandras, F., Le Roux, Y., Desor, D., Schroeder, H. Variations in illumination, closed wall transparency and/or extramaze space influence both baseline anxiety and response to diazepam in the rat elevated plus-maze. Behav Brain Res. 203 (1), 35-42 (2009).
- Hogg, S. A review of the validity and variability of the elevated plus-maze as an animal model of anxiety. Pharmacol Biochem Behav. 54 (1), 21-30 (1996).
- Martinez, J. C., Cardenas, F., Lamprea, M., Morato, S. The role of vision and proprioception in the aversion of rats to the open arms of an elevated plus-maze. Behav Processes. 60 (1), 15-26 (2002).
- Anseloni, V. Z., Brandao, M. L. Ethopharmacological analysis of behaviour of rats using variations of the elevated plus-maze. Behav Pharmacol. 8 (6-7), 533-540 (1997).
- Anseloni, V. Z., Motta, V., Lima, G., Brandao, M. L. Behavioral and pharmacological validation of the elevated plus maze constructed with transparent walls. Braz J Med Biol Res. 28 (5), 597-601 (1995).
- Hagenbuch, N., Feldon, J., Yee, B. K. Use of the elevated plus-maze test with opaque or transparent walls in the detection of mouse strain differences and the anxiolytic effects of diazepam. Behav Pharmacol. 17 (1), 31-41 (2006).
- Fernandes, C., File, S. E. The influence of open arm ledges and maze experience in the elevated plus-maze. Pharmacol Biochem Behav. 54 (1), 31-40 (1996).
- Horii, Y., Kawaguchi, M. Higher detection sensitivity of anxiolytic effects of diazepam by ledge-free open arm with opaque walled closed arm elevated plus maze in male rats. Behav Brain Res. 294, 131-140 (2015).
- Santos, R. O., et al. Evaluation of the effect of acute sibutramine in female rats in the elevated T-maze and elevated plus-maze tests. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 114 (2), 181-187 (2014).
- Lynn, D. A., Brown, G. R. The ontogeny of anxiety-like behavior in rats from adolescence to adulthood. Dev Psychobiol. 52 (8), 731-739 (2010).
- Horii, Y., et al. Male Hatano high-avoidance rats show high avoidance and high anxiety-like behaviors as compared with male low-avoidance rats. Exp Anim. 61 (5), 517-524 (2012).
- Walf, A. A., Frye, C. A. The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents. Nat Protoc. 2 (2), 322-328 (2007).
- Yang, Y., et al. Behavioral and pharmacological investigation of anxiety and maternal responsiveness of postpartum female rats in a pup elevated plus maze. Behav Brain Res. 292, 414-427 (2015).
- Albani, S. H., et al. Behavior in the elevated plus maze is differentially affected by testing conditions in rats under and over three weeks of age. Front Behav Neurosci. 9, 31 (2015).
