成年雄性小鼠经尿道灌注术

在以往的研究中, 采用经尿道灌注法作为建立膀胱疾病模型的方法之一^1,2,3,4 , 可用于评估当地提供的治疗小鼠的效果。虽然动物模型不能完全重述人类的病症, 但在动物研究中的基本机制的识别更能更好地理解人类的查找障碍, 如间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合症, 神经原膀胱炎, 自身免疫性膀胱炎, 前列腺炎症⁵。

在成年雄性小鼠身上进行的经尿道灌注手术比在成年雌性老鼠⁶中的膀胱灌注更具有技术挑战性。男性尿道的自然弯曲解剖和它的小直径使它在技术上难以完成经尿道插入导管。因此,详细说明对经尿道感染的小鼠泌尿道传染病的诱导⁶和查找源性炎症^{7,8,910,12,13,14,15}通过膀胱插入导管之前只对雌性小鼠进行了概述。这份手稿的目的是提供一个 step-by 一步的描述的技术, 在男性小鼠经尿道注入的物质, 包括视频剪辑, 图像和插图。经尿道灌注手术的成年雄性小鼠可以执行的变量接种类似于以前所描述的雌性鼠标⁷和合并的其他技术, 如肌电图记录visceromotor 响应 (VMR)¹⁶。

所有与动物有关的程序, 包括麻醉的方法和持续时间, 以及术后护理, 都与兽医进行了讨论, 并得到了机构动物护理和使用委员会 (IACUC) 的批准。附属机构。在这份手稿中, 所有的程序都是用8到15周大的 C57BL/6 雄性小鼠进行的, 该协议遵循 IACUC 在科罗拉多大学批准的动物保育指南.

1. 油管的制备

注: 为了灌输接种, 一根针连接到聚乙烯 (PE) 油管 ( 图 1A ) 或一个小的量规 (和 #60; 24 克) angiocatheter 可以使用 ( 图 1G )。使用 angiocatheter 不需要除绝育以外的70% 乙醇 (乙醇)。接种是被灌输/注入/沉积到泌尿道中的物质。这可以是一种含有细菌、病毒或化学物质的溶液。这是提前准备的时间和研究的协议。例如, 如果研究的目的是评估 大肠杆菌 感染对下尿路的影响, 研究者将需要准备含有细菌的接种, 该菌可以在下尿路接种/灌输.

1. 用于 pe 导管的针的制备简单, 包括以下内容: 根据靶器官和动物的年龄选择 pe 导管的尺寸。对于年龄小于12周的动物, 使用 PE-10 管 (外径为0.024 英寸, 内径为0.011 英寸)。PE-10 导管建议适用于 (1) 在前前列腺 (AP) 和精囊 (SV) 的接种的一次播种, 或 (2) 接种在一个小于12周龄的动物的膀胱中的一次播种。pe 管材的直径较大的 pe 50 (外径可达0.038 英寸, 内径可达0.023 英寸) 可用于接种在较年长动物的膀胱中的一次播种.
2. 切割大约2.5 英寸的 PE 油管.
3. 选择将适合所选 PE 直径的针。27克针能装入 PE-10 管的流明, 并且 22 g 针适合 PE-50 管的流明.
   1. 在将针的锋利边缘与商业可用的油石 ( 图 1A -b ) 进行摩擦之前, 先准备针插入 PE 管, 使其变钝, 或使用商业上可用的钝针.
4. 将钝针 ( 图 1C ) 引入 PE 管的流明中。通过确保针头保持在流明中心, 避免对流明或进入假腔的损伤。( 图 1D -e )。如果 PE 管在插入钝针时损坏, 请切断损坏的端部并重新启动过程.
5. 将针附着 PE 导管放置在70% 的乙醇中以进行灭菌, 直到其用于程序。冲洗70% 乙醇通过针 pe 油管, 以消毒腔, 并确保没有从 PE 油管泄漏的过程中, 插入针。如果有泄漏, 丢弃的针 PE 管.
   注: 在插管前, PE 导管的尖端需要平滑。为避免将 pe 导管引入尿道的问题, 建议在导管插入前立即切断 pe 导管的尖端 ( 图 1F )。建议的 PE 管的最小长度是1.5 英寸, 其中包括针周围的部分.

2。插管过程

1. 在诱导麻醉之前, 清空鼠标的膀胱。
   1. 对鼠标下腹应用柔和的压力和按摩。这些演习通常导致自发排尿。一个完整的膀胱可能导致稀释或立即泄漏任何灌输接种.
      注: 一个额外的选项, 以确保一个空的膀胱在老鼠是剥夺动物的水至少1小时之前开始的经尿道灌注手术。作为动物议定书的一部分, 该机构应批准水资源匮乏.
2. 使用带有异氟醚流 (2%) 的麻醉机来诱导麻醉。
   1. 一旦该动物被麻醉, 将它放在温暖的电热毯上, 用一个蓝色的垫子盖在一个 nosecone 内, 用于维持连续麻醉.
   2. 通过检查踏板反射 (脚趾捏) 确认该动物正在接受麻醉.
3. 一旦踏板反射不存在, 通过缩回包皮进行操作.
   1. 用一只手的拇指和食指 ( 图 2A 和 2B ) 按耻骨区域, 用另一只手的拇指和食指拉出腺体的阳具 ( 图 2C )。当这是正确的完成, 包皮, 头阴蒂, 和生殖器保持暴露。( 图 2D 和 图 2F )。不要用钳子拔出腺体的阳具, 因为这会导致组织受损.
4. 在插入导管之前, 用不育的手术润滑剂润滑导管和头的顶端。这将促进 PE 导管的插入.
   注: 个别包装的外科润滑剂的平方, 而不是一个大的管, 建议每一个使用, 以保持不育的条件.
5. 用钝钳轻轻握住小弟弟的尖端, 轻轻地挤压阴蒂, 使尿道口张开.
6. 用针附着的 pe 油管或 pe 导管将注射器固定, 并通过尿道口插入 pe 导管.
   注意: 建议使用拇指、食指和中指的注射器的三脚架握针与 pe 油管或 pe 管材本身的稳定性.
   注: 导管的路径应该是弯曲的, 这是由于尿道的自然曲率, 在成年雄性小鼠的头状生殖器和阳具中所包围, 如 图 3A 和 图 3B 所示。插管 pe 导管在插管过程中可能会遇到阻力, 因此建议通过将导管向上或向下倾斜来调整角度, 以帮助进一步向靶器官推进 pe 导管。如果需要, PE 管可以稍微旋转, 以帮助它机动通过各种尖锐的尿道。当有太多的阻力, 油管应拉回, 然后再次前进, 以最小的压力。完全拉动 PE 油管, 使用更多的润滑可能是有帮助的.
7. 当 PE 导管到达所需的器官时, 通过推针柱塞来注入所需的接种 (5-200 和 #181; 建议采用 L 音量).
   1. 用于将接种注入膀胱, 将 pe 导管向前推进, 直到插入 pe 油管大约0.75 英寸 ( 图 3A ).
      注: 对接种在 AP 和 SV, 一般, th 的灌输插入的导管一旦到达前前列腺的开口点, 就会遇到阻力。通过倾斜油管向上或向下调整角度, pe 导管将进一步向前推进, 直到插入了大约1英寸 pe 油管 ( 图 3B ).