方法文章

利用改良T型迷宫评估心脏骤停后的功能记忆结果

DOI：

10.3791/56694

⸱

2018年1月5日

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurology, Louisiana State University Health Science Center, 2Center for Brain Health, Louisiana State University Health Science Center, 3Department of Cellular Biology and Anatomy, Louisiana State University Health Science Center, 4Department of Neurology, Cerebral Vascular Disease Research Laboratories, University of Miami Miller School of Medicine, 5Department of Biomedical Sciences, West Virginia School of Osteopathic Medicine

本文内容

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

本方案描述了使用改良T型迷宫评估缺氧性心脏骤停所致脑缺血中功能学习/记忆的方法。

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

背景：在全脑缺血（即心脏骤停）模型中，由于手术后运动能力较差，评估轻度至中度认知功能障碍可能较为困难。例如，接受手术操作的大鼠在进行莫里斯水迷宫实验时可能无法游泳，从而导致实验无效。

新方法：我们建立了一种改良的行为学自发交替T型迷宫测试。改良T型迷宫方案的主要优势在于其设计相对简单，但足以有效评估脑缺血后的功能学习/记忆能力。此外，数据分析过程简便直接。我们采用T型迷宫检测大鼠在轻度至中度（6分钟）窒息性心脏骤停（ACA）存在或不存在条件下的学习/记忆缺陷。大鼠具有天然的探索倾向，会交替进入T型迷宫的不同臂，而海马损伤的大鼠则倾向于选择固定一侧，导致自发交替率降低，从而揭示在有或无ACA情况下与海马相关的功能性学习/记忆能力。

结果：与对照组相比，ACA组的侧向偏好比率更高，而交替次数更低。

与现有方法的比较：莫里斯水迷宫和巴恩斯迷宫均常用于评估学习/记忆功能。然而，莫里斯水迷宫相比其他迷宫更具应激性。巴恩斯迷宫广泛用于测量参考记忆（长期记忆），而ACA诱导的神经认知缺陷与工作记忆（短期记忆）的关系更为密切。

结论：我们建立了一种简单而有效的方法，通过T型迷宫在全脑缺血模型（ACA）中界定工作记忆（短期记忆）。

引言

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

根据美国心脏协会（2017年）的数据，心脏骤停（CA）导致的死亡每四分钟发生一次，在美国每年影响超过40万人1。已有充分证据表明，心脏骤停会因血液灌注不足而导致神经元性脑损伤2,3,4。心脏骤停引起的脑损伤主要发生在海马体对缺血敏感的CA1区5,6,7，影响对学习和记忆至关重要的神经元8,9,10,11,12。此外，在缺血条件下海马体（即CA1神经元）树突棘密度的减少，在空间记忆障碍中起关键作用13,14,15。由于心脏骤停后出现这些病理变化，焦虑、抑郁、创伤后应激障碍和记忆丧失等行为障碍更为常见。尽管医学技术（如高效的院前急救服务）的进步与心脏骤停存活率的提高相关，但大多数神经保护治疗（除低温疗法外）未能改善心脏骤停后的功能预后16,17。心脏骤停幸存者通常生活质量较差，并承受不断增长的医疗支出负担16。

通过行为学测试评估脑缺血后的认知状态，对于确定药物疗效以及最终开展成功的临床试验具有重要意义。20世纪40年代，Edward Tolman设计了首个行为学实验，用于研究基于海马的空间记忆18。随后，多种迷宫（如Morris水迷宫、放射状迷宫、T形或Y形迷宫以及Barnes迷宫）被开发出来，用于评估大鼠基于海马的空间学习与记忆能力19,20,21,22,23。其中应用较广泛的行为学测试之一是Morris水迷宫，用于检测大鼠模型中的空间学习与记忆功能24。然而，Morris水迷宫要求大鼠具备完整的游泳能力及运动功能控制。在诸如窒息性心脏骤停（ACA，一种心脏骤停的大鼠模型）等缺血实验中，需进行股动脉/静脉插管，以获取重要的血压、血气数据并给予多种药物。由于股动脉/静脉插管可能影响后肢活动能力，导致大鼠无法正常游泳，因此Morris水迷宫可能并不适用于ACA模型下认知功能障碍的检测。

巴恩斯迷宫是另一种广泛用于检测啮齿类动物模型空间学习和记忆能力的行为学实验方法。巴恩斯迷宫不需要动物发挥完全的运动功能和控制能力，因此比莫里斯水迷宫更具低应激性。过去，我们曾使用巴恩斯迷宫开展实验，以确定对照组或假手术组与ACA诱导的大鼠之间是否存在功能性学习/记忆差异。然而，所获得的巴恩斯迷宫数据在检测轻度至中度ACA后认知功能障碍方面的分辨力不足，原因是该迷宫通常用于评估参考记忆（长期记忆）25,26，而ACA诱导的神经认知缺陷更倾向于与工作记忆（短期记忆）相关27,28,29,30，这表明巴恩斯迷宫在评估我们所用ACA模型中的记忆功能时可行性较低。

因此，我们开发了一种改良的T型迷宫，利用自发交替实验来评估ACA后的短时工作记忆。与其它行为学测试相比，该改良T型迷宫自发交替实验的主要优势在于其操作简便，且对大鼠造成的应激较小，因为该方法无需预先训练动物，也无需像莫里斯水迷宫和巴恩斯迷宫那样进行复杂的计算分析或辅助程序（例如大鼠的视频成像）。本文表明，改良T型迷宫自发交替实验是一种简单但高效的动物行为实验范式，能够提供足够的分辨能力，以准确检测和评估导致短期记忆丧失疾病（如ACA）中的海马功能。

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

方案

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

所有实验操作均按照美国国立卫生研究院的指南进行，并经机构动物护理和使用委员会（LSU Health Sciences Center-Shreveport）批准，用于使用雄性Sprague Dawley大鼠（300-350 g，9-10周龄）。在进行ACA手术前，大鼠禁食过夜。

1. T型迷宫装置的设计与设置

注意：T型迷宫的设计应基于Deacon和Rawlins在2006年提出的模型31。

  1. 使用 SketchUp32 设计迷宫的三维结构。为创建T型迷宫的三维结构，起始臂的外部长度设计为200 mm，宽度为165 mm，高度为148 mm，以适应3D打印机的打印尺寸限制。壁厚设为5.5 mm，地板厚度设为8 mm。
  2. 使用3D打印机打印迷宫（参见材料表）32。如果实验室没有3D打印机，可使用其他材料，如木材、中密度纤维板或塑料（例如聚氯乙烯），这些材料可在家居装修商店购买。
    1. 由于打印区域的高度限制，迷宫的墙壁需分为两个独立的3D打印部件，待迷宫组装时再连接在一起（即在迷宫部分上增加第二个墙体高度，使总高度增加140 mm，最终墙体总高度为280 mm）。每个独立的3D打印底座均包含一个“T”形锁定机构，使一个部分可与下一部分连接。
    2. 在起始臂与目标臂的交汇处，创建一个165 mm宽的连接段，以匹配起始臂与目标臂的宽度。目标臂的设计方法与起始臂类似，但根据Deacon和Rawlins的设计，将臂的宽度减小至100 mm。
    3. 有关T型迷宫的详细示意图/尺寸，请参见图1。
    4. 在起始臂与目标臂的交汇处的设计中加入中央隔板。该隔板从T型迷宫的后墙延伸，向前进入起始臂200 mm，以分隔两个目标臂。该隔板同时也增加了迷宫的整体高度（图1）。

2. 窒息性心脏骤停（ACA）

  1. 手术前将手术器械进行高压灭菌（121 °C，15 分钟）。用 70% 乙醇对手术台消毒 15 分钟。剃除手术部位的动物毛发。手术操作前在皮肤表面涂抹碘伏溶液。
  2. 麻醉
    1. 通过面罩给予大鼠 4% 异氟烷和 30:70 的 O2 与 N2O 混合气体（O2 300 mL/min，N2O 700 mL/min）进行麻醉。
    2. 对大鼠进行气管插管以实施机械通气（插管后将大鼠连接至呼吸机）。
    3. 通过将异氟烷浓度从 4% 降低至 2%，并继续使用 30:70 的 O2 与 N2O 混合气体维持麻醉。采用夹趾反应法判断麻醉深度。
    4. 在麻醉期间于眼部涂抹眼膏以防止干燥。使用带有直肠探头作为温度参考的啮齿类动物加热垫调节体温。
  3. 气管插管
    1. 将大鼠放入诱导室中。使用 4% 异氟烷和 30:70 的 O2 与 N2O 混合气体进行麻醉。
    2. 将大鼠从诱导室中取出，使其仰卧放置，面部朝向麻醉面罩。
    3. 用左手拇指和食指轻轻将舌头移向动物身体左侧或右侧。
    4. 将一根 14 号柔性静脉导管（长 49 mm）沿 17 号钝头移液针（长 93 mm，针尖呈 10 度角）滑行。将 17 号钝头移液针插入气管内。
    5. 轻轻将 17 号移液针从气管中抽出。将 14 号导管接头连接至呼吸机。调节呼吸机潮气量为 0.67 mL/100 g，呼吸频率为 60 次/分钟。
    6. 在整个操作过程中，使用带有直肠探头作为温度参考的啮齿类动物加热垫维持头部和体温在 37 °C。
  4. 股动脉和股静脉插管
    1. 剃除腹股沟区域（任一侧）的毛发，并在皮肤表面涂抹碘伏溶液以进行手术操作。
    2. 将大鼠仰卧放置。使用手术剪在腹股沟区域做一个 10 mm 的切口。
    3. 用钝头镊子分离结缔组织，直至暴露腹股沟韧带。使用止血钳夹住腹股沟韧带。股动脉和股静脉位于腹股沟韧带下方。
    4. 使用钝头镊子继续分离结缔组织，直至暴露股动脉和股静脉。
    5. 使用精细镊子轻轻分离沿股动脉走行的股神经。再用精细镊子小心地将股动脉和股静脉作为一个整体分离出来。
    6. 使用精细镊子将股动脉与股静脉进一步分离。
    7. 在静脉下方放置两根 5-0 丝线缝合线（一根朝向腿部，另一根朝向躯干）。
    8. 在靠近躯干的一侧打一个松结。使用止血钳夹住并尽可能向身体对侧牵拉缝线。
    9. 在靠近腿部的一侧打一个松结。使用止血钳夹住并向腿部方向牵拉缝线，使静脉充盈血液。
    10. 使用显微解剖剪在静脉上做一个小切口（约 0.1 mm，呈 45° 角）。用无菌纱布吸去任何渗出的血液。
    11. 将装有含 20 U/mL 肝素生理盐水的钝头针注射器连接至 PE-50 导管。用含 20 U/mL 肝素的生理盐水充满 PE-50 导管。使用解剖剪将 PE-50 导管以 45° 角剪成尖端。用钝头镊子夹住 PE-50 导管末端，轻轻将其插入股静脉。
    12. 导管完全插入后，缓慢注入 0.1 mL 肝素/生理盐水，确认无渗漏。打紧缝合结（单结）以固定 PE-50 导管。保留 PE-50 导管用于持续静脉（IV）给药各种药物。
    13. 使用连接 23 号鲁尔短接头的 1 mL 注射器，通过股静脉给予维库溴铵（0.67 mg/kg，每 10 分钟给药一次），以在整个操作过程中使大鼠保持不动。
    14. 在动脉下方放置两根 5-0 丝线缝合线（一根朝向腿部，另一根朝向躯干）。
    15. 在靠近腿部的一侧打一个松结。使用止血钳夹住并尽可能向腿部方向牵拉缝线。
    16. 在靠近躯干的一侧打一个松结。使用止血钳夹住并向躯干方向牵拉缝线，使动脉充盈血液。
    17. 使用显微解剖剪在动脉上做一个小切口（约 0.1 mm，呈 45° 角）。
    18. 将装有含 20 U/mL 肝素生理盐水的钝头针注射器连接至 PE-50 导管。用含 20 U/mL 肝素的生理盐水充满 PE-50 导管。使用解剖剪将 PE-50 导管以 45 度角剪成尖端。用钝头镊子夹住 PE-50 导管末端。轻轻将 PE-50 导管插入股动脉。
    19. 导管完全插入后，缓慢回抽注射器，确认导管功能正常。打紧缝合结（单结）以固定 PE-50 导管。保留 PE-50 导管用于持续记录动脉压和血气。
  5. 窒息性心脏骤停（ACA）操作
    1. 根据需要通过调节潮气量、O2 或 N2O 水平调整生理参数（即 pO2、pCO2、血压和 pH 值）。使用这些参数的正常生理范围：pO2：100 mmHg，pCO2：35–40 mmHg，血压：100 mmHg，pH：7.4。
    2. 使用连接 23 号鲁尔短接头的 1 mL 注射器，通过股静脉给予维库溴铵（0.67 mg/kg，静脉注射），等待 2 分钟。在实施 ACA 前确保血压处于或接近 100 mmHg。
    3. 通过将气管插管（14 号导管接头）与呼吸机断开，诱导呼吸暂停（6 分钟）。进一步用 1 mL 注射器堵塞气管插管，以确保完全呼吸暂停。
      注：6 分钟窒息时间定义为从呼吸机断开至开始复苏之间的时间段。完全心脏骤停定义为平均动脉压低于 10 mmHg。
    4. 在呼吸暂停的最后 1 分钟内，将呼吸机呼吸频率调整为 80 次/分钟，并将 O2 增加至 2 L/min，N2O 为 0%。此操作可清除呼吸机中残留的异氟烷或 N2O。
    5. 呼吸暂停结束后，从气管插管上移除 1 mL 注射器，并重新将气管插管连接至呼吸机。
    6. 使用连接 23 号鲁尔短接头的 1 mL 注射器，通过股静脉给予肾上腺素（0.005 mg/kg，静脉注射），并用拇指、食指和中指在动物胸部以轻柔的圆周运动（x 轴和 z 轴方向，200 次/分钟）进行手动胸外按压，直至恢复自主循环（平均动脉压 ≥ 50 mmHg）33,34,35。
    7. 使用另一支连接 23 号鲁尔短接头的 1 mL 注射器，在恢复自主循环（50 mmHg 或更高）后立即通过股静脉给予碳酸氢钠（1 meq/kg，静脉注射）33,34,35，以缓解呼吸性酸中毒。
    8. 复苏后 10 分钟再次测量血气，以确定酸碱状态（ACA 后 pH 值应约为 7.35 至 7.40）。
    9. 使用止血钳夹闭股动脉和股静脉。使用钝头镊子缓慢而轻柔地拔出动脉和静脉导管。使用 5-0 丝线缝合结扎股动脉/股静脉以防止出血。使用 3-0 丝线缝合关闭手术部位的皮肤。采用间断缝合技术以最大限度减少伤口裂开的风险。
    10. 等待大鼠自主呼吸恢复（通常在复苏后 30 至 60 分钟），将其与呼吸机断开，并轻柔地拔出气管插管。
    11. 将大鼠放入婴儿培养箱（27 °C，50% 湿度）过夜。在培养箱内放置软化食物（用水浸泡制成）和水，过夜供应。
    12. 将大鼠转移至单独笼具，送回动物房并提供常规饲料和饮水。T 型迷宫测试在 ACA 后 3 天开始。

3. T型迷宫

  1. 动物准备
    1. 手术前一天（假手术或ACA手术），每次操作大鼠5分钟。操作时切勿将大鼠从其笼具（480 mm x 250 mm x 200 mm，塑料透明笼）中提起图2).
    2. 处理大鼠后，用一只手轻轻抓住其尾巴，另一只手托住它的四肢。让大鼠从手中跳入笼子（高度100 mm），重复5次。将每只大鼠单独饲养在各自的笼子中，以避免争抢食物和/或打斗。
    3. 假手术或大脑中动脉阻断（ACA）手术后三天图2将大鼠连同笼子一起转移至安静且黑暗的房间，置于首次运行开始之前。仅开启一盏低功率台灯并将其放置在测试室的角落，以维持最低照度。让大鼠适应黑暗环境10分钟。
    4. 所有实验均在下午进行，以避免昼夜节律对大鼠行为表现的影响。不得向操作人员告知哪只大鼠接受了假手术或ACA手术。
  2. 自发交替
    1. 在迷宫底部均匀铺上一层约10 mm厚的垫料，覆盖整个迷宫地面。然后将大鼠置于起始臂（“T”形底部），该位置为每次运行的起点，允许每只大鼠有3分钟时间探索右侧或左侧目标臂。
    2. 当大鼠确定进入某一目标臂（大鼠的四肢均已进入目标臂）后，阻断起始臂与相对侧目标臂之间的“T”形交叉口图1以防止大鼠进入相对的目标臂。让大鼠在迷宫中停留30秒，然后将其取出并放回笼中至少30秒。随后，从T型迷宫中移除“T”形连接处挡板（125 mm × 230 mm × 65 mm，由3D打印机打印制成）。
    3. 将大鼠置于起始臂，重复步骤3.2.2。交替定义为：大鼠进入的臂相对于上一次运行为对侧臂36让大鼠每天进行4次跑动，具体如下：
      1st 运行
      2nd 运行
      10分钟休息
      3rd 运行
      4th 运行
    4. 在10分钟休息期间及不同动物之间更换垫料，以消除气味偏差。每天实验结束后，用75%乙醇擦拭T型迷宫，再用蒸馏水清洁。
    5. 重复步骤 3.2.1 至 3.2.4，再持续两天（共计 12 次运行），如同 图2.
  3. 交替率与侧偏偏好率的计算
    1. 计算 % 交替率和 % 侧向偏好，其中
      L：大鼠选择左侧臂
      R：大鼠选择右臂
      正确选项：2nd 运行与1不同st 在给定的集合中（每个集合包含两次运行）
      错误选择：大鼠选择与之前运行相同的臂
      Correct choice percentage equation; calculation method with formula diagram for statistical analysis.
      Rat side preference equation; behavioral experiment data analysis method.
      示例：
      第1天：L L / L L
      第2天：L L / L R
      第3天：R L / L L
      交替：2（正确选择）/6（完成的总组数）× 100 = 33.33%
      侧向偏好：10（左侧，偏好侧）/12（总运行次数）× 100 = 83.33%
  4. 术后护理：
    1. 术后每12小时给予大鼠布托啡诺（0.01 mg/kg，腹腔注射），持续2天。心脏骤停后观察大鼠长达1小时。
    2. 将大鼠连接至呼吸机和加热垫，直至其恢复足够的意识以维持胸卧位。术后为维持动物体温，将大鼠置于婴儿培养箱中（设置温度为 27 °C，湿度为 50%）。
    3. 术后24小时内为动物提供软化饲料（用水浸泡制成）。若大鼠未主动饮水，应给予抑菌生理盐水（100 mL/kg/天，腹腔注射），直至动物恢复并能自由饮水。
    4. 在所有伤口处给予大鼠外用抗生素并缓解疼痛（杆菌肽和利多卡因软膏）。待大鼠完全恢复后，将其移回动物饲养设施。
  5. 安乐死方法
    1. 使用5%异氟烷和100% N₂2实验结束时对动物实施安乐死。

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

结果

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

全脑缺血（ACA）主要导致工作记忆（短期记忆）功能障碍28,29。为评估ACA后学习与记忆功能，我们采用改良的自发交替实验来评价工作记忆（短期记忆）30。自发交替实验结果显示，与对照组（62.96 ± 6.07%）相比，ACA组连续三天的交替率显著降低（26.19 ± 4.96%）（*p0.05）35，原因是接受ACA处理的大鼠较对照组表现出明显的侧向偏好（82.14 ± 4.57% 对 62.89 ± 2.86%，*p0.05） （图3a和3b）35，从而导致自发交替率下降。结果以均值±标准误（S.E.M.）表示。数据采用单因素方差分析（one-way ANOVA），随后进行Turkey...

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

讨论

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

与Deacon和Rawlins的方案相比，本研究进行了若干修改31。使用3D打印机制造T型迷宫，3D打印为商业化T型迷宫提供了经济且成本效益高的替代方案。为降低大鼠在实验过程中的焦虑情绪，T型迷宫实验在光线最暗的暗室中进行。当大鼠进入其中一个目标臂后，我们轻柔地封闭相对的另一臂。这一操作可避免实验中可能引起的压力，同时防止在放下闸门时对大鼠尾巴造成损伤。任何不必要的应激都会抑制大鼠在后续实验中的表现。因此，本研究采用"T"型连接块作为闸门，以消除测试过程中塑料滑动闸门所产生的摩擦噪音。该步骤可显著降低大鼠在T型迷宫实验中的焦虑水平。

适应是T型迷宫实验成功的关键步骤，因为焦虑的大鼠缺乏在迷宫中奔跑的动力。因此，必须确保大鼠在实验前已适应人类的触摸、高度以及从笼子转移到迷宫的过程。当操作者试图接触焦虑的大鼠时，它们会发出吱吱声或嘶嘶声。此外，焦虑的大鼠在T型迷宫实验过程中通常表现出长时间的僵直反应，或拒绝进入迷宫奔跑，且大部分时间停留在起始臂，不探索迷宫其他区域。如果大鼠不进入迷宫奔跑，可轻触其尾部以促使其移动。另一种可...

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

披露

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

作者无任何利益冲突需要披露。

致谢

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

本研究工作得到了美国国立卫生研究院/国家神经疾病与卒中研究所资助项目1R01NS096225-01A1、美国心脏协会资助项目AHA-13SDG1395001413、AHA-17GRNT33660336、AHA-17POST33660174、路易斯安那州立大学研究委员会资助项目、马尔科姆·费斯特心血管研究奖学金以及伊芙琳·F·麦克奈特脑研究所的支持。

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
3D 打印机MakerBotReplicator第五代
3D 打印机耗材HatchboxPLA，1.75 mm 线径
200 证明纯乙醇KoptecV1005SG
Sani-ChipsPJ Murphy-Forest Products粒径：8 至 20 目；2.2 立方英尺/包；可高压灭菌袋装
大鼠Charles River LaboratoriesSprague-Dawley
维库溴铵溴化物Sun Pharmaceutical47335-931-4010 mg
肾上腺素Par Pharmaceutical42023-103-01肾上腺素氯化物溶液 1 mg/mL，1:1000
盐酸丁丙诺啡注射液Pfizer00409-2012-320.3 mg/mL
SketchUpTrimble Inc.三维建模软件
VentElite 小动物呼吸机Harvard Apparatus55-7040适用于从小鼠到豚鼠（10 g 至 1 kg）体型范围的动物
PowerLab 8/35AdinstrumentsPL35088 个模拟输入通道 – 其中 4 个可用于差分模式。
Bio AmpsAdinstrumentsFE132Bio Amp 是一种电隔离的高性能差分生物放大器，专为测量多种生物信号（如心电图、肌电图和脑电图记录）而优化。
Quad Bridge AmpAdinstrumentsFE224四通道非隔离桥式放大器，设计用于使 PowerLab 能够连接大多数直流桥式换能器。
LabChart 8Adinstruments
ABL80 FLEX CO-OX 血气分析仪RadiometerpH / p CO2 / p O2
SURFLO 聚四氟乙烯静脉导管Terumosc-361556仅使用柔性薄壁导管（49 mm 长）
移液/输注针头Hamilton7748-0317 号；93 mm 长；10 度角
Classic T3 蒸发器SurgiVetVCT302Classic T3 异氟烷漏斗加注型
ENVIRO-PURE 活性炭罐SurgiVet32373B10设计用于吸收废气麻醉气体
O2 单流量计SurgiVet32375B10–1000 mL
N2O 流量计VetEquip4017210–4 LPM
Clay Adams Intramedic 鲁尔短管接头（无菌）Becton Dickinson42756523 号
微型镊子Black and Black 外科B3FRC-18 RM-87 1/4"（18 cm），8 mm 右弯，带配重和 2 mm 导引销，平台尺寸 6 × 0.3 mm，弯曲型。
Halstead 蚊式止血钳RobozRS-7111弯曲型；5" 长，1.3 mm 尖端直径，2.1 mm 颌宽
Mixter 镊子RobozRS-72915.25" 弯曲超精细，1.1 mm 尖端
Castroviejo 微型解剖弹簧剪RobozRS-5650直型，尖锐端头；9 mm 刃口；0.15 mm 尖端宽度；3 1/2" 总长度
Mayo-Stille 剪刀RobozRS-68915.5" 圆弧弯曲
Dumont #5 镊子RobozRS-505845 度 Dumoxel 尖端尺寸 0.10 × 0.06 mm
Olsen-Hegar 剪刀与持针器组合RobozRS-7884交叉锯齿尖端；5.5" 长
Moloney 镊子RobozRS-8254带齿；轻微弯曲；4.5" 长

参考文献

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Writing Group, M., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 133, e38-e360 (2016).
  2. Beuret, P., et al. Cardiac arrest: prognostic factors and outcome at one year. Resuscitation. 25, 171-179 (1993).
  3. Kim, Y. J., et al. Long-term neurological outcomes in patients after out-of-hospital cardiac arrest. Resuscitation. 101, 1-5 (2016).
  4. Earnest, M. P., Yarnell, P. R., Merrill, S. L., Knapp, G. L. Long-term survival and neurologic status after resuscitation from out-of-hospital cardiac arrest. Neurology. 30, 1298-1302 (1980).
  5. Cerchiari, E. L., Safar, P., Klein, E., Cantadore, R., Pinsky, M. Cardiovascular function and neurologic outcome after cardiac arrest in dogs. The cardiovascular post-resuscitation syndrome. Resuscitation. 25, 9-33 (1993).
  6. Petito, C. K., Feldmann, E., Pulsinelli, W. A., Plum, F. Delayed hippocampal damage in humans following cardiorespiratory arrest. Neurology. 37, 1281-1286 (1987).
  7. Schmidt-Kastner, R., Freund, T. F. Selective vulnerability of the hippocampus in brain ischemia. Neuroscience. 40, 599-636 (1991).
  8. Corkin, S. What's new with the amnesic patient H.M.? Nat Rev Neurosci. 3, 153-160 (2002).
  9. Scoville, W. B., Milner, B. Loss of recent memory after bilateral hippocampal lesions. 1957. J Neuropsychiatry Clin Neurosci. 12, 103-113 (2000).
  10. Smith, T. D., Calhoun, M. E., Rapp, P. R. Circuit and morphological specificity of synaptic change in the aged hippocampal formation. Neurobiol Aging. 20, 357-358 (1999).
  11. Gage, F. H., Dunnett, S. B., Bjorklund, A. Spatial learning and motor deficits in aged rats. Neurobiol Aging. 5, 43-48 (1984).
  12. Tulving, E., Markowitsch, H. J. Episodic and declarative memory: role of the hippocampus. Hippocampus. 8, 198-204 (1998).
  13. Neigh, G. N., et al. Cardiac arrest with cardiopulmonary resuscitation reduces dendritic spine density in CA1 pyramidal cells and selectively alters acquisition of spatial memory. Eur J Neurosci. 20, 1865-1872 (2004).
  14. Volpe, B. T., Davis, H. P., Towle, A., Dunlap, W. P. Loss of hippocampal CA1 pyramidal neurons correlates with memory impairment in rats with ischemic or neurotoxin lesions. Behav Neurosci. 106, 457-464 (1992).
  15. Astur, R. S., Taylor, L. B., Mamelak, A. N., Philpott, L., Sutherland, R. J. Humans with hippocampus damage display severe spatial memory impairments in a virtual Morris water task. Behav Brain Res. 132, 77-84 (2002).
  16. Lee, R. H., et al. Fatty acid methyl esters as a potential therapy against cerebral ischemia. OCL. 23, D108(2016).
  17. Lee, R. H., et al. Chapter 1. Palmitic acid: occurrence, biochemistry and health effects. Porto, L. F. , Nova Science Publishers, Inc. 1-15 (2014).
  18. Tolman, E. C., Gleitman, H. Studies in spatial learning; place and response learning under different degrees of motivation. J Exp Psychol. 39, 653-659 (1949).
  19. Koopmans, G., Blokland, A., van Nieuwenhuijzen, P., Prickaerts, J. Assessment of spatial learning abilities of mice in a new circular maze. Physiol Behav. 79, 683-693 (2003).
  20. Barnes, C. A. Memory deficits associated with senescence: a neurophysiological and behavioral study in the rat. J Comp Psychol. 93, 74-104 (1979).
  21. Paul, C. M., Magda, G., Abel, S. Spatial memory: Theoretical basis and comparative review on experimental methods in rodents. Behav Brain Res. 203, 151-164 (2009).
  22. Vorhees, C. V., Williams, M. T. Assessing spatial learning and memory in rodents. ILAR J. 55, 310-332 (2014).
  23. Sharma, S., Rakoczy, S., Brown-Borg, H. Assessment of spatial memory in mice. Life Sci. 87, 521-536 (2010).
  24. Poon, T. P., et al. Spinal cord toxoplasma lesion in AIDS: MR findings. J Comput Assist Tomogr. 16, 817-819 (1992).
  25. Sunyer, B., Patil, S., Höger, H., Lubec, G. Barnes maze, a useful task to assess spatial reference memory in the mice. Nat Protoc. 390, (2007).
  26. Shoji, H., Hagihara, H., Takao, K., Hattori, S., Miyakawa, T. T-maze forced alternation and left-right discrimination tasks for assessing working and reference memory in mice. J Vis Exp. , (2012).
  27. Seeger, T., et al. M2 muscarinic acetylcholine receptor knock-out mice show deficits in behavioral flexibility, working memory, and hippocampal plasticity. J Neurosci. 24, 10117-10127 (2004).
  28. Olton, D. S., Feustle, W. A. Hippocampal function required for nonspatial working memory. Exp Brain Res. 41, 380-389 (1981).
  29. Hayashida, K., et al. Hydrogen inhalation during normoxic resuscitation improves neurological outcome in a rat model of cardiac arrest independently of targeted temperature management. Circulation. 130, 2173-2180 (2014).
  30. Spontaneous alternation behavior. Dember, W. N., Richman, C. L. , (1989).
  31. Deacon, R. M., Rawlins, J. N. T-maze alternation in the rodent. Nature protocols. 1, 7-12 (2006).
  32. Wong, K. V., Hernandez, A. A review of additive manufacturing. ISRN Mechanical Engineering. 2012, (2012).
  33. Lin, H. W., et al. Derangements of post-ischemic cerebral blood flow by protein kinase C delta. Neuroscience. 171, 566-576 (2010).
  34. Lin, H. W., et al. Fatty acid methyl esters and Solutol HS 15 confer neuroprotection after focal and global cerebral ischemia. Transl Stroke Res. 5, 109-117 (2014).
  35. Lee, R. H., et al. Interruption of perivascular sympathetic nerves of cerebral arteries offers neuroprotection against ischemia. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 312, H182-H188 (2017).
  36. Bali, Z. K., et al. Differential effects of alpha7 nicotinic receptor agonist PHA-543613 on spatial memory performance of rats in two distinct pharmacological dementia models. Behav Brain Res. 278, 404-410 (2015).
  37. McDonald, J. H. Handbook of biological statistics. 2, Sparky House Publishing. Baltimore, MD. (2009).
  38. Castellano, M. A., Diaz-Palarea, M. D., Rodriguez, M., Barroso, J. Lateralization in male rats and dopaminergic system: evidence of right-side population bias. Physiol Behav. 40, 607-612 (1987).
  39. Andrade, C., Alwarshetty, M., Sudha, S., Suresh Chandra, J. Effect of innate direction bias on T-maze learning in rats: implications for research. J Neurosci Methods. 110, 31-35 (2001).

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

重印与许可

申请许可以重复使用本 JoVE 文章的文本或图表

申请许可

标签

相关文章