全身麻醉下小鼠幸福度的系统评价

Katharina Hohlbaum; Bettina Bert; Silke Dietze; Rupert Palme; Heidrun Fink; Christa Thöne-Reineke

doi:10.3791/57046

方法文章

全身麻醉下小鼠幸福度的系统评价

DOI：

10.3791/57046

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2018年3月20日

Katharina Hohlbaum¹^,² , Bettina Bert²^,³ , Silke Dietze² , Rupert Palme⁴ , Heidrun Fink² , Christa Thöne-Reineke¹

¹Institute of Animal Welfare, Animal Behavior and Laboratory Animal Science, Department of Veterinary Medicine, Freie Universität Berlin, ²Institute of Pharmacology and Toxicology, Department of Veterinary Medicine, Freie Universität Berlin, ³German Federal Institute for Risk Assessment (BfR), ⁴Unit of Physiology, Pathophysiology and Experimental Endocrinology, Department of Biomedical Sciences, University of Veterinary Medicine

本文内容

摘要

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我们制定了一个协议, 以评估小鼠的福祉在程序中使用全麻。分析了一系列的行为参数, 说明了幸福水平和糖皮质激素代谢产物。该议定书可作为一般援助, 以科学的、以动物为中心的方式估计严重程度。

摘要

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根据罗素和科里开发的3R 原理 (替换、还原、细化), 科学研究应尽可能使用动物实验的替代品。如果不能替代动物实验, 那么所使用的实验动物总数应该是获取有价值数据所需的最低数量。此外, 应采用适当的细化措施, 以尽量减少伴随实验程序的痛苦、痛苦和痛苦。用于分类疼痛、痛苦和痛苦程度的类别是不恢复的、轻度的、中等的或严重的 (欧盟指令 2010/63)。要确定哪些类别适用于个别案例, 使用科学的声音工具是至关重要的。

这里提出的幸福评估协议是为使用全麻的程序设计的。该协议的重点是家庭笼活动, 鼠标鬼脸规模, 和奢侈行为, 如穴居和巢建筑行为作为福祉的指标。它也使用自由探索范式的特质焦虑相关行为。粪便皮质酮代谢物作为急性应激指标的测量在24小时后麻醉期间。

该议定书提供了有关全麻后小鼠的福祉的科学可靠的信息。由于其简单性, 该协议可以很容易地被修改和集成在一个计划的研究。虽然它没有提供一个规模, 根据欧盟指令2010/63 分类的苦恼, 它可以帮助研究人员估计一个程序的严重性程度, 使用科学的声音数据。它提供了一种以科学、动物为中心的方式来改进对幸福的评估的方法。

引言

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欧盟指令 2010/63¹规定, 每当需要动物试验时, 由罗素和2开发的3R 原理 (替换、还原、细化) 将被应用.欧盟指令的最终目标是逐步淘汰所有动物试验, 但该指令承认, 目前还需要一些动物实验来进行研究, 以保护人类和动物的健康。因此, 如果动物实验不能被任何替代方法所取代, 只有最小数量的实验动物被用来获得可靠的结果。此外, 使用适当的细化措施, 应尽量减少伴随实验程序的疼痛、痛苦和苦恼的数量。欧盟指令2010/63 规定, 过程的严重性必须前瞻性归类为非恢复、温和、适度或严重的¹。由于严重性分类是根据个案来决定的, 因此有科学的声音工具来估计给定过程的严重性是很重要的。

根据莫顿和格里菲斯的建议, 评分表³是检测任何偏离正常状态的重要工具, 包括对福祉⁴的负面影响。评分表用于回顾性地确定由实验引起的疼痛、痛苦和苦恼, 并着重于个体动物 (例如、体重、皮毛、步态) 的物理状态的可见变化。虽然, 欧盟指令2010/63 的附件八提供了每个严重性类别的例子, 但研究人员仍然缺乏利用科学基础的数据来估计给定程序严重性程度的工具。

缺乏显示消极福祉的指标并不是确定动物....

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方案

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这项研究是根据《德国动物福利法》规定的准则进行的, 并得到了柏林国家当局 ("Landesamt 并且一厢情愿和 Soziales") 的批准, 允许号码: G0053/15)。

注: 本议定书的主要目的是研究反复麻醉对糖皮质激素代谢物的影响。为了确定要使用的动物数量, 进行了一个样本大小计算: n ≥ 2 x (s/µ₁-µ₂)² x (z_α + z_β)²。µ₁-µ₂是指在其中进行功率和样本大小计算 (α = 5%, β = 80%) 的填充方式之间的差异; z_α = 1.96 和 z_β = 0.84 是标准正态分布的分位数。图 1说明了此协议的时间线。如果协议的参数显示与控制级别的差异, 应密切监视动物, 并在适当的时间后再测量参数。例如, 如果增加了特质焦虑相关行为, 则应在一周后再次测试此行为, 以帮助确定期间直到完全恢复。本协议中定义的时间点和周期可用于其他过程。在更改时间点时, 应按照协议中的说明来保留适应期。为了减少可能影响小鼠行为的因素, 需要进行更多操作的测试应在不干扰小鼠正常行为的试验后进行。图 2使用摘要计分单汇总了协议....

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结果

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本议定书最初是为了评估 C57BL/6JRj 小鼠在单异氟醚麻醉 (一次45分钟麻醉疗程, n = 13 女性) 或重复异氟醚麻醉 (六45分钟麻醉疗程 3-4 天) 后的福祉而制定的。在麻醉疗程之间, n = 13 女性) 与控制小鼠 (n = 6 位女性) 的福利相比,¹⁰, 没有接受麻醉, 但根据相同的措施测试。我们评估了单一经验的异氟醚麻醉和重复异氟醚麻醉对 C57BL/6JRj 小鼠的幸福与未经治疗的控制小鼠的影响。这里, 女性 C57BL/6JRj 小鼠的代表性结果, 包括以前在 Hohlbaum et . 中发布的一些数据。显示¹⁰以及以前未发布的结果。

统计分析

对每个参.......

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讨论

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该议定书最初是为了评估接受单一麻醉或重复异氟醚麻醉的 C57BL/6JRj 小鼠的福祉而制定的。研究结果证实, 对奢侈品行为的测试以及其他措施 (例如自由探索范式、mg、穴居食物摄取) 都是评估幸福感的敏感方法。反复异氟醚麻醉对特质焦虑相关行为、特征和穴居行为产生短期影响。此外, 反复异氟醚麻醉似乎影响食物摄取量¹⁰。

自由探索范式表明, 减少了探索行为, 因此, 在反复麻醉的小鼠中, 与仅麻醉一次的小鼠相比, 较高的特质焦虑水平和控制。但是, 所有组的鼠标都探索了网格化笼顶^部10, 20.在调查与焦虑相关的行为时, 区分特征和状态焦虑是很重要的²¹^,²²。将鼠标放置在不熟悉的环境中会诱发状态焦虑。相比之下, 自由探索范式允许动物呆在自己的笼子里, 从而调查特质焦虑。

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披露

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作者没有什么可透露的。

致谢

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多亏了 Rassam 的样本收集, 伊迪丝 Klobetz--对 FCM 的分析, PD 博士. 兽医。habil。萝丝维塔梅尔协助统计分析, 并 Wiebke Gentner 校对手稿。这项研究是柏林-勃兰登堡研究平台 BB3R (www.bb3r.de) 的一部分, 由德国联邦教育部和研究部资助 (赠款号: 031A262A) (www.bmbf.de/en/index.html)。

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材料

本文使用的材料清单
姓名	公司	目录编号
Isofluran	CP-Pharma Handelsgesellschaft mbH	1214
InfraMot - 传感器单元	TSE Systems	302015-SENS
InfraMot - 控制单元	TSE Systems	302015-C/16
InfraMot - 软件	TSE Systems	302015-S
Nestlet N	Ancare - Plexx	NES3600
相机 EOS 350D	佳能

参考文献

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2010 EU. Directive 2010/63/EU. Official Journal of the European Union. , L276/33-L276/29 (2010).
Russell, W. M. S., Burch, R. The principles of humane experimental technique. , London: Methuen. (1959).
Morton, D. B., Griffiths, P. H. Guidelines on the recognition....

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