方法文章

切片中石蜡嵌入组织的切割和漂浮方法

DOI：

10.3791/58288

⸱

2018年9月5日

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Life Science, Nanchang University, 2Queen Mary School, Medical Department, Nanchang University, 3School of Life Science, Nanchang University

* These authors contributed equally

本文内容

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

在这里, 我们提出了一个改进石蜡切片的协议。这种方法结合切割和浮动使用一个简单的恒温室, 以避免转让过程中所需的传统方法。结果表明, 石蜡切片的效率和数量均有显著提高。

摘要

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石蜡嵌入组织切片被广泛应用于组织学和病理学。然而, 这是乏味的。为了改进这种方法, 几家商业公司利用流体水设计了复杂的断面传输系统。为了简化这项技术, 我们创建了一个简单的方法, 使用自制的设备, 结合切割和浮动在一个简单的恒温室;因此, 各部分自动进入水浴在水面上。用常规石蜡切片和所提出的方法进行比较, 对成年小鼠脑、成年小鼠肾脏、胚胎小鼠大脑和成年斑马鱼眼的海马体进行切割。统计分析表明, 改进后的方法节省了时间, 产生了较高的质量剖面。此外, 在短时间内石蜡切片的整个标本是容易的初级操作者。

引言

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形态学研究在生物研究中具有重要意义。虽然新技术允许研究人员直接从整个组织或有机体观察他们的目标1,2,3, 切割标本成薄切片, 其次是染色, 仍然是主要的方法 fornot 组织形态学, 也可直接在组织中进行蛋白靶向。光镜使用三切片类型: 石蜡, 冷冻和半薄切片。虽然 cryosectioning 是常见的保护组织抗原性, 标本准备是简单的, 保留组织形态学较差, 不适合薄切片4,5。石蜡切片是展示保存完好的形态学最常用的方法。由于试样完全脱水, 并嵌入蜡, 石蜡块可以无限期储存。此外, 石蜡切片产生薄切片, 以改善生物探针进入进一步的实验和减少细胞层叠加在 Z 方向。

然而, 传统的石蜡切片是繁琐的, 需要操作员的技能。石蜡切片经过固定, 脱水, 嵌入, 切割和漂浮。重要的是, 将节带从刀座转移到水浴是必要的, 但对于初级操作者来说是困难的。特别是在干燥的空气中, 节带会由于静电而扭曲, 在温暖的水面上很难展开。为提高切片质量, 在切片刀片通过后, 将所暴露的组织表面湿润, 将蜡块浸泡在冰水中, 或者在切片附近用加湿器提高湿度, 建议6<....

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方案

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这里介绍的所有方法均经南昌大学动物保育委员会批准。

1. 装配设备并连接切片

  1. 根据要求设计参数 (补充图 1)。
  2. 将参数提交当地工厂生产丙烯酸板。
  3. 按顺序装配所有部件: 使用氯仿将7个商业丙烯酸板组合成一个带有截面通道和水浴的水箱 (图 1)。
    注意: 氯仿在遇到光和氧时会产生有毒物质。把器具装配在通风罩里。
  4. 将管状电热元件通过压克力板 #1 (图 2A、箭头) 安装在孔中。
  5. 要安装温度控制器, 请使用电钻在 #2 丙烯酸板上创建一个小孔, 并安装温度检测器 (图 2A、箭头)。在水箱上安装数字恒温器 (图 2A)。
    注: 温度探测器应在水面以下1厘米以内。
  6. 要提供电源接入, 请在打开设备前调整电压低于 24 V。
  7. 从切片中移除剖面废物托盘。
  8. 用中性硅胶密封胶将截面通道与切片刀片架连接 (

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结果

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改进后的方法增加了完整石蜡切片的数量。我们对成年小鼠海马组织、成年小鼠肾脏、胚胎小鼠大脑和斑马鱼的眼睛进行了新的检测。水被增加到坦克, 并且水温保持在38.0 °c 之间到40.0 °c。在连续制备组织样品后, 切片并与常规切片进行比较。该方法避免了切片丢失, 增加了成年小鼠海马、成年小鼠肾脏、E15.5 鼠脑和成年斑马鱼眼中完整切片的比例 (图 4A、4C、4E、4G)。最后, 我们的方法改进了切片, 防止切片损失和收获更完整的切片每标本。

改进后的方法减少了试样的花费时间。在比较常规方法和改进方法之间的时间时, 我们对成年小鼠海马、成年小鼠肾脏、E15.5 鼠脑和成人进行了全系列切片 (从第一节到器官的最后一节)。斑马鱼的眼睛。结果表明, 改进后的方法在所有测试样品中加速了石蜡切片速度 (图 4B.......

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讨论

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为改善石蜡切片形貌, 解决常规石蜡切片过程中的浪费时间问题, 我们建立了一种改进的石蜡切片方法, 结合切割和展开。这种改进的方法依赖于简单的设备, 包括剖面通道, 水浴和加热器与温度检测开关。节带通过剖面通道进入水浴, 并在切割时自动展开。因此, 该方法提高了石蜡切片的质量和效率, 这是通过石蜡切片的成年小鼠海马, 成年小鼠肾脏, E15.5 小鼠的大脑, 和成年斑马鱼眼睛验证。

为了避免在常规石蜡切片期间卷曲, 许多调整, 如滋润组织表面, 冷却蜡块, 增加湿度, 并结合 cryosectioning6,7, 8;然而, 这些调整使石蜡切片更繁琐。一个依赖于流体水的商业部门转移系统更加成功。在该系统中, 该剖面在切割后立即接触到水面, 电机驱动的水流将截面从刀片持有者转移到下温水浴9。由于其机理, 静电不会抑制切片, 从而提高断面质量。此外, 由于.......

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披露

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作者在这一设备上有专利, 并且声明没有竞争利益。

致谢

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

这项工作得到了中国国家自然科学基金 (31400936、31460260号赠款) 和江西省自然科学基金 (20171BAB215020) 的支持。我们还感谢南昌大学与伦敦玛丽大学的联合项目支持这项工作。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
Boekel Scientific133000-2培养箱
 国药化学试剂有限公司，Lid64-17-5
二甲苯 国药化学试剂有限公司，盖子1330-20-7
寄生体徕卡39601006
加热石蜡包埋模块徕卡
商用亚克力板
三氯甲烷国药集团化学试剂有限公司，盖子67-66-3
管状电加热元件（12 V 200 W）
温度控制器（12 V 120 W）明硕XH-W3002
石版切片机 Leica
中性硅酮密封胶用切片机刀架连接水道
电压互感DearllS-250-12
一次性刀片Accu-Edge4689
苏木精Baso Diagnostics Inc.BA-4025
曙红 Baso Diagnostics Inc. 公司BA-4025
MicroslideSail 品牌7105
中性香脂国药化学试剂有限公司，盖10004160
盖玻片 Citoglas10212424C
显微镜Carl Zeiss
盐酸西龙化工7647-01-0
石蜡切片水浴Leica
HistoCore Arcadia C - 冷板Leica
石蜡驱蚊喷雾Thermo Scientific9990420
乙醇器

参考文献

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  1. Chung, K., Deisseroth, K. CLARITY for mapping the nervous system. Nature Methods. 10 (6), 508-513 (2013).
  2. Fujita, S. Analysis of neuron differentiation in the central nervous system by tritiated thymidine autoradiography. Journal of Comparative Neurology. 122 (3), 311-327 (1964).
  3. Mironov, V., Boland, ....

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重印与许可

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