我们提出了一种通过向Sprague-Dawley大鼠注射脂多糖(LPS)来诱导并检测慢性微出血(CMHs)的实验方案,该方法可用于未来关于CMHs发病机制的研究。
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我们提出了一种通过向Sprague-Dawley大鼠注射脂多糖(LPS)来诱导并检测慢性微出血(CMHs)的实验方案,该方法可用于未来关于CMHs发病机制的研究。
脑微出血(CMHs)在老年患者中较为常见,且与多种神经精神疾病相关。CMHs的病因复杂,常伴随神经炎症的发生。本文介绍了一种通过脂多糖(LPS)注射诱导的亚急性CMH大鼠模型,以及检测CMHs的方法。全身性LPS注射操作相对简便、经济且成本较低。LPS注射的一个主要优势在于其诱导炎症反应的稳定性。通过LPS注射引起的CMHs可通过肉眼观察、苏木精-伊红(HE)染色、普鲁士蓝染色、伊文思蓝(EB)双标法以及磁共振成像-磁敏感加权成像(MRI-SWI)技术进行检测。最后,本文还讨论了其他建立CMH动物模型的方法及其各自的优点和/或局限性。
经典脑微出血(CMHs)是指脑内红细胞中的血红蛋白降解产物(如含铁血黄素)在血管周围形成的微小沉积1。根据鹿特丹扫描研究,约17.8%的60至69岁人群和38.3%的80岁以上人群中可发现CMHs2。老年人群中CMHs的患病率相对较高,且已有研究证实CMHs的累积与认知功能障碍及神经精神功能障碍之间存在相关性3,4。近年来已报道多种CMHs的动物模型,包括通过IV型胶原酶立体定位注射诱导的啮齿类动物模型5、APP转基因模型6、β-N-甲基氨基-L-丙氨酸暴露模型7以及高血压模型8,其中由系统性炎症诱导的CMHs模型是目前最受认可的选择之一。Fisher et al.9首次使用来自Salmonella typhimurium的脂多糖(LPS)建立急性CMHs小鼠模型。随后,该研究团队采用相同方法进一步建立了亚急性CMHs小鼠模型2。
脂多糖(LPS)....
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本文所述所有方法均已获得中国人民解放军陆军总医院动物护理与使用委员会(ACUC)的批准。
1. 材料
2. 动物
3. LPS 注射
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CMH 可通过多种方法进行检测。目前最广泛接受的方法包括:(1)肉眼观察和评估表面 CMH(见图1,上图);(2)通过苏木精-伊红(HE)染色检测红细胞(见图2A,上图),或通过普鲁士蓝染色检测红细胞裂解释放的三价铁(图2A,下图);(3)伊文思蓝(EB)双染法检测血脑屏障渗漏所致的 EB 沉积(图3,左图);(4)磁共振成像 SWI 序列检测 CMH 的低信号表现(图4,左图)。
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近年来,关于脑微出血(CMHs)的研究逐渐增多。然而,CMHs的发病机制仍不明确,促使科学家建立模拟该特定状况的动物模型。例如,Hoffmann et al. 建立了一种由缺氧诱导的CMHs小鼠模型,表明CMHs由缺氧及脑血管自身调节功能障碍所致12。Reuter et al.5在APP23转基因小鼠中建立了CMHs模型,结果显示脑淀粉样血管病(CAA)在CMHs的病因学中起主要作用。Fisher et al.报道了一种通过注射LPS诱导的CMHs小鼠模型9,揭示了炎症是导致CMHs的原因之一2,13,14。类似地,我们已成功利用LPS注射在SD大鼠中建立了一种亚急性CMHs模型,并发现一氧化氮合酶(NOS),特别是神经元型NOS和内皮型NOS,参与了CMH.......
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作者无任何利益冲突需要披露。
感谢首都医科大学雷建锋老师及其同事在磁共振成像方面的指导。同时感谢宜昌市第二人民医院神经内科曾静提供的技术支持。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| LPS | Sigma-Aldrich | L-2630 | 用于诱导炎症 |
| EB | Sigma-aldrich | E2129 | 用于检测EB渗漏 |
| DAPI染色液 | Servicbio | G1012 | 免疫荧光计数用介质 |
| Perl’s普鲁士蓝染色试剂 | Solarbio | G1424 | 普鲁士蓝染色试剂盒 |
| 苏木精-伊红(HE)染色 | Solarbio | G1120 | HE染色试剂盒 |
| 水合氯醛 | Sigma-Aldrich | 47335U | 用于麻醉 |
| 磷酸盐缓冲液(PBS) | Solarbio | P1022 | 实验中常用的缓冲溶液 |
| 0.9%生理盐水溶液 | Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., 中国 | 灌注用溶液 | |
| 多聚甲醛 | Sigma-Aldrich | 158127 | 常用于固定的溶液 |
| 20%蔗糖溶液 | Solarbio | G2461 | 常用于固定的溶液 |
| 30%蔗糖溶液 | Solarbio | G2460 | 常用于固定的溶液 |
| 兽用眼膏 | Solcoseryl眼用凝胶,Bacel,瑞士 | 用于大鼠眼部保护 |
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