兔 vx2 模型在肝癌中的开发与应用

摘要

本文的目的是为 vx2 肝癌兔模型的开发和应用提供一个入门。

摘要

兔 vx2 肿瘤是介入放射学领域肝细胞癌 (hcc) 转化研究的常用动物模型。该模型采用了一种再生鳞状细胞癌, 该细胞癌在供体家兔的骨骼肌中容易和可靠地传播, 以便最终收获并同种异体移植植入天真受者的肝脏。这种肿瘤移植在受者兔的肝脏中迅速生长成血管造影可识别的肿瘤, 其特征是由一个可行的血管高血管囊包围的坏死核。兔子解剖的物理大小足以促进血管器械, 允许各种介入技术的应用和测试。尽管有这些好处, 但缺乏技术资源, 无法作为研究人员使用该模型的具体参考。在此, 我们提出了一个全面的视觉概述的技术方面的发展, 生长, 繁殖, 和血管造影利用的兔子 vx2 肿瘤模型, 供新手和有经验的研究人员使用。

引言

兔 vx2 肿瘤模型自 1935年 1^,2发展以来, 在实验肿瘤学中发挥了重要作用。该肿瘤是一种病毒引起的再生鳞状细胞癌, 其特征是血管增生、生长快、在骨骼肌中容易繁殖 3^,4。而兔 vx2 肿瘤模型已被用来研究多种癌症^5,6,7,8;本文的重点是肝癌⁹。

所述方法的目的是提出一个模型的原发性肝癌, 或肝细胞癌 (hcc), 可用于介入放射科医生的翻译研究。它可用于药代动力学研究、治疗调查和消融方法检测^{10,11,12,13,14}

方案

以下协议遵循伊利诺伊大学芝加哥分校规定的所有要求和准则。它在执行前经过了当地动物护理和使用机构委员会的审查和批准。

1. vx2 hind 肢体肿瘤的发展

1. 从国家癌症研究所癌症治疗诊断和治疗肿瘤细胞系存储库中获得 vx2 肿瘤细胞系。
   注意: 此时, 订单目录可在以下链接中找到: https://dtp.cancer.gov/repositories/。
2. 准备注射用细胞悬浮液, 将冷冻的 vx2 样品和甲基纤维素培养基放入温水中, 直到它们解冻。
   1. 将解冻的细胞悬浮液和同等数量的解冻甲基纤维素培养基吸血到5毫升注射器中。
      注意: 它可能有助于使用21或 22 g 针吸气细胞悬浮液和一个更大的规格针吸气甲基纤维素培养基。将注射器放在冰上。
3. 为细胞悬浮液的接种准备后肢肿瘤供体兔, 从肌内注射的 1 mg kg 环丙嗪和 0.02 mg/kg 丁丙诺非开始。剃光部位 (后肢) 用剪子和清洁剃光的是以酒精或碘为基础的药物。
   注: 美洛昔康可在皮下0.2 mg* 千克的剂量下给予镇痛。兔子的皮毛很难刮胡子。建议研究人员进行多次传球, 首先重点清理大部分皮草, 然后将剪子按在皮肤上, 与谷物对着干。
4. 将 16 g 针连接到含有细胞悬浮液的5-ml 注射器上, 并将1毫升的悬浮液注射到供体兔后肢肌肉的腹部, 深度约1厘米。一定要保护坐骨神经沿着股骨在一个....

结果

当看图 1, 很明显, 兔子的四头肌扩大。此外, 多个小的离散结节, 通常与肿瘤生长通过筋膜相关, 是可见的。触诊时, 注射肢体应出现比非注射肢体。如果研究人员需要更明确的肿瘤存在保证, 超声成像可以用来识别嵌入肌肉中的肿瘤。如果没有检测到肿瘤, 后肢应重新注射肿瘤细胞悬浮液。

为了确认成功的血管通路, 在抽吸时观察到血液返回鞘, 如图13d 所示。如果血管通路不成功, 尝试抽吸会产生空气在鞘或存在明显的阻力时, 拉注射器的柱塞。

对于肝脏肿瘤的生长, 有两种方法来确认成功的繁殖: 血管造影和尸检。在血管造影中, 肿瘤的识别可能会立即发生, 如图 14a中.......

讨论

vx2 肿瘤方法的第一个关键步骤是成功地在供体兔的后肢传播肿瘤。有关此步骤的详细信息, 请参阅 "代表性结果" 部分的第一段。

下一个关键步骤是确保正确识别可行的肿瘤胶囊。这不仅对肿瘤悬浮液的制备是必要的, 对肝植入的肿瘤碎片的选择和产生也很重要。图 4对活肿瘤和周围肌肉组织之间的界限进行了注释。如果在悬浮液制备过程中刮伤不正确的组织样本, 随后的后肢繁殖将失败。如果在肝植入过程中发生这种情况, 则不会发生肝脏中的肿瘤生长。这在血管造影之前是不明显的。

在肝植入过程中, 当接近肝脏的左叶时, 应小心。通常情况下, 如果肝脏是显而易见的, 当进入腹膜, 它实际上是肝脏的内侧叶, 操作人员正在观察。植入肝脏的内侧叶是血管造影使用的少数问题。首先是内侧叶与脊椎的解剖关系。内侧叶肿瘤往往会被脊柱在透视上混淆, 这使得肿瘤的确认和治疗变得困难。此外, 胃十二指肠动脉更经常与提供内侧叶的血管有关。这增加了非目标栓塞的肠道的风险, 并可能导致肠缺血/梗塞和可能死亡的动物。如前所述,.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
MethoCult （Methycellulose）	Stemcell Technologies	M3134
VX2 细胞系	NCI	VX-2
5 mL 注射器	BD	309646
16 G 针	BD	305197
22 G 针	BD	305155
理发器	Wahl	41870-0438
泡沫保温箱	Mr. Box Online	10 x 10 x 4
乙酰丙嗪	Henry Schein	003845
丁丙诺啡	Par	42023-179-05
美洛昔康	Henry Schein	049755
酒精垫	Covidien	5033
氯胺酮	Henry Schein	056344
甲苯噻嗪	Akorn	59399-110-20
戊巴比妥 （Fatal-Plus）	Vortech	9373
无菌培养皿	Thermo Fisher	172931
DMEM	Gibco	11965092
盐水	Baxter	2F7124
15 刀片	Steris	02-050-015
手术刀手柄 x 2	Steris	22-2381
弯曲止血器	WPI	501288
无创伤镊子	Sklar	52-5077
纱布	Medline	NON21430LF
11 刀片	Steris	02-050-011
外科手术	器 Ethicon	1951
3-0 PDS / 锥度	Ethicon	Z305H
4 - 0Vicryl / Cutting	Ethicon	J392H
40 μm 过滤器	BD	352340
50 mL 锥形管	Thermo Fisher	339652
塑料移液器	Thomas Scientific	HS206371B
离心机	Sorvall	75004240
1.40 mL 管（内螺纹）	Micronic	MP32131-Z20
3-F VSI Micro-HV 导引器套件	血管解决方案	定制订单 （P15180391）
.018 45° 角度滑轨	Terumo	RG*GA1818SA
Direxion 伯尔尼形微导管	Boston Scientific	M001195230
Omnipaque	GE	Y510