兔VX2肝癌模型的建立及其血管造影应用

摘要

本文旨在为开发和使用VX2癌兔肝癌模型提供基础指导。

摘要

兔VX2肿瘤是一种在介入放射学领域常用于肝细胞癌（HCC）转化研究的动物模型。该模型采用一种未分化型鳞状细胞癌，可在供体兔的骨骼肌中稳定且可靠地传代培养，随后收获并异体移植至未经处理的受体兔肝脏中。移植后的肿瘤在受体兔肝脏内迅速生长，形成在血管造影中可识别的肿瘤，其特征为具有坏死核心，并被一层存活的高血管化包膜所包围。兔的解剖尺寸足够大，便于进行血管介入操作，从而适用于多种介入技术的应用与测试。尽管具有上述优势，目前仍缺乏系统性的技术资料作为研究人员使用该模型的明确参考。本文旨在为初学者和有经验的研究人员提供一份全面的可视化技术指南，涵盖兔VX2肿瘤模型的建立、生长、传代及血管造影应用等各个环节。

引言

兔VX2肿瘤模型自1935年建立以来，在实验肿瘤学中发挥了重要作用^1,2。该肿瘤是一种病毒诱导的未分化鳞状细胞癌，具有高度血管化、生长迅速以及易于在骨骼肌中传代的特点^3,4。尽管兔VX2肿瘤模型已被用于研究多种癌症^5,6,7,8，但本文的重点是肝癌⁹。

本方法旨在建立一种可用于介入放射学领域转化研究的原发性肝癌（即肝细胞癌，HCC）模型。该模型可用于药代动力学研究、治疗学研究以及消融技术的测试^{10,11,12,13,14}<....

方案

以下方案遵循伊利诺伊大学芝加哥分校规定的所有要求和指南。在实施前，已通过当地机构动物护理和使用委员会的审查和批准。

1. VX2 肿瘤后肢模型的建立

1. 从美国国家癌症研究所癌症治疗诊断与治疗肿瘤/细胞系库获取 VX2 肿瘤细胞系。
   注意：目前，订购目录可通过以下链接访问：https://dtp.cancer.gov/repositories/。
2. 为准备用于注射的细胞悬液，将冻存的 VX2 样本和甲基纤维素培养基置于温水中，直至完全解冻。
   1. 用 5 mL 注射器吸取 0.5‒1 mL 解冻后的细胞悬液以及等体积的解冻甲基纤维素培养基。
      注意：建议使用 21 或 22 G 针头吸取细胞悬液，使用较大口径针头吸取甲基纤维素培养基。将注射器置于冰上备用。
3. 准备后肢肿瘤供体兔以接种细胞悬液，首先通过肌肉注射给予每千克体重 1 mg 的乙酰丙嗪和每千克体重 0.02 mg 的丁丙诺啡进行镇静。使用电动剃毛器剃除接种部位（后肢）的毛发，并用酒精或碘制剂清洁剃毛区域。
   注意：可皮下给予每千克体重 0.2 mg 的美洛昔康以提供镇痛。兔毛较难剃除，建议研究者进行多次操作，首次重点清除大部分毛发，随后将剃毛器紧贴皮肤逆毛发生长方向进行精细处理。
4. 将 16 G 针头连接至含有细胞悬液的 5 mL 注射器，向供体兔后肢肌肉腹侧....

结果

观察图1可以明显看出，兔的股四头肌出现肿大。此外，可见多个细小且界限清楚的结节，通常与肿瘤穿过筋膜生长相关。触诊时，注射侧肢体应较未注射侧肢体肿胀。若研究者需要更明确地确认肿瘤的存在，可采用超声成像来识别肌肉内嵌入的肿瘤。若未检测到肿瘤，应使用肿瘤细胞悬液对后肢进行再次注射。

为确认血管通路建立成功，可通过抽吸观察鞘管内是否有回血，如图13D所示。若血管通路建立失败，抽吸时鞘管内将抽出空气，或在拉动注射器活塞时遇到明显阻力。

对于肝肿瘤的生长，可通过两种方式确认成功增殖：血管造影法和尸检法。在血管造影中，肿瘤的识别可能立即显现，例如图14A所示，肿瘤直接从.......

讨论

VX2肿瘤实验方法的第一步关键是在供体兔的后肢成功建立肿瘤。有关此步骤的更多信息，请参见"代表性结果"部分的第一段。

下一步关键步骤是确保正确识别出有活力的肿瘤包膜。这不仅对于制备肿瘤悬液至关重要，而且对于选择和制备用于肝内植入的肿瘤组织块也具有重要意义。图4中标注了有活力的肿瘤组织与周围肌肉组织之间的分界线。若在制备悬液过程中刮取了错误的组织样本，后续的后肢传代将失败；若在肝内植入过程中发生此类错误，则肝脏内不会出现肿瘤生长，这一问题直到血管造影时才会显现。

在进行肝脏植入操作时，应特别注意接近肝脏左叶。通常情况下，当进入腹膜腔时若肝脏清晰可见，操作者实际观察到的往往是肝脏的内侧叶。将肿瘤植入肝脏内侧叶会对血管造影的应用带来若干问题。首先，内侧叶在解剖位置上邻近脊柱，在透视成像时内侧叶的肿瘤常会被脊柱遮挡，从而难以确认肿瘤位置并实施治疗。此外，胃十二指肠动脉通常更多地为内侧叶的血供血管提供血液供应，这会增加非靶向性肠道栓塞的风险，可能导致肠道缺血/梗死，甚至.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
甲基纤维素（MethoCult）	Stemcell Technologies	M3134
VX2 细胞系	NCI	VX-2
5 mL 注射器	BD	309646
16 G 针头	BD	305197
22 G 针头	BD	305155
毛发剪刀	Wahl	41870-0438
泡沫保温箱	Mr. Box Online	10 x 10 x 4
乙酰丙嗪（Acepromazine）	Henry Schein	003845
布托啡诺（Buprenorphine）	Par	42023-179-05
美洛昔康（Meloxicam）	Henry Schein	049755
酒精棉片	Covidien	5033
氯胺酮（Ketamine）	Henry Schein	056344
赛拉嗪（Xylazine）	Akorn	59399-110-20
戊巴比妥钠（Fatal-Plus）	Vortech	9373
无菌培养皿	Thermo Fisher	172931
DMEM 培养基	Gibco	11965092
生理盐水	Baxter	2F7124
15 号刀片	Steris	02-050-015
手术刀柄 × 2	Steris	22-2381
弯止血钳	WPI	501288
无创镊	Sklar	52-5077
纱布	Medline	NON21430LF
11 号刀片	Steris	02-050-011
明胶海绵（Surgicel）	Ethicon	1951
3-0 PDS / 圆锥形针	Ethicon	Z305H
4-0 Vicryl / 切割针	Ethicon	J392H
40 μm 滤网	BD	352340
50 mL 离心管	Thermo Fisher	339652
塑料移液管	Thomas Scientific	HS206371B
离心机	Sorvall	75004240
1.40 mL 管（内螺纹）	Micronic	MP32131-Z20
3-F VSI Micro-HV 介入套件	Vascular Solutions	定制订单 (P15180391)
.018 45° 角导丝	Terumo	RG*GA1818SA
Direxion bern 形状微导管	Boston Scientific	M001195230
欧乃派克（Omnipaque）	GE	Y510