我们介绍了一种用于产生和扩增基因修饰的呼吸道合胞病毒(RSV)的方法,以及一种优化的RSV蚀斑检测法。我们通过构建两种重组病毒来演示该方案,这两种病毒分别可用于定量检测RSV的复制以及活体分析RSV包涵体及其相关颗粒的动态过程。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 用于活细胞成像的 35 mm & 微型培养皿 | 同比迪 | 81156 | |
| A549 | ATCC | ATCC CCL-185 | |
| Avicel RC-591 | FMC 生物聚合物 | Avicel RC-591 | 有关 Avicels 的技术和其他信息,请访问 http://www.fmcbiopolymer.com。在室温下储存。步骤 4 中的实验步骤针对该试剂进行了优化。 |
| BSRT7/5 | 未上市 | 参见参考文献 22。Buchholz et al. 1999 | |
| 结晶紫溶液 | Sigma | HT90132 | |
| 用于观察的荧光显微镜 | 奥林巴斯 | IX73 奥林巴斯显微镜 | |
| 视频显微镜的荧光显微镜 | 奥林巴斯 | ScanR 奥林巴斯显微镜 | |
| HEp-2 | ATCC | ATCC CCL-23 | |
| HEPES ≥99.5% | Sigma | H3375 | |
| L-谷氨酰胺 (200 mM) | ThermoFisher Scientific | 25030024 | |
| LIPOFECTAMINE 2000 试剂 | ThermoFisher Scientific | 11668019 | 实验方案针对该试剂进行了优化。 |
| MEM (10x),无谷氨酰胺 | ThermoFisher Scientific | 11430030 | |
| MEM,GlutaMAX 补充剂 | ThermoFisher Scientific | 41090-028 | |
| MgSO4 ReagentPlus 和 ge;99.5% | Sigma | M7506 | |
| Opti-MEM I 减血清培养基 | ThermoFisher Scientific | 51985-026 | |
| 多聚甲醛水溶液,32%,EM 级 | 电子显微镜科学 | 15714 | |
| 青霉素-链霉素 (10,000 U/mL) | ThermoFisher Scientific | 15140122 | |
| 质粒 | 未上市 | 参见参考文献 21。Rameix-Welti et al. 2014 | |
| 参见 Saw Rocker | VWR | 444-0341 | |
| si、RNA、GAPDH | Dharmacon | ON-TARGETplus siRNA D-001810-10-05 | SMARTpool 和 Dharmacon 设计的 4 个单个 siRNA 中的 3 个。 |
| Si RNA IMPDH2 | Dharmacon | ON-TARGETplus siRNA IMPDH2 Pool- Human L-004330-00-0005 | Dharmacon 设计的 4 个单独 siRNA 的 SMARTpool. 单个参考和序列 J-004330-06:GGAAAGUUGCCCAUUGUAA; J-004330-07: GCACGGCGCUUUGGUGUUC; J-004330-08: AAGGGUCAAUCCACAAAUU; J-004330-09: GGUAUGGGUUCUCUCGAUG; |
| Si RNA RSV N | Dharmacon | ON-TARGETplus 定制 siRNA | UUCAGAAGAACUAGAGGCUAU 和 UUUCAUAAAUUCACUGGGUUA |
| SiRNA NT | Dharmacon | ON-TARGETplus 非靶向池 | |
| SiRNA 转染试剂 | Dharmacon | DharmaFECT 1 参考文献:T-2001-03 | 步骤 5.1.和 5.1.2 中的方案针对该试剂进行了优化。 |
| 碳酸氢钠 7.5% 溶液 | ThermoFisher Scientific | 25080094 | |
| 荧光分光光度计 | Tecan | Tecan 无限M200PRO |
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