简易自制工具处理果蝇——Drosophila melanogaster

摘要

本文介绍了几种自制工具的使用方法，用于转移、冷却和杀死成虫 果蝇，以及清洁玻璃培养管和收集卵。这些工具易于制作，在操作中效率较高 果蝇

摘要

果蝇（Drosophila melanogaster）在生物学研究和生物学教育中被广泛应用。在实际操作中，成年果蝇的处理虽常见但较为困难，因为成年果蝇具有飞行能力。本文演示了如何制作一些简单且成本低廉的工具，以解决Drosophila操作中的难题。通过在泡沫塞上打孔，并将移液器吸头或漏斗插入孔中，可使果蝇仅单向移动进入移液器吸头/漏斗组件，从而高效控制成年Drosophila转入或转出培养瓶的过程。现有低温麻醉果蝇的方案已进行改进：将果蝇置于碎冰中冷却，随后转移至冰冷坚硬的冰袋表面。冰袋表面覆盖一层医用纱布，可在体视显微镜下观察时防止被麻醉的果蝇接触冷凝水。最后，果蝇可通过微波处理进行安乐死，以便计数和分选，或直接丢弃。此外，还开发了一种瓶状饲养笼用于收集卵，以及一种节省劳力的装置及配套方案，用于清洗玻璃培养瓶。

引言

果蝇， 黑腹果蝇， 是一种在生物研究和生物学教育中广泛使用的模式生物，用于研究多种主题^1,2处理的基本问题 果蝇 将成虫从一个样品管转移到另一个样品管，以及固定果蝇以使其更易于操作，因为所有成虫（除某些突变体外）^3,4）能够飞行。

传统上，研究人员通过将两个培养瓶口对口对接来转移果蝇，轻敲使果蝇落入或让果蝇飞入另一个培养瓶，然后分离两个培养瓶并重新塞上瓶塞⁴。显然，这种方法要求两个培养瓶的口径必须相同，且难以控制转移的果蝇数量。同时，操作需要迅速，否则逃逸的果蝇可能给实验室或课堂带来问题。Drosophila 实验中另一项常规操作是向已准备好的杂交培养瓶中添加额外的处女蝇或雄蝇。传统方法要求在添加额外果蝇之前，必须先将杂交瓶中的果蝇进行麻醉固定。

成年个体 果蝇 通常使用乙醚、CO麻醉₂，或冷处理⁵与乙醚和CO相比₂ 暴露后，冷处理是固定成虫最经济有效的方法 果蝇....

方案

1. 准备工具和配件

1. 吸头/漏斗塞
   1. 准备两个海绵塞（海绵塞的直径必须略大于用于转移果蝇的小瓶的内径）。使用加热的电烙铁在海绵塞中心打孔。
   2. 取两个1 mL移液器吸头，用锋利的刀片横向将其中一个切成两半，并丢弃尖端部分；然后从第二个移液器吸头上切下1.5 cm长的尖端部分。使用通用胶水将两个吸头的剩余部分粘合在一起，制成一个延长的移液器吸头（图1A）。
   3. 将漏斗和延长的移液器吸头插入海绵塞中，制成吸头塞和漏斗塞（下文分别简称为T-塞和F-塞），并用100 μL微量离心管盖住移液器吸头末端（图1A）。
      注意： 漏斗茎部的长度必须大于海绵塞的高度。如果其长度小于或等于海绵塞的高度，则果蝇会从茎部开口逃逸。漏斗茎末端应至少高于培养基表面或空瓶底部2 cm。优选小型漏斗（例如，圆盘直径 <60 mm），且其内部茎部开口直径较小（<5 mm）。可使用玻璃或塑料漏斗制作F-塞。然而，在生物学课程中建议使用塑料漏斗，因其比玻璃漏斗更不易破碎。
2. 显微解剖针
   1. 准备握持舒适的手动铅笔，以及与其铅芯直径相匹配的昆虫针（例如，0.5 mm、0.7 m....

结果

T型塞和F型塞是一组简单工具，可被调整并用于任何果蝇转移操作中。将果蝇从旧培养管转移到多个新鲜培养管时，需先取下新鲜管的塞子，换上F型塞；然后轻敲旧管使果蝇落入管底，迅速取下旧管的塞子并换上T型塞。如果旧培养基较为紧密，则应将旧管倒置，将T型塞的尖端插入F型塞的开口中，再轻敲使果蝇落入新鲜管内。随后，取下T型塞和F型塞，并重新为各管塞上原塞。如果旧培养基变得松散，则建议将新鲜管倒置，将F型塞与T型塞对接，让果蝇自行爬入新鲜管中。

若需向已准备好的杂交管中添加额外的果蝇，首先应轻敲杂交管使果蝇沉降至管底，并将管塞更换为F型塞子。随后，实验者需在体视显微镜下检查经冷藏麻醉的果蝇，使用尖头镊子夹住目标果蝇的翅膀，将其通过漏斗茎部滑入杂交管中。若果蝇卡在漏斗茎部，建议使用吹气球轻轻吹气，使其滑入管内。当收集到足够数量的果蝇用于杂交后，需更换F型塞子并将杂交管重新塞好。T型和F型塞子于2010年被引入实验操作¹³<.......

讨论

本文介绍了一些用于处理果蝇（Drosophila）饲养和实验基本操作的自制工具。这些工具结构简单但非常有效。几乎所有实验室都可以轻松制作这些工具，因此科研或教学实验室无需寻找可能在当地无法获得的现成替代品。

果蝇转移是最常见的操作，也是极具挑战性的任务 果蝇 实验。遗憾的是，迄今为止，尚未有文献描述过相关的转移工具^3,4,12,17 此处介绍了T型和F型塞子。这些简单的工具使果蝇转移更加便捷且易于控制，转移过程中逃逸的果蝇更少，近年来遗传学课程中几乎未发现逸出的果蝇即为此提供了证据。由于海绵塞具有弹性，因此无需试管开口具有完全相同的内径。此外，移液器吸头开口一次仅允许一只果蝇通过，因此T型塞子可防止果蝇大量涌入试管中，实验者可轻松中止操作并精确控制转移的果蝇数量。T型塞子还可防止旧培养基落入新.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
一把钳子
无线电钻			最大转速：500 rpm
电烙铁
锉刀
漏斗			圆盘直径<60 mm
冰盒
昆虫针
红外测温仪			HCIYET HT-830
长袖橡胶手套
自动铅笔
医用纱布
微量离心管			100 µl
微波炉
封口膜（Parafilm）
培养皿			内径 60 mm
移液器吸头			1 ml
塑料薄膜
塑料培养皿			Φ36 mm，用于覆盖空瓶
尖头镊子
防护工作手套
可重复冷冻的硬质冰袋			26.5×14.5×2.5 cm 或更大
橡胶吹气球
压接钳
饮料瓶			500 ml，内径约 65 mm
海绵塞
不锈钢清洁球
试管刷
小玻璃瓶			Φ34 mm × 90 mm