本文介绍了一种在田间试验中,通过多个时间点测定作物中蓟马数量及其天敌小花蝽捕食性天敌数量的实验方案。同时展示了如何评估防治蓟马措施的效果,并分析小花蝽捕食作用所带来的生态效益。
本文介绍了一种在田间试验中,通过多个时间点测定作物中蓟马数量及其天敌小花蝽捕食性天敌数量的实验方案。同时展示了如何评估防治蓟马措施的效果,并分析小花蝽捕食作用所带来的生态效益。
西花蓟马(Frankliniella occidentalis (Pergande))是一种多食性害虫,已在全球范围内传播。为控制其种群而大量使用杀虫剂的做法会消灭天敌及其他竞争性蓟马物种,反而导致其种群数量上升。由此形成不可持续的局面,伴随害虫抗药性增强、次要害虫暴发以及环境退化。综合害虫管理(IPM)利用对害虫与天敌之间关系的认识,实施环境友好且可持续的防控策略。小花蝽是全球范围内最重要的蓟马天敌,能够抑制并最终控制Frankliniella属蓟马种群。为了解捕食者与猎物之间的动态关系,需至少每周采集一次花卉样本。本文展示的是对结果类蔬菜及伴生植物的花朵进行取样,以估算各类蓟马和小花蝽种群的密度。代表性数据说明了如何利用该取样方案评估管理措施随时间推移的效果,以及如何评价小花蝽捕食作用所带来的益处。该取样方案同样可适用于其他寄主植物上蓟马和小花蝽的种群调查。
西花蓟马(Frankliniella occidentalis (Pergande))是最早因全球化和农产品国际贸易而传播至全球的主要害虫之一。其危害直接表现为取食和产卵,间接通过传播植物致病病毒造成经济损失。入侵种群已对大多数类型的杀虫剂产生广泛抗性,而使用杀虫剂控制种群的尝试反而加剧了危害,原因是杀死了重要的天敌和竞争性物种。这种防治策略破坏了害虫管理项目的稳定性,导致害虫抗药性增强、次要害虫暴发以及环境退化1。
综合害虫管理方案的制定基于对害虫与天敌之间关系的了解,以及管理措施对这些关系影响的认识。长期以来,人们认为西方花蓟马具有快速定殖和种群增长的特性,其繁殖能力超过了天敌对其种群的调控能力;然而,研究发现,来自自然界种群的Orius insidiosus(Say)的捕食作用不仅能够有效抑制西方花蓟马的种群数量,甚至可导致其种群数量下降至接近灭绝2。此外,西方花蓟马主要栖息于花朵中,会与本地多食性花蓟马竞争花粉及其他花卉资源。
在美国东部大部分地区,主要的本地竞争者是Frankliniella tritici(Fitch),而在佛罗里达州南部,主要的竞争物种则是Frankliniella bispinosa(Morgan)3。西花蓟马在佛罗里达州受到本地捕食性天敌及竞争性蓟马物种的强烈生物抗性制约;然而,在因杀虫剂及其他排除竞争性蓟马和天敌的措施而受到干扰的生境中,西花蓟马则成为优势物种。因此,针对结果类蔬菜成功实施综合害虫管理项目的核心内容之一是增强捕食作用和竞争作用3,4。这些项目的建立基于对捕食者-猎物动态关系的认识,以及各种管理措施在控制蓟马和增强生物抗性方面的有效性。本文展示了在佛罗里达州用于估算结果类蔬菜及其伴生植物花朵中各类蓟马和小花蝽物种密度的方法。这些数据可用于评估管理措施的效果,并分析小花蝽捕食作用所带来的益处。
设计花蓟马采样方案:背景信息
20世纪80年代,西花蓟马成为一种主要害虫5,因此有必要开发出准确、高效且精确的方法,以确定田间研究中不同蓟马个体数量。本文所述方法基于大量研究积累的知识,这些研究旨在了解花蓟马的生物学特性及其防治策略。相关研究实例包括Funderburk等2、Hansen等6、Salguero Navas等7、Sutherland等8以及Tyler-Julian等9的工作。Frankliniella属物种和小花蝽在花朵中的聚集程度是由其行为决定的,而非杀虫剂施用或取样方法造成的人为假象6。通常,对花朵中种群数量的估算相较于其他植物部位已足以理解寄主植物上捕食者与猎物的局部动态关系,并可用于评估基于捕食者与猎物比例的生物防治方案的效果。然而,针对花朵所建立的方法也可调整用于其他植物部位的取样。常规的取样单位为一朵或多朵花。为达到所需精确度所需的取样数量,取决于种群密度以及取样单位中花朵的数量。
Frankliniella 物种在花朵中的分布通常呈聚集状,种群数量一般集中在植株上部冠层的花朵中7。在大多数研究中,花朵样本从植株上半部分随机选取。用于从花朵中移除蓟马的相对技术,包括液体冲洗、机械震落或干燥处理,均存在不准确和不精确的问题8。因此,采用直接计数法进行绝对数量估算。蓟马是体长约 2 mm 的小型生物,通常需要借助显微镜才能准确鉴定其种类。构成样本单元的花朵被置于盛有 70% 酒精的小瓶中。样本采集完成后,各试验小区的小瓶被带回实验室,以提取蓟马和微小黑花蝽,并准确鉴定每只个体的性别、种类和发育阶段。实验通常由重复的田间小区组成,用于评估不同处理措施对抑制蓟马的效果以及微小黑花蝽捕食作用的益处。在寄主植物的开花期内,至少每周采集一次花朵样本。采用随机完全区组实验设计有助于消除区组间蓟马和微小黑花蝽密度差异对实验误差的影响。采用裂区处理安排则有助于降低管理措施对蓟马迁移所产生的小区间干扰效应9。
花卉样品处理与分析:背景信息
在20世纪90年代之前,蓟马物种的分类检索表是为分类学专家设计的,这些专家使用多种封片介质中的一种,将用于鉴定的蓟马标本置于显微镜载玻片上。研究蓟马生物学与防治的科研人员并非分类学专家,且这些研究通常没有分类学专家参与。因此,这些研究中采集的蓟马样本通常仅被归类到属、科、亚目或目等较高的分类阶元。随着西花蓟马的扩散,一方面关于蓟马生物学与防治的研究迅速增多,另一方面研究人员也逐渐认识到准确鉴定蓟马物种的重要性,并开始建立高效的样本处理体系。
在20世纪90年代中期关于蓟马种群生物学的研究中,样本中的成虫被置于显微镜载玻片上,并由分类学专家R. J. Beshear鉴定到物种水平(例如Salguero Navas等7)。由于当时缺乏可用于幼虫鉴定的检索表,幼虫仅被鉴定到属。载玻片制片方法成本高且费时费力,因此后来开发出一种更高效的系统2。在后续研究中,样本中的蓟马通过置于含有70%乙醇的培养皿中从花朵中提取,并在体视显微镜下对培养皿中的雄性和雌性个体进行物种鉴定。我们的大多数研究涉及Frankliniella属的物种。这些物种的成虫通过体视显微镜下观察其前胸背板、头部和触角背侧刚毛排列(刚毛式)的差异来区分物种10,11,12。
已获得蓟马分类学方面的额外专业知识,以识别样本中其他蓟马属和种。全球范围内存在多种重要的Orius物种,它们是蓟马的重要捕食性天敌。其中两种物种O. insidiosus和O. pumilio(Champion)在佛罗里达州大部分地区同域分布13。这两种物种的成虫可通过触角基节、后足股节以及翅上楔片的颜色特征加以区分。不同种类和性别的蓟马在生物学特性和行为上存在差异,因此通常需分别分析每种的数据。由于花朵中蓟马种群呈聚集分布模式,需对数据进行转换以稳定不同处理间的方差。根据实验设计,采用方差分析比较处理间的平均值,并对各个单独日期的数据或合并日期的数据进行分析2,9。当处理效应随日期变化而变化时,按日期分别分析结果尤为重要。在佛罗里达州的田间研究中,采用每分钟每只小花蝽(成虫和若虫)所捕获的蓟马总数(成虫和幼虫)之比,来评估小花蝽对蓟马种群生物防治的效果,其控制效果约为1只捕食者对应180只蓟马2,9。
1. 田间试验确定紫外反射地膜、高岭土和伴生植物对花蓟马及其微小花蝽捕食性天敌的影响

图1:示例性田间试验研究。
(A)采用随机完全区组设计,用于评估伴生植物、地膜覆盖和高岭土对花蓟马及小花蝽的独立与交互作用。(B)Bidens alba (L.) 作为伴生植物与番茄作物进行评估9。Helianthus annuus L. 作为伴生植物与辣椒作物进行评估14。请点击此处查看此图的放大版本。
2. 花蓟马采样方案

图 2:样品采集技术。
在番茄推拉实验的小区中采集10朵番茄花样品9。请点击此处查看此图的放大版本。
3. 实验室样品处理

图3:从花朵中提取蓟马和小花蝽。
将10朵番茄花的样品倒入培养皿中进行处理,以确定蓟马和小花蝽的数量。请点击此处查看该图的放大版本。

图4:鉴定蓟马的形态学特征示例。
(A,B,C) F. occidentalis:头部 (A),箭头指示第四对眼后刚毛;前胸背板 (B),箭头指示一对较长的前缘刚毛;触角第二节远端背侧刚毛 (C)。(D,E,F,G) F. bispinosa:头部 (D);前胸背板 (E);触角第二节远端背侧刚毛 (F,G),箭头指示粗壮的刚毛 (F),粗壮刚毛的侧面观 (G)。(H,I,J) F. tritici:头部 (H);前胸背板 (I);触角第二节远端背侧刚毛 (J)。 请点击此处查看该图的放大版本。
Tyler-Julian 等人9的研究数据可用于展示推力因素(即紫外线反射地膜和高岭土施用)与拉力因素(即伴生植物鬼针草,B. alba)对番茄花朵中西花蓟马(F. occidentalis)成虫雌雄个体种群动态的单独及联合作用(图1A)。实验中使用的农用塑料地膜处理构成了典型的佛罗里达州高价值蔬菜生产系统中常见的高垄覆膜栽培体系的垄床。紫外线反射地膜在害虫防控中的作用机制是通过视觉驱避,干扰成虫蓟马的寄主定位。在番茄植株上施用高岭土同样可反射足量的紫外线,从而驱避成虫蓟马。因此,实验采用裂裂区随机完全区组设计,以降低因地膜和高岭土处理的紫外线反射特性所导致的小区间蓟马迁飞干扰;其中地膜处理(紫外线反射地膜 vs. 常规黑色地膜)作为主区,高岭土处理(每周两次高岭土施用 vs. 无高岭土)作为副区,伴生植物处理(有伴生植物 vs. 无伴生植物)作为副副区。副副区大小为6垄×9 m,每个副副区的内部4垄各包含一行番茄,植株间距45 cm,共计每副副区80株番茄。在设有伴生植物的副副区的两个外部垄中,每垄种植两行鬼针草,行内和行间间距均为30 cm,共计每副副区128株伴生植物。
在2011年番茄作物开花期间的13个采样日期中,每个小区内的每个子小区均采集两份各含10朵番茄花的样本,并记录成年雄性和雌性个体数量 F. occidentalis 在每个样本中测定(图5)。采用混合模型,基于随机完全区组设计的裂裂区试验处理安排,对不同取样日期的数据进行方差分析,以评估覆盖物、高岭土和伴生植物对每种性别的影响(参见 Tyler-Julian 等人)。9 有关方差分析和结果的完整描述,请参见原文)。覆盖物、高岭土和伴生植物的主效应对于雄性西花蓟马均显著(p < 0.01、0.001 和 0.001,而覆盖物的交互效应 X 高岭土,覆盖物 X 伴生植物,高岭土 X 伴生植物,覆盖物 X 高岭土 X 伴生植物相互作用无显著性差异(p > 0.05)。这些结果表明,每个主效应均减少了成年雄性个体的数量 F. occidentalis,且每种策略的效果在相互组合时具有加性效应。
覆盖物的主效应在雌性中具有显著性 F. occidentalis (p < 0.01),而高岭土和伴生植物对雌虫的主效应不显著 F. occidentalis (p > 0.05)。因此,紫外反射性地膜减少了雌性 F. occidentalis 在番茄花中,但高岭土和伴生植物没有。然而,地膜 X 高岭土相互作用具有显著性(p < 0.05),表明紫外反射性地膜与高岭土的联合作用降低了雌性 F. occidentalis 单独使用任一策略的效果,而施用于黑色地膜覆盖番茄上的高岭土并未降低雌虫数量 F. occidentalis 数字。覆盖物的交互作用 X 伴生植物,高岭土 X 伴生植物和覆盖物 X 高岭土 X 雌性伴生植物相互作用 F. occidentalis 无显著性差异(p > 0.05).

图 5:样本日期数据分析示例。
2011年在美国佛罗里达州加兹登县进行的“推-拉”实验中,13个采样日期的数据合并结果显示,在不同覆盖材料(黑膜、高岭土)及伴生植物处理下,每10朵番茄花上成虫雄性和雌性F. occidentalis的平均数量(SEM)。该图改编自Tyler-Julian等人的研究9
在2011年的实验中,覆盖材料 X 取样日期对西花蓟马(F. occidentalis)成虫(雄性和雌性)的影响均达到显著水平(p 值分别为 < 0.01 和 0.001)9。这表明,紫外反射覆盖材料在部分取样日期可减少花朵蓟马数量,但在其他取样日期则无此效果。因此,进一步进行了单独取样日期的分析,以评估覆盖材料在各取样时间点的影响。交互作用分析显示,紫外反射覆盖材料在生长季早期对降低花朵蓟马数量有效,但在生长季中期或晚期的各个单独取样日期均未达到显著差异(图6)。

图6:整体区组处理中种群动态的示例。
2011年每次取样日期在佛罗里达州加兹登县开展的“推-拉”实验中,综合高岭土和伴生植物处理数据后,黑色覆盖物和紫外反射型覆盖物整体区组处理下,每10朵番茄花上成年雄性和雌性F. occidentalis的平均数量(+标准误,n = 18个样本)(*表示根据方差分析结果,单个取样日期的差异在95%显著性水平以上具有统计学意义;自由度 d.f. = 1, 2)。该图经Tyler-Julian等9修改。 请点击此处查看此图的放大版本。
高岭土的相互作用 X 2011年,采样日期对雄性和雌性均无显著性差异 F. occidentalis (p > 0.05)9如上文所示,对按采样日期合并的数据进行分析表明,高岭土并未显著影响雌性 F. occidentalis 数字,而雄性 F. occidentalis 数量显著减少。由于缺乏显著的高岭土 X 样本日期交互作用在合并样本日期的数据分析中表明,每种性别的结果在不同样本日期间具有一致性图7).

图 7:小区处理中种群动态的示例。
2011 年每次采样日期在佛罗里达州加兹登县开展的“推-拉”实验中,不同伴生植物处理合并数据下,高岭土处理与无高岭土处理小区中每 10 朵番茄花上成年雄性和雌性 F. occidentalis 的平均数量(+SEM)(n = 12 个样本)(* 表示根据方差分析结果,单个采样日期的差异在 95% 显著性水平以上具有显著性;d.f. = 1, 4)。该图改编自 Tyler-Julian 等人9。请点击此处查看此图的放大版本。
伴生植物的相互作用 X 2011年,采样日期对雄性具有显著性 F. occidentalis (p < 0.05),但女性未见显著差异 F. occidentalis (p > 0.05)9. 针对不同采样日期个体样本的分析结果表明,伴生植物可减少成虫数量 F. occidentalis 晚季采样日期的数值,但从不出现在早季或中季采样日期图8).

图8:小区嵌套小区处理中种群动态的示例。
在佛罗里达州加兹登县进行的“推-拉”实验中,2011年各采样日期下,伴生植物与无伴生植物处理的嵌套小区内,每10朵番茄花上成年雄性和雌性F. occidentalis的平均数量(+SEM)(n = 6个样本)。“*”表示根据单个采样日期的方差分析结果,差异在95%显著性水平以上具有统计学意义(d.f. = 1, 8)。本图改编自Tyler-Julian等人的研究9。请点击此处查看此图的放大版本。
Tyler-Julian 等人对伴生植物花朵进行研究时收集的数据14 可用于演示微小花蝽与其蓟马猎物在花朵中的动态关系(图1B)。与 Tyler-Julian 等人的研究相同9 本研究旨在确定推力因素(即紫外线反射性地膜和高岭土施用)与拉力因素(即伴生植物)对种群动态的单独及联合影响 Frankliniella 物种的成年雄性和雌性在作物花朵中。在Tyler-Julian等人研究中14 研究中,主要的花蓟马物种是 F. bispinosa 在伴生植物中 H. annuus 以及在辣椒作物中(>99%的总蓟马数量)。蓟马迅速定殖于向日葵和辣椒花中,且在开花初期数量迅速达到最高峰。图9)。随着小花蝽数量的增加,蓟马种群数量随时间推移而下降。捕食者与猎物的比例显示了捕食者对蓟马种群的抑制能力,在捕食者与猎物比例达到一定水平时,蓟马种群接近灭绝 >1只捕食性天敌对应40只蓟马。

图9:捕食作用效益评估示例。
2011年和2012年在美国佛罗里达州棕榈滩县开展的实验中,每朵向日葵(Helianthus annuus)花序上蓟马总数(成虫和幼虫)和Orius spp. 总数(成虫和若虫)的平均值(+标准误SEM)(括号中所示为各日期每头捕食者对应的猎物数量)。该图已根据牛津大学出版社许可,改编自Tyler-Julian等14报道的数据。
在过去三十多年的田间研究中,为佛罗里达州的农作物开发了具有理想精确度水平的花蓟马种群密度估算取样方案。相关研究旨在了解影响花蓟马种群估算的重要生物学特性。例如,已有研究探讨了取样时间16、田间内取样位置16、单株植物上的取样部位6,16、花朵内种群聚集模式7以及花朵颜色17对估算结果的影响。这些因素均被发现会影响种群数量的估算结果,因此在今后的研究中设计取样方案时,关于取样地点、时间和方法的选择至关重要。
小花蝽成虫和若虫具有很强的趋花性,且会以密度依赖的方式与猎物聚集在一起,偏好与蓟马相同种类的花朵17。它们还能利用猎物本身或被猎物取食损伤的植物所释放的线索来定位蓟马。成虫在花朵之间快速移动,这种行为有助于其在时空上追踪局部的蓟马种群18。因此,在今后的研究中,估算小花蝽种群数量时应采用已为蓟马种群监测所建立的取样方案。小花蝽是多种Frankliniella属花蓟马成虫和幼虫的有效捕食者19。捕食者数量与蓟马猎物总数之间的相对比例,是评估小花蝽抑制和控制花朵中混合蓟马种群能力的最佳指标。在今后的研究数据分析中应考虑这一因素。
Frankliniella 属成虫在寄主作物开始开花后会迅速定殖,若缺乏天敌导致的死亡率,其种群数量将迅速增长2,18,19。在对捕食者和蓟马猎物均适宜的寄主植物(如向日葵)上,蓟马数量在开花初期达到最高,随后随着小花蝽数量的增加而逐渐下降(图9)。即使蓟马几乎灭绝,小花蝽种群仍能维持存在。为了充分理解这种捕食者与猎物之间的动态关系,有必要在整个作物开花期内进行频繁取样。在评估其他类型防控措施的效果时也是如此,因为这些措施可能在某些时间点有效,而在其他时间点无效。在Tyler-Julian等人的研究中,为评估所研究的“推-拉”系统中多种防控措施的综合效应,采用了在整个开花期间每周取样一至两次的方法9,14。
Frankliniella 是蓟马科(Thripidae)中第二大属,已有大量文献描述其成虫阶段20。该类群包含多个物种,栖息于不同植物寄主种类及地理区域的花朵中。因此,对初始采样中部分标本进行玻片制备并由专家鉴定至关重要。随后,在特定植物寄主和地理区域内,可选择各物种成虫所特有的分类学特征,以便在后续研究中无需再通过繁琐且昂贵的显微玻片制备流程(即在复式显微镜下观察),即可直接在体视显微镜下进行观察与鉴定。(在某些特殊情况下,两个物种间的形态特征极为相似,无法仅凭体视显微镜加以区分。)本文所述方法适用于佛罗里达州多数农作物中常见的花蓟马物种,亦可在其他地理区域开展田间研究时加以调整和应用,特别是在处理大量样本以评估防治措施效果以及评估微小黑 pirate 虫(minute pirate bugs)捕食效益的研究中。
作者无任何利益冲突需要披露。
本研究得到了佛罗里达州农业和消费者服务部特色作物区块拨款(编号01856和024049)的支持。额外支持来自美国农业部农业研究局(USDA-ARS)与佛罗里达大学之间的合作协议(编号58-6618-2-096和58-6618-4-035)。我们感谢以往参与研究的学生、博士后及合作者,他们在多方面为理解影响花蓟马种群动态的因素做出了贡献。
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 酒精 | 任意来源 | 70% 乙醇或异丙醇 | |
| 离心管 | Fisher Scientific Co. | 06-443-18 | 平盖,带托盘 |
| 镊子 | Fisher Scientific Co. | 08-885 | 中等尖头 |
| 高岭土 | Novasource | Surround WP | 95% 高岭土 |
| 巴斯德吸管 | Fisher Scientific Co. | 13-678-6A | 5 ¾ 英寸一次性 |
| 培养皿 | Fisher Scientific Co. | FB0875711A | 带网格 |
| 探针/寻针 | Fisher Scientific Co. | 08-995 | 6 英寸弯头 |
| 手术刀 | Fisher Scientific Co. | 14-840-00 | Excel 国际型 |
| 体视显微镜 | Leica Microsystems | M 系列 | 40X 及以上 |
| 紫外反射地膜 | Intergro | 金属化 |