本方案展示了如何在猪一生的不同阶段，为其在板条地板饲养环境中提供切实有效的环境丰富化措施，以及如何以非侵入性方式采集唾液样本，用于检测皮质醇浓度，作为急性应激的生物标志物。
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摘要
摘要
由于猪肉是全球消费量最大的肉类，养猪业中动物的福利问题日益成为公众关注的主要议题，消费者、立法者及其他利益相关方施加了巨大压力，要求进行管理改进以提升这些动物的福祉。多项研究表明，为猪只提供环境丰容能够使其表达自然行为，例如觅食、探索，以及分娩前的筑巢行为，同时有助于降低应激水平，并改善生产性能和福利状况。然而，在提供环境丰容时需考虑多种因素，包括地面类型、排水与排污系统、猪只的生命阶段、丰容材料的种类，以及其悬挂方式、高度和在栏舍内的位置。本文的目标是：（1）提供方法学信息，介绍如何在不同生命阶段、饲养于漏缝地板上的猪只栏舍中，实施相对简单且具有实际意义的环境丰容措施；（2）演示如何采集唾液样本以测定皮质醇浓度，作为急性应激的生物标志物。本方案包含在分娩哺乳舍、断奶猪和育肥猪栏中使用黄麻绳、棉绳、支架中的稻草以及可咀嚼硅胶棒装置作为环境丰容的具体操作说明。此外，还详细描述了利用棉绳进行非侵入性唾液样本采集以分析皮质醇浓度的方法。所提供的操作规程适用于致力于在科研及工业化养猪生产中改善和监测动物福利的专业人员。
引言
猪肉是全球消费量最大的肉类，每年饲养和屠宰的猪超过13亿头1,2。近年来，养猪业中动物福利问题日益成为公众关注的焦点，消费者、立法者及其他利益相关方施加了巨大压力，要求进行管理改进，以提升这些动物的福利水平。多项研究表明，为猪提供环境丰容可降低其应激水平，并改善生产性能和福利状况，因为这使猪能够表达其自然行为，例如觅食、探索，以及在分娩前筑巢3,4,5,6,7。
猪被认为是聪明的动物，具有很强的好奇心；因此，如果未能提供适宜的环境，猪可能会表现出刻板行为，并对同栏同伴表现出操纵性的社会行为，从而导致咬尾以及其他伤害和应激8,9。因此，专业人士建议提供有意义的环境丰富化措施，某些国家甚至通过法规强制实施，例如欧盟理事会指令2008/120/EC5。
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方案
本研究方案已获得以色列耶路撒冷希伯来大学机构动物护理与使用委员会（MD-16-14754-2）的伦理批准。研究于2017年在以色列拉哈夫动物研究所和耶路撒冷希伯来大学进行。
1. 分娩和哺乳期间的环境丰容方案
注意：本研究中，母猪被饲养在分娩/哺乳栏内，在预期分娩日期前3至5天至分娩后10天期间受到短暂限制；此后移除限制栏杆，以允许母猪自由活动并与仔猪互动（如图1A所示）。然而，以下方案同样适用于传统的分娩笼，即在整个哺乳期间对母猪进行持续限制。
- 在母猪转入分娩栏之前，将 enrichment materials（黄麻和棉绳）悬挂在栏内，以允许母猪在分娩前表现出类似筑巢的行为。
- 针对每个分娩栏/限位栏，准备两段黄麻材料（宽20 cm，长1 m），以及两段100%天然、未染色的棉绳（直径2–3 cm），每段长约1 m。
- 如图1所示，使用双半结将黄麻和棉绳系在栏位的栏杆上，从绳子中点打结，使每段绳子的两端自由垂向地面。黄麻和棉绳的结应略低于母猪肩部高度，其自由端则略高于地面（图1B-C）。
- 母猪通常....
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结果
在本研究中，16窝仔猪（共170头）被随机分配至两个处理组；其中一组为8窝提供环境丰富化措施的仔猪（“丰富化组”，详见方案第1-3节），另一组为8窝未提供环境丰富化措施的仔猪（“非丰富化组”）。断奶后，每两窝仔猪合并为一组，每组约20头猪。按照方案第4节所述方法，每两周在每个栏位采集唾液样本，并分析皮质醇浓度。
本研究中，在提供适当条件的情况下，母猪、仔猪和育肥猪均对所有丰容装置表现出兴趣。母猪在分娩前即开始使用麻绳和棉绳。在哺乳期间，当麻绳和棉绳可同时被母猪及其仔猪接触到时，仔猪从2-3日龄起便模仿母猪的行为；然而，当母猪无法接触到材料时，仔猪通常在超过一周龄后才开始使用这些材料。在哺乳舍和保育舍中，麻绳和棉绳通常每4-5天更换或补充一次，而可咀嚼的硅胶棒仅在猪只于70日龄从保育舍转移至育肥舍时更换一次。在育肥舍中，未记录到任何排水或污水堵塞情况。
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讨论
本文介绍了针对饲养在漏缝地板上的猪只提供简单且实用的环境丰富化措施的操作方案。 在生命的不同阶段，以及如何非侵入性地采集唾液样本以测定皮质醇浓度，作为急性应激的生物标志物。稻草作为垫料被认为是猪最适宜的环境丰富化材料之一，但在漏缝地板上可能不实用。然而，一些相对廉价的替代品，如黄麻、棉绳、置于架子中的稻草和可咀嚼装置，均可实际且安全地应用。
本研究中唾液皮质醇浓度的范围与以往发表的结果具有可比性17,22,23。丰富化饲养与非丰富化饲养动物之间唾液皮质醇浓度存在显著差异，这一结果支持了如下假设：环境丰富化可能在特定时间点降低猪的急性应激反应，正如先前研究所示，至少在一定年龄范围内，只要昼夜节律未因长期慢性应激而受损24,25。如前所述，皮质醇可在血液、尿液和唾液中检测，作.......
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披露
作者无任何利益冲突需要披露。
致谢
感谢Lahav CRO在其农场开展本研究，以及农场团队在整个研究过程中提供的宝贵技术支持。本研究由以色列农业与农村发展部首席科学家基金资助。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| Bite-Rite | Ikadan System USA Inc. | 建议订购额外的可更换硅胶棒 | |
| ELISA；唾液皮质醇检测试剂盒 | DRG International Inc. 新泽西州，美国 | Slv2930 | |
| HALM 60/80 CM | W. Domino A/S，丹麦 | 49084/85 | |
| TEGO 猪口腔液采集试剂盒 | ITL BioMedical，美国 | A100930 | 包含唾液采样方案所需的所有物品 |
参考文献
- McGlone, J. J. The Future of Pork Production in the World: Towards Sustainable, Welfare-Positive Systems. Animals (Basel. 3, 401-415 (2013).
- Kuberka, L., Cozzens, T., Mezoughem, C.
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