阿斯蒂亚纳克斯墨西哥最大育种和产卵的增量温度变化

Summary

本文概述了增加温度机制的基本实验室条件和协议，以刺激墨西哥四 阿斯蒂亚纳克斯墨西哥最大的产卵，这是一个新兴的模式，发展和进化研究。

Abstract

墨西哥四重奏， 墨西哥阿斯蒂安娜克斯，是一个新兴的模型系统，用于研究发展和进化。该物种中存在眼表（表面鱼）和盲洞（洞穴鱼）形态，为探讨形态和行为进化背后的机制提供了机会。洞穴鱼已经进化出新的建设性和倒退性特征。建设性的变化包括味蕾和下颚、横向线感官器官和身体脂肪的增加。递减变化包括眼睛的丧失或减少。黑色素色素沉着，学校行为，侵略和睡眠。为了对这些变化进行实验性审讯，获得大量产卵胚胎至关重要。自20世纪90年代在德克萨斯和墨西哥采集了最初的 A.墨西哥 表面鱼类和洞穴鱼以来，它们的后代经常受到刺激，在杰弗瑞实验室两个月繁殖和产卵大量胚胎。虽然繁殖受食物丰度和质量、光暗周期和温度的控制，但我们发现增量温度变化在刺激最大产卵方面起着关键作用。在繁殖周的头三天，温度从72°F逐渐升高到78°F，这为连续两三个产卵日提供了数量最大的优质胚胎，随后在产卵周的最后三天，温度从78°F逐渐降至72°F。本视频中显示的程序概述了实验室育种周之前和期间的工作流程，以增加温度刺激产卵。

Introduction

电传阿斯蒂亚纳克斯墨西哥有一个眼睛表面居住（表面鱼）的形式和许多不同的盲洞居住（洞穴鱼）形成^1，2。洞穴鱼在永久的黑暗和食物的限制下进化，导致新颖的建设性和倒退性状^{的出现3。}建设性特征包括味蕾和下颚尺寸的增加、横向线的感官器官和脂肪储备。递减特征包括黑色素色素沉着、眼睛和行为（如睡眠、教育和攻击）的丧失或减少。Astyanax系统的一个属性是两种形式之间的完全生育能力，允许使用定量特征 （QTL） 映射来确定与建设性和倒退进化相关的基因组区域 4、5、6、7 。A. 墨西哥人为研究开发提供了一个有利的系统，因为它可以诱导在实验室中频繁产卵。A.墨西哥人的胚胎是半透明的，比斑马鱼的胚胎稍大，大量产生，并在大约8-12个月内发育成性成熟的成年人。他们最大的产卵能力期约为5年。该协议描述了典型的繁殖周期间A. mexicanus养殖设施所需的工作流程，并包括鱼类系统维护的细节和最大产卵的温度控制制度。

Protocol

这一程序已得到马里兰大学学院公园机构动物护理指南的批准（目前IACUC 469#R-NOV-18-59;项目1241065-1）。

图1。育种周和非育种周的日历。请单击此处查看此图的较大版本。

1. 星期一

1. 上午9时至10时，进行水测试，步骤1.1.1-4如下。
   1. 使用温度计记录房间、储罐和储层温度。
   2. 用彩色测试套件记录氨、硝酸盐和硝酸盐水平。
   3. 从监控系统以及色度测试套件记录 pH。
   4. 记录车童监视器和主系统监视器的导电性。
2. 从上午10点开始，喂所有鱼。
   1. 用四片片在成人系统中喂养所有鱼类，用幼鱼粉碎鱼缸中的薄片。饲料....

Results

我们通常繁殖和产卵最初收集在圣路易斯波托西的里约乔伊的地表鱼的后代， 墨西哥（里奥乔伊表面鱼）和圣所罗门泉在巴尔莫希亚州立公园，得克萨斯州（得克萨斯州表面鱼）和洞穴鱼从奎瓦德帕坎（帕琼洞穴鱼）在塔毛利帕斯，墨西哥，奎瓦德洛斯萨比诺斯（洛斯萨比诺斯洞穴鱼）和索塔诺德拉蒂纳哈（蒂娜哈洞穴鱼）在圣路易斯波托西墨西哥。

在整个育种周中，收集各种储罐的数据。每个罐中产卵的胚胎在数量和质量上都受到观察。数量记录为高、中或低。如果掉落的胚胎数量超过500个，记录一定数量的高量:如果掉落的胚胎数量在200-500个之间，则记录一定数量的中等量:如果掉落的胚胎数量少于200个，则记录一定数量的中等量。质量同样记录为高、中或低。如果碗中超过 75% 的胚胎是活的，则记录高质量:如果碗中约 25% 到 75% 的胚胎是活的，则记录中等质量:如果碗中只有不到 25% 的胚胎存活，则记录低质量。然后，这些数量和质量指示被分配一个数字，高是 3，中等是 2，低是 1。如果产卵中没有胚胎或没有活胚胎，则分配若干 0。

图2017年7月至2020年3月，里奥.......

Discussion

阿斯蒂安娜克斯墨西哥是一种新的生物模型，经常产卵，可以很容易地在实验室^1，2繁殖。由于我们对A.墨西哥洞穴鱼进化变化的基础发展机制感兴趣，因此胚胎的产生和使用对于我们的研究目标至关重要。维持成年鱼类种群的主要目的是生产胚胎和幼鱼苗，用于发育实验和补充成人繁殖种群。有时，成人也可用于生理学、行为学或基因实验。基因实验需要配对交配或体外受精^18。对于体外受精动物表现出产卵行为¹⁹可以从水箱中取出，并用于在温度诱导繁殖过程中的交叉。

为了最大限度地提高用于研究的胚胎的质量和数量，在育种周之前需要注意一些操作细节。在水箱中操纵鱼时，只使用指定的手持网，每次使用时将鱼浸泡在网中溶液中，并在两种用途之间用热水冲洗，以防止鱼缸之间的污染。小心清洗和消毒所有用于照顾鱼的仪器。在水箱中更换育种网之前，先取出并清洁系统水中的育种网。周末，所有养殖网都放在鱼.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Blackworms	Eastern Aquatics，宾夕法尼亚州兰开斯特	无
繁殖网	定制的
盐水虾蛋	伊利诺伊州 AquaCave Lake Forest。	无
比色检测试剂盒	Petco	SKU：11916	API 淡水 pH 值检测试剂盒
黄片	明尼苏达州明尼阿波利斯市滨特尔	无
指碗	卡罗来纳州生物供应	741004	培养皿，4.5 英寸，250 毫升
手持式蚊帐	任何宠物店
胚胎培养箱	Fisher Scientific	51-029-321HPM	405 L
速溶海洋海盐	Spectrum Brands，弗吉尼亚州布莱克斯堡	无
亚甲蓝	Sigma-Aldrich，密苏里州圣路易	M9140
巴斯德移液器	Fisher Scientific	13-678-20	5.75 英寸。
网浸泡解决方案	Any Pet Store
Nutrafin Cycle	亚马逊	无	细菌促进
用于活饲料的冰箱	任何来源
立体显微镜	任何来源
温度计	任何来源
Tetra Tropical Crisps	Spectrum Brands， Blacksburg， VA	无