高台可固定大鼠，且在进行针刺操作时无限制地完全暴露背部穴位。本文介绍了高台的制作方法，建立大鼠哮喘模型，并采用无创实时全身体积描记（WBP）系统检测呼吸功能的变化。
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摘要
摘要
高台可固定大鼠而不加束缚，并在针刺操作过程中完全暴露背部的穴位。本文介绍了高台的制作方法，建立大鼠哮喘模型，并采用无创实时全身体积描记（WBP）系统检测呼吸功能的变化。
引言
哮喘是一种以支气管收缩和气道高反应性为特征的慢性疾病1。全球约有3.394亿人被诊断患有哮喘2。哮喘的患病率在全球范围内呈上升趋势，预计在未来十年内将新增1亿例病例3。吸入性糖皮质激素和长效β2-受体激动剂并不能有效控制所有患者的症状4。因此，针灸等替代疗法在治疗哮喘方面的应用正受到越来越多的关注5。一种治疗哮喘的有效方法是针刺督脉的GV14（大椎穴）以及双侧膀胱经的BL12（风门穴）和BL13（肺俞穴）6。针灸可显著降低过敏性哮喘患者唾液和鼻腔分泌物中分泌型免疫球蛋白A（SIgA）的水平，减少外周血嗜酸性粒细胞计数，总有效率达85%6。在慢性哮喘小鼠模型中，针刺BL13和ST36（足三里）可使IL-17水平较卵清蛋白（OVA）模型组降低40%，平滑肌厚度减少33%，从而缓解炎症症状7,8。然而，针灸治疗哮喘的作用机制尚未完全明确。
动物模型是哮喘研究的重要工具9
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方案
所有动物实验均经上海中医药大学动物实验伦理委员会审查和批准（伦理批件号 PZSHUTCM190308020）。
1. 高平台的制备
- 将支撑装置的长度和宽度设置为 86 cm × 17 cm（图 1）。
- 将连接装置垂直固定在支撑装置上。连接装置长度约为 30 cm，以防止大鼠跑至高平台的顶部表面，宽度为 14 cm。
- 将水平踏板（5 cm × 5 cm）固定在连接装置上。水平踏板底部的悬挂高度应大于或等于 50 cm。
注意：根据实验大鼠的数量，可使用多个水平踏板，每块踏板上放置一只大鼠。
2. 建立大鼠哮喘模型
- 用OVA致敏大鼠
- 在第0天配制致敏溶液。每1 mL致敏溶液含1 mg OVA和10 mg氢氧化铝，以生理盐水作为溶剂。
- 在第0天，对每只大鼠腹腔注射1 mL致敏溶液。使用合适的注射器抽取致敏溶液以备后续使用。
- 抓住大鼠尾巴并将其提起，放置于粗糙表面上，轻柔地向后拉尾巴。用左手拇指和食指捏住双耳及颈部皮肤，其余三指和手掌紧握背部皮肤（注意避免用力过大导致大鼠窒息）。
- 用右手持已准备好的注....
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结果
针刺大椎穴（GV14）、双侧风门穴（BL12）和双侧肺俞穴（BL13）时，大鼠保持俯卧位。由于一侧被木板阻挡，大鼠只能将头部向外侧扭转，无法向内侧转动（图5）。
随着甲胆碱浓度的增加，Penh 呈现上升趋势，且增长速率逐渐加快。在浓度分别为 3.125 mg/mL、6.25 mg/mL、12.5 mg/mL、25 mg/mL 和 50 mg/mL 时，Penh 分别增加了 18.40% ± 10.70%、27.55% ± 26.30%、88.10% ± 45.63%、427.60% ± 172.92% 和 882.27% ± 121.97%，显示出随剂量增加而增强的效应（图6）。
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讨论
本研究中使用的背部穴位GV14、双侧BL12和双侧BL13，因此使用高台固定大鼠较为合适。在其他研究中，应根据穴位的位置选择适当的固定方法15。对于腹部穴位，可将大鼠头朝下置于黑色锥形容器中（类似于烘焙师使用的裱花袋）17。该限制用锥形容器上附有链条用于固定，同时固定大鼠的后肢。这样可使动物身体前部牢固地固定在锥形容器内，同时暴露腹部和背部。对于腿部穴位，可将大鼠垂直放置于特制的透明桶内，使尾巴和后肢自然留在桶外18。透明桶覆盖大鼠身体，但便于对腿部进行针刺操作。
进行这些方法时应考虑几个关键步骤。在针灸治疗前，应提前数天将大鼠放置于高台上进行适应性训练，直至大鼠在高台上保持安静并呼吸平稳。进行针灸操作时，右手掌用力按压大鼠背部的力度越大，越容易进针。在呼吸功能测量方面，全身体积描记（WBP）系统通过无创方式测量气道阻力指数（Penh）的变化，以反映大鼠肺阻力的改变，同时最大限度地减少心理应激的影响19<.......
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披露
作者无任何利益冲突需要披露。
致谢
本工作得到国家自然科学基金（编号：81922076、81973951、81873373）和上海市协同创新建设项目（编号：ZYJKFW201811010、ZYJKFW201701005）的支持。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 0.3 mm x 13.0 mm 针灸针 | 中国苏州医疗器械厂 | ||
| Al(OH)3 | 美国 Thermo | 77161 | |
| 压缩式雾化器 | 江苏鲁迪电子科技有限公司 | NB-212C | |
| Fine Pointe V2.0 | 美国 Buxco | ||
| 实验室气体干燥装置 | 美国 Drierite | 26800 | |
| 乙酰甲胆碱 | 美国 Sigma | MKCF6054 | |
| 卵清蛋白 | 美国 Sigma | A5503-25G | |
| 磷酸盐缓冲液 (1x) | Gelifesciences | SH30256.01 | |
| 密封箱 | 日本 IRIS 公司 | ||
| 全身体积描记呼吸功能测量系统 | 美国 Buxco |
参考文献
- Papi, A., Brightling, C., Pedersen, S. E., Reddel, H. K. Asthma. Lancet. 391 (10122), 783-800 (2018).
- Global Initiative for Asthma, 2019. Global strategy for asthma management and prevention. , Available from: https://ginasthma.org/gina-reports/ (2019).
- Enilari, O., Sinha, S.
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重印与许可
