本方案介绍了用于细胞外囊泡（EV）尺寸、EV 数量、EV 表型及 EV 生物标志物共定位的多层级和综合性测量的单颗粒干涉反射成像技术。
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本文内容
摘要
摘要
细胞外囊泡（EVs）是一类由大多数细胞分泌的、具有脂质双层结构的纳米级囊泡。EVs 携带多种不同的生物分子，包括蛋白质、脂质、DNA 和 RNA，被认为可在多种组织和器官中介导细胞间的通讯。近年来，EVs 作为疾病诊断的生物标志物以及多种疾病的治疗载体，受到了广泛关注。目前已有多种用于 EVs 表征的方法，但现有的 EVs 分析技术均存在各自的局限性。因此，随着这一前沿研究领域的不断发展，开发高效且可靠的 EVs 分离与表征方法仍是其中的关键步骤之一。本文提供了一种详细的实验方案，介绍单颗粒干涉反射成像传感器技术（SP-IRIS），该方法可用于直接检测未经纯化的生物样本或经其他方法纯化后的 EVs，并对其进行表征。这一先进技术可实现对 EVs 尺寸、EVs 数量、EVs 表型及生物标志物共定位等多层面、全面的分析测量。
引言
细胞外囊泡（EVs）是源于细胞的纳米级膜性囊泡，可从多种生物体液中分离获得，包括血液、乳汁、唾液、尿液、胆汁、胰液以及脑脊液和腹腔液。EVs 的产生源于 通过 三种主要机制：凋亡、释放 通过 多泡体与细胞膜的融合，以及细胞膜的出芽1有证据表明，细胞外囊泡（EV）可将供体细胞的组分转移至邻近或远端的细胞与组织，提示这些由膜包被的颗粒可能在旁分泌以及远距离或内分泌信号级联反应中发挥重要作用1,2,3由于细胞外囊泡（EVs）能够反映细胞表型的快照，其作为多种疾病诊断和治疗工具的潜力已成为当前研究的热点领域。4,5,6,7,8.
目前已开发出多种用于EV表征的方法9,10,11,12,13。这些方法大多可提供有关EV群体的独特且有价值的信息，主要针对的是整体样本。尽管其中部分技术能够提供关于单个EV内部或表面物质的详细信息，但在单个EV水平上进行表征仍存在局限性。例如，免疫电子显微镜可用于研究单个EV及其组成，但该技术通量较低，难以用于描述群体动态，且需要大量的方法学开发14。
近年来，单粒子干涉反射成像传感器（SP-IRIS）技术的开发与商业化， 通过 ExoView 平台通过一种常规且简单的自动化数据采集方法，实现了单个细胞外囊泡的表征。该技术的核心是芯片，一种尺寸为 1 cm x 1 cm 的 Si/SiO₂2 双层结构，可实现单个生物纳米颗粒的干涉测量。芯片上设有微阵列，包含多个独立的功能化抗体点，能够同时检测多达六种不同的捕获类型。标准芯片包含常见的四跨膜蛋白标记物（CD81、CD63 和 CD9），用于孵育步骤中的捕获；用户还可添加额外的定制捕获点，以分离出不同于四跨膜蛋白标记物的特定EV亚群。孵育步骤完成后，每个捕获点均结合了大量表达相应标记物的EV。这些被捕获的EV可经简单洗涤、干燥后，在读数仪中进行扫描，定量分析结合在捕获点上的囊泡尺寸（50–200 nm），获得基于数量加权的粒径分布数据 通过 SP-IRIS15该系统还提供三个荧光检测通道，用于对捕获的细胞外囊泡（EVs）进行免疫标记，并可同时提供每个荧光染料的平均荧光强度（该参数不受EV尺寸限制，不同于SP-IRIS测量）以及共定位信息。这使得用户能够根据单个EV上四种不同生物标志物（捕获抗体加三种免疫荧光标记）的表达情况，定义EV亚群。该系统不仅限于通过免疫荧光检测表面蛋白，其可选的载荷检测方案还可使用户检测捕获EV内部的蛋白质以及跨膜表面标志物的腔内表位，同时评估EV膜的完整性。本文提供了一套详细的操作流程，阐述了在大量EV样本中获取单个EV水平下EV大小、数量及最多四种不同生物标志物一致数据所需的步骤。该技术可应用于未经处理的生物液体，也可用于通过多种方法（如超速离心、超滤、沉淀试剂、免疫亲和捕获、微流控技术及尺寸排阻色谱）分离得到的EV样本。
以下方案采用既定的分离方法16，从HEK 293细胞培养基和小鼠血清中提取细胞外囊泡（EV）。该方案已成功应用于多种其他生物体液、细胞培养基，以及从生物体液中分离纯化的细胞外囊泡。本方案分为两天完成，典型实验的工作流程如图1所示。
图1：检测工作流程。 用于选择样本分析类型的检测工作流程，包括尺寸与计数、尺寸计数与表面染色，以及尺寸计数与内容物染色。 请点击此处查看该图的放大版本。
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方案
根据堪萨斯大学医学中心（KUMC）机构动物护理和使用委员会（IACUC）批准的方案，采集了小鼠的血清样本。在这些实验中使用这些生物样本也已获得KUMC的批准。
1. 样品制备（第1天）
- 使用纳米颗粒追踪法或等效技术测定EV浓度。
- 用孵育溶液将样品稀释至浓度为 5 × 107–5 × 108 个EVs/mL；所需样品体积至少为50 µL。
注意：对于EV浓度未知的样品，可使用总蛋白浓度1 µg/mL作为替代指标。若样品预期浓度较低，上样前应至少以孵育溶液进行1:1稀释。 - 将24孔板置于平坦、无振动且避免剧烈移动的表面上。
注意：为增强对比度，可在板下方放置一张白纸。 - 向孔周围区域加入水（图2）。
图2：24孔板布局。图中显示了ddH2O分装位置（仅为了可视化目的添加了蓝色染料）以及芯片所放置的孔位。请点击此处查看该图的放大版本。
2. 芯片的准备与预扫描
- 从 4–8 °C 冰箱中取出含有芯片的密封 48 孔板，在打开密封前使其升至室温（约 15 分钟）。
注意：此步骤至关重要，可避免芯片表面产生冷凝水，从而防止斑点受损。若打开包装后发现芯片表面有冷凝现象，应延长平衡时间，再取出其他芯片。 - 继续执行步骤 8，取出卡盘以准备进行预扫描运行（图 3）。
注意：预扫描数据将用于识别在与样本孵育前即可在捕获斑点上检测到的任何颗粒，以便在分析步骤中将其排除。
图3：用于将芯片装入仪器的夹具图像。请点击此处查看此图的放大版本。
- 使用镊子从48孔板中取出所需数量的芯片（每个样本使用一片芯片），并将芯片直接装入载物台进行预扫描运行。当所有计划用于实验的芯片均按步骤8所述完成装载和预扫描后，进入步骤2.4。
注意：操作芯片时，切勿触碰芯片中央的方格区域，因为抗体捕获位点位于此区域，若被镊子触碰会造成损伤（图4）。
图 4：芯片及正确的芯片操作方法。（A）黄色虚线表示点样抗体的位置，即芯片的功能面。芯片编号位于该线下方（“58”）。图中还展示了正确的操作方式。（B）展示不恰当的芯片操作方式。（C）芯片的非功能面。请点击此处查看该图的放大版本。
- 将每块预先扫描的芯片功能化表面朝上放入预先准备好的24孔板中。功能化表面可通过明显的编号、对齐网格以及中间的三个黑色方框轻松识别。非功能化表面为平整的银色均匀表面。
- 使用尖头镊子确保每块芯片位于孔的中央（图5）。
注意：将芯片置于孔中央至关重要，因为如果芯片接触孔壁，加样后样品可能被虹吸移除。
图5：芯片在孔中正确放置的示意图。（A）芯片应置于孔的中央，四个角均不得接触孔壁。（B）芯片放置不当的示意图，其中芯片的角接触到了孔壁。请点击此处查看该图的放大版本。
3. 芯片与样本的加载及孵育
- 用移液器将35 µL已制备的样品（来自步骤1）加入芯片上。
注意：务必小心避免产生气泡或用移液器枪头接触芯片表面，因为这可能导致样品在芯片上分布不均，或损坏芯片上的抗体点。样品应均匀覆盖整个芯片表面。若在加样过程中样品发生沿芯片边缘爬液现象，可向孔中补加样品至总体积达250 µL，或补加孵育液至250 µL，并记录该样品稀释倍数的变化。 - 使用试剂盒中提供的板膜密封板，以防止样品蒸发。
- 将样品/芯片在室温、无振动或移动的环境中，于密封板中孵育过夜（约16小时）。
注意：过夜孵育后，用户应根据研究问题选择适当的第二天操作方案。若仅需获取EV的粒径和数量信息，请继续进行步骤4（第二天）；若需进行多种表面标志物分析，则跳至步骤5（第二天）。
4. 确定细胞外囊泡（EV）的大小和数量（第2天）
- 沿含有芯片的每个孔壁加入1 mL溶液A，注意不要将溶液直接加在芯片上，也不要让移液器吸头刮伤芯片。
- 将培养板置于室温下以约500 rpm转速旋转的轨道摇床上，振荡3分钟。
注意：如果芯片在培养板中发出碰撞声，应立即降低转速，使液体呈漩涡状但无碰撞声。 - 移除 750 µL 液体。移除液体时避免倾斜培养板，以防芯片意外干燥。
- 添加 750 µL 使用4.1步骤中所述技术加入溶液B，并在室温下以约500 rpm振荡3分钟。
- 重复步骤 4.3–4.4 两次，共用溶液 B 洗涤三次。
- 最后一次洗涤结束时，移除 750 µL 溶液，留下 250 µL 在孔中加入溶液B。
- 添加 750 µL 双蒸水（ddH2O）并在室温下以约500 rpm振荡3分钟。
- 用 50 mL 去离子水填充一个 10 cm 的培养皿2用镊子将芯片逐个从孔中转移至培养皿中。
注意：转移芯片时需保持水平，避免干燥。在更换 ddH₂O 之前，最多可同时清洗八个芯片。2O. - 在 ddH₂O 中2用镊子夹住芯片边缘，在培养皿中旋转三圈以去除碎片。
- 移除芯片 45° 从水中倾斜取出芯片，并将芯片放置在吸水纸上，确保芯片 ID 朝上（图6).
注意：芯片现已准备就绪，可进行读取。请跳至第8步，使用SP-IRIS读取仪进行扫描。
图6：以45°角从ddH2O水中取出芯片的正确方法。（A）俯视图，（B）侧视图，展示取出芯片时应保持的角度。请点击此处查看该图的放大版本。
5. 抗体溶液的制备（第2天）
- 将封闭液 300 µL 加入适当大小的离心管（0.5 至 3 mL）中，每张芯片对应一管。
- 每 300 µL 封闭液中加入 0.6 µL 抗体。通过轻弹管壁混匀，并短暂离心。
注意：适用于人 CD9、CD81 和 CD63 或小鼠 CD9、CD81 和 CD63 的抗体已包含在相应的试剂盒中。若需使用其他荧光标记抗体，应采用典型梯度稀释法（浓度范围为 0.1 至 10 µg/mL），在样品加样量恒定的条件下确定最佳染色浓度，方法与流式细胞术相同。
6. 通过免疫荧光染色测定细胞外囊泡的大小、数量及表型
- 在含有芯片的每个孔的侧壁加入1 mL溶液A，注意不要将溶液直接加在芯片上，也不要让移液枪头刮伤芯片。
- 将培养板置于摇床中，室温下以约500 rpm的速度振荡3分钟。
注意：如果芯片在板上发出咔嗒声，应立即降低速度，使液体呈漩涡状但无咔嗒声。 - 移除 750 µL 液体的去除过程中避免倾斜芯片板，以防芯片意外干燥。
- 添加 750 µL 使用6.1步骤中所述技术取溶液A，于室温下以约500 rpm振荡3分钟。
- 重复步骤 6.3 和 6.4，共用溶液 A 洗涤三次。
- 最后一次洗涤结束时，移除 750 µL 溶液，留下 250 µL 在孔中加入溶液A。
注意：如果用户需要进行货物染色，则在此处继续执行步骤7；否则，继续执行步骤6.7。 - 添加 250 µL 将抗体溶液（步骤5）加入每个孔中的芯片上。用铝箔覆盖板子以避光，并在室温下于摇床上孵育1小时。
- 添加 500 µL 溶液A的总体积约为每孔~1,000 µL.
- 立即移除 750 µL 并添加 750 µL 加入溶液A，于室温下在摇床中以约500 rpm振荡3分钟。
- 移除 750 µL 溶液的量并加入 750 µL 加入溶液B，于室温下以约500 rpm振荡3分钟。
- 重复步骤6.10两次，共计洗涤三次。
- 添加 750 µL 双蒸水（ddH2O）并在室温下以约500 rpm振荡3分钟。
- 用 50 mL 去离子水填充一个 10 cm 的培养皿2用镊子从孔中取出一个芯片并转移至培养皿中。
注意：转移芯片时需保持水平，避免干燥。最多可在更换为新鲜 ddH₂O 前同时清洗八片芯片。2O. - 在 ddH₂O 中2用镊子夹住芯片边缘，在培养皿中旋转三圈以去除碎片。
- 移除芯片 45° 从水中倾斜取出芯片，并将芯片放置在吸水纸上，确保芯片ID朝上（图6).
注意：芯片现已准备就绪，可进行读取。请跳至第8步（数据收集），查看如何在读取仪上设置芯片以进行扫描的说明。
7. 可选的货物染色
注意：本方案可同时标记内部和表面标志物。
- 每个孔中保留 250 µL 溶液 A，再向每个孔中加入 250 µL 溶液 C。
- 立即置于轨道摇床上，设定转速约为 200 rpm，精确振荡 10 分钟。
注意：此步骤及下文步骤 7.8 中，时间和较低的摇动速度均至关重要；确保转速仅使孔内液体缓慢旋转，并使用计时器准确计时。 - 与溶液 C 孵育 10 分钟后，向每个孔中加入 500 µL 溶液 A。
- 立即移除 750 µL 液体，再向每个孔中加入 750 µL 溶液 A，并在轨道摇床上以约 500 rpm 的速度于室温下振荡 3 分钟。
- 重复步骤 7.4 两次，共完成三次洗涤。
- 最后一次洗涤结束后，移除 750 µL 溶液，每个孔中保留约 250 µL 溶液与芯片一同留存。
- 向每个孔中加入 250 µL 溶液 D。
- 立即置于设定为约 200 rpm 的轨道摇床上，精确振荡 10 分钟。
- 与溶液 C 孵育 10 分钟后，向每个孔中加入 500 µL 溶液 A。
- 立即移除 750 µL 液体，再向每个孔中加入 750 µL 溶液 A，并在轨道摇床上以约 500 rpm 的速度于室温下振荡 3 分钟。
- 重复步骤 7.10 两次，共完成三次洗涤。
- 最后一次洗涤后移除 750 µL 溶液，然后返回上文步骤 6.7 进行染色并完成检测流程。
8. 数据采集
注意：使用 ExoView R100 从芯片采集数据的过程是自动化的，无需用户输入。有关加载芯片载体（即“chuck”）及数据采集的详细操作说明，请参见用户指南及其对应的视频教程17。
- 使用仪器背面的两个电源开关打开EV表征平台电源，然后通过双击桌面图标启动扫描软件。
注意：当扫描软件启动时，读取器将自动进入主界面，并提示用户“打开门以加载芯片”。 - 通过抬起读取器前面的银色把手打开门。这将弹出载物台，使用户能够接触到卡盘，并在软件中设置新的扫描任务。
- 通过点击保存文件夹并选择一个目标位置，确定用户希望保存数据的位置。
注意：通常建议将保存位置命名为具有提示性的名称（如实验名称），然后创建两个子文件夹，分别用于存放预扫描和后扫描数据。这有助于在分析过程中更方便地查找和匹配数据。 - 要扫描芯片，请在控制计算机上找到相应的芯片文件。
注意：芯片文件是当前所用芯片上抗体点阵布局的地图，用于让扫描仪识别每个芯片上的扫描位置。每个试剂盒中均附带一个包含对应芯片文件的U盘。收到试剂盒后，应将这些文件保存至控制计算机上的固定位置，以便用户可靠地查找使用。 - 将芯片加载到卡盘上，确保芯片上的编号朝向卡盘的把手方向；然后在计算机的芯片下拉菜单中，从芯片文件列表中选择每个芯片，并将其放置在扫描软件虚拟卡盘中的相应匹配位置。完成后，屏幕上将出现提示，要求用户“将卡盘放置到载物台上”。
- 将已加载芯片的卡盘放置到载物台上；卡盘上的磁性对位结构会自动将其调整至载物台上的正确位置，然后点击“将卡盘放置到载物台上”旁边的确定按钮。扫描仪将随即开始自动数据采集程序。
注意：当软件报告每张芯片的扫描状态均为成功时，数据即可用于分析。
9. 数据分析
- 双击 ExoView 分析仪 在控制电脑的桌面上。软件启动后，单击 预扫描数据 按钮，并在第8.3节中为预扫描数据集选择文件夹位置。
- 点击 扫描后数据 按钮，并在第8.3节中为后扫描数据集选择文件夹位置。
注意：如果两个文件夹中的数据均被正确检测到，且至少部分芯片满足条件，软件将在芯片文件位置按钮旁显示检测到的芯片数量“X”。正确保存后，检测到的芯片数量应与扫描的芯片数量一致。 - 点击 下一步 在数据加载区域的底部。
- 在元数据表的下拉菜单中，每个芯片对应一个单元格。通过单击相应的框并输入信息，在每个检测通道中填写样本名称、稀释倍数以及所标记的标志物；完成后，单击 下一步 再次。
注意：此元数据将随数据一同保存。 - 通过点击进行预成型质量控制（QC） 禁用 位于左上角质量控制按钮下方的选项卡
注意：此功能允许在分析中关闭特定的探针和芯片。软件将针对数据提供两种不同的警告：一种是高计数值警告，可能表明某个捕获信号已达到饱和；另一种是高变异系数（CV）警告，用于提示某类捕获的重复样本之间存在差异。- 点击一个 警示点 对于高变异系数，应检查软件标记出的点，观察是否存在明显的物理损伤；一旦发现损伤，点击 斑点编号 在分析中关闭该信号点。
- 重复此步骤，直到所有警告均被评估，然后单击 下一步.
- 通过单击进行预成型截断分析 临界值 位于旁边的标签 禁用 位于左上角质量控制按钮下方的选项卡
注意：这将在图表中显示对照点的荧光响应，并为用户提供每个颜色通道（红/绿/蓝）的两个设置值，即最小值和最大值。为每个荧光检测通道设定阈值是唯一需要进行的数据调整，且相对简单。重要的是，所选择的最终阈值应在整个实验中保持一致，并应遵循一般经验规则：在典型实验中，红色和绿色通道的阈值范围为300-400 a.u.，蓝色通道为400-700 a.u.；软件也为用户提供了对应范围的颜色编码指引。- 点击 绿色 单击以加载该通道的数据并显示当前的阈值。观察同型阴性对照点时，可能会看到荧光强度极低的检测信号；在此情况下，用户通常应将绿色阈值设置在300-400 a.u.之间。
- 增加各检测通道的最小值，直到数据展示下方的“Avg % Inc”（对照点中高于阈值的检测颗粒平均百分比）不再出现该单元格内的红色或黄色高亮警告。
注意：最大值通常无需从默认值进行调整，但可降低以过滤明亮颗粒或将荧光检测限制在更窄的范围内。 - 点击 下一步 按钮。
- 增加各检测通道的最小值，直到数据展示下方的“Avg % Inc”（对照点中高于阈值的检测颗粒平均百分比）不再出现该单元格内的红色或黄色高亮警告。
- 点击 红色 切换至该通道以加载数据并显示当前的阈值。再次检查同型阴性对照点，可能会观察到荧光强度极低的检测信号；在此情况下，用户通常应将红色阈值设定在300-400 a.u.之间。操作步骤请参照9.6.1.1-9.6.1.3所述方法。
- 点击 蓝色 切换以加载该通道的数据并显示当前的阈值。再次检查同型阴性对照点，遵循步骤9.6.1.1-9.6.1.3中所述的相同操作程序。
注意：蓝色通道具有特殊性，因为点样中的抗体具有足够的自发荧光水平，即使对于空白芯片，也需要将阈值略微提高至400-700 a.u.
- 点击 绿色 单击以加载该通道的数据并显示当前的阈值。观察同型阴性对照点时，可能会看到荧光强度极低的检测信号；在此情况下，用户通常应将绿色阈值设置在300-400 a.u.之间。
- 完成截断值分析后，单击 下一步 热图将显示，概览整个实验中颗粒结合的情况。用户可使用多种可视化工具来绘制数据。通过点击，这些图表及相关原始数据可被添加到报告中 添加图表报告 按钮。
注意：热图是默认的数据展示方式，可显示特定检测中所有样本、所有捕获位点的全景视图。默认展示内容为结合至每个捕获位点的独特EV总数。 - 点击 导出报告 按钮并选择报告的保存位置。
注意：报告将在浏览器中打开。请在报告中找到附带的“过滤颗粒列表”电子表格文件，此文件内容即为提交至 EVTRACK 的信息。 - 继续使用屏幕顶部下拉菜单中的不同“样本”和“捕获类型”选项添加报告。左上方的通道检测按钮用于控制所显示的数据。通过点击各个颜色按钮，可切换特定表型/样本选择/捕获通道的开启（彩色）或关闭（灰色）。
- 点击 将图表添加到报告 将所需图表汇总到报告中的按钮。
- 点击 导出报告 并定义最终报告的保存位置。
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结果
图7（左图）显示了一个三色复合图像，该图展示了来源于HEK293条件培养基的细胞外囊泡（EVs），这些囊泡结合在芯片的CD63点上，并分别在绿色、红色和蓝色通道中对CD81、CD63和CD9进行染色。图7（右上图）为放大图像，显示每个被捕获的EV可表现出一种或多种颜色在各通道中的共定位，且强度各异。被捕获EV染色的差异反映了三种四跨膜蛋白在单个囊泡上表达的异质性，可通过数据分析软件进行量化。图7（右下图）展示了EVs的粒径分布直方图，其粒径均大于50 nm。粒径直方图显示，在CD63点上捕获的EVs的众数粒径为50 nm。每个结合于点阵图像上的EV的颜色共定位情况、荧光强度和粒径构成了表型数据，这些数据是测量中的基础数据。
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讨论
目前的细胞外囊泡（EV）表征方法在很大程度上依赖于纯化的EV，而这受到现有EV纯化技术实验局限性的制约9,10,11,12,13。单颗粒干涉反射成像技术（SP-IRIS）是一种有效的技术，能够消除样本分析所需的纯化步骤，从而节省时间并降低典型EV工作流程中的成本。该方法所需的样本投入量通常非常小，剩余样本仍可用于其他分析方法。
此外，以抗原特异性方式检测细胞外囊泡（EVs）的能力，对于基础EV研究以及诊断和治疗应用中的稀有事件检测都具有重要意义。然而，与血液中其他循环EVs和污染物相比，疾病特异性的EVs可能浓度较低2,11,
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披露
Clayton Deighan 和 George Daaboul 是 NanoView Biosciences 公司的员工和股东。
致谢
本工作部分由堪萨斯大学医学院研究设备与资源采购奖项目资助。PCG、LKC、FD 和 AR 获得了美国国家老龄化研究所（NIA）R21 AG066488-01 项目资金的支持。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 10 厘米无菌培养皿 | Fisher | FB0875712 | |
| 15 毫升无菌离心管 | n/a | 各种 | |
| 24 孔细胞培养板，平底 | Fisher | 08-772-1 | |
| 封闭溶液 | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 包含于 ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒中。 |
| 芯片文件（Chipfiles） | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 包含于 ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒中。 |
| 芯片（Chips） | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 包含于 ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒中。 |
| 芯片夹具（Chuck） | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 包含于 ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒中。 |
| Corning Easy Grip 一次性聚苯乙烯无菌瓶，250 毫升 | Fisher | 09-761-4 | |
| Corning Easy Grip 一次性聚苯乙烯无菌瓶，500 毫升 | Fisher | 09-761-10 | |
| 去离子水（DI 水） | Fisher | LC267404 | |
| EMS 型碳纤维尖头镊子 | Fisher | 50-193-0842 | |
| ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒 | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 可捕获 hCD81、hCD9、hCD63 及 IgG 对照 + 标记 hEV-A（hEV-CD63-647、hEV-CD81-555、hEV-CD9-488），每试剂盒含 16 片芯片 |
| ExoView R100 成像仪 | NanoView Biosciences | EV-R100 | 干涉显微镜，配备高性能相机，支持三色荧光检测，并可对细胞外囊泡进行无标记的粒径分析与计数 |
| 荧光标记的人源 CD9 IgG 抗体 | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 包含于 ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒中。 |
| 荧光标记的人源 CD63 IgG 抗体 | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 包含于 ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒中。 |
| 荧光标记的人源 CD81 IgG 抗体 | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 包含于 ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒中。 |
| 孵育溶液 | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 包含于 ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒中。 |
| 可调节转速至 500 rpm 的轨道摇床或微孔板摇床 | n/a | 各种 | |
| 板封膜（Plate Seal） | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 包含于 ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒中。 |
| 溶液 A | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 包含于 ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒中。 |
| 溶液 B | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 包含于 ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒中。 |
| 溶液 C | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 包含于 ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒中。 |
| 溶液 D | NanoView Biosciences | EV-TETRA-C | 包含于 ExoView 人源四跨膜蛋白检测试剂盒中。 |
| 方形/平头镊子 | Fisher | 50-239-62 | |
| 直头尖锐 Boley 型镊子 | Fisher | 16-100-124 | |
| Thermo Scientific 粘性 PCR 板封膜 | Fisher | AB-0558 |
参考文献
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