Caenorhabditis elegans 作为发现抗多聚谷氨酰胺介导神经毒性的生物活性化合物的模型系统

摘要

本文介绍了一种在秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）中评估受试化合物神经保护活性的实验方案，包括多聚谷氨酰胺聚集、神经元死亡和趋化回避行为的检测，以及多种表型整合分析的示例。

摘要

病理性蛋白随年龄增长发生的错误折叠和聚集是多种神经退行性疾病的原因。例如，亨廷顿病（HD）主要由CAG核苷酸重复序列引起，该序列编码亨廷顿蛋白中异常扩展的谷氨酰胺片段。因此，抑制多聚谷氨酰胺（polyQ）的聚集，特别是与聚集相关的神经毒性，是预防HD及其他polyQ相关疾病的有效策略。本文介绍了一套通用的实验方案，利用已建立的polyQ转基因秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）模型，评估待测化合物对HD的神经保护能力。在polyQ聚集实验中选用AM141品系，因其在成虫阶段体壁肌肉中特异性表达polyQ::YFP融合蛋白，可清晰观察到随年龄出现的离散荧光聚集物表型。相比之下，HA759模型在ASH神经元中强烈表达扩展的polyQ片段，适用于检测神经元死亡及化学回避行为。为了全面评估目标化合物的神经保护能力，上述测试结果最终以雷达图形式呈现，通过多种表型的轮廓分析实现直接比较和直观观察。

引言

亨廷顿病（HD）中的进行性神经退行性变涉及致病性突变亨廷顿蛋白，该蛋白含有由CAG三核苷酸重复序列编码的异常延长的多聚谷氨酰胺（polyQ）片段^1,2,3。含有超过37个谷氨酰胺重复序列的突变亨廷顿蛋白易于聚集，并在HD患者及动物模型的脑内蓄积^4,5，最终导致神经元退化⁶。尽管目前对polyQ聚集体在疾病病理过程中的具体作用尚不明确⁵，但抑制polyQ聚集及其相关毒性仍是治疗HD及其他polyQ相关疾病的有效策略之一^4,7,8。

由于神经信号通路的高度保守性以及易于构建转基因疾病模型，Caenorhabditis elegans 已被广泛用作研究神经系统疾病的主要模式生物^9,10,11,12。例如，表达易聚集多聚谷氨酰胺（polyQ）扩展片段的转基因 C. elegans 模型能够客观地模拟亨廷顿病（HD）样特征，如选择性神经元丢失、胞质内聚集物形成以及行为缺陷¹³。通过研究待测样品在已建立的 polyQ 线虫模型中逆转上述表型的潜在作用，已鉴定出多种具有治疗前景的候选物质，例如多糖^7,14,15、寡糖¹⁶、天然小分子化合物^17,18，以及中药提取物和复方制剂^19,20。

本文描述了两种主要的多聚谷氨酰胺（polyQ）C. elegans 模型及相关实验方案，其潜在应用以黄芪多糖（astragalan）的研究为例进行说明。黄芪多糖是从Astragalus membranaceus⁷中分离得到的一种多糖。在C. elegans多聚谷氨酰胺聚集检测中，所用模型为转基因品系AM141，该品系在成年期因其表达Q40::YFP融合蛋白——即由40个残基组成的多聚谷氨酰胺片段（polyQ40）与黄色荧光蛋白（YFP）融合而成——而在体壁肌中呈现分散的荧光斑点^21,22。品系HA759用于检测神经元存活和趋化回避行为，该品系在ASH神经元中强烈表达绿色荧光蛋白（GFP）和Htn-Q150（一种来源于人亨廷顿蛋白的含150个残基的多聚谷氨酰胺片段），在其他神经元中表达较弱，导致进行性神经退行性变和ASH细胞死亡^7,13。通过整合不同实验的结果，可全面评估治疗候选物的神经保护潜力。

方案

注意：本方案中所用溶液的配方见表1。

1. 线虫（Caenorhabditis elegans）实验材料的准备

1. 维持 秀丽隐杆线虫 菌株
   1. 获取 秀丽隐杆线虫 （AM141 和 HA759）以及 大肠杆菌 （OP50 和 NA22）菌株（参见 材料表).
   2. 在接种了大肠杆菌OP50的线虫生长培养基（NGM）平板上培养线虫 E. coli OP50，20 °C，用于AM141²¹ 或 15 °C 用于 HA759²³.
2. 制备 E. coli OP50 菌株培养物
   1. 挑选单个菌落 E. coli 从LB平板上挑取OP50单菌落，接种至50 mL液体LB培养基中。
   2. 在37 °C、200 rpm条件下，将OP50细菌在摇床中培养至570 nm处光密度约为0.5（OD₅₇₀).
   3. 将OP50菌液在4 °C下保存，并在两周内使用。
3. NGM 平板的制备及接种 OP50 菌株
   1. 向1 L可高压灭菌瓶中加入20 g琼脂、2.5 g蛋白胨、3.0 g NaCl和975 mL去离子水。在121 °C下高压灭菌30 min。
   2. 将液体NGM琼脂瓶放在实验台上冷却至约60 °C，然后加入以下无菌储存液：1 mL 1 M CaCl₂₂，1 mL 1 M MgSO₄₄5 mg/mL 胆固醇溶液 1 mL 和 1 M 磷酸钾缓冲液（pH 6.0）25 mL
   3. 将20 mL NGM倒入无菌的90 mm培养皿中，置于实验台上冷却并凝固。将平板倒置，在室温下于实验台上干燥2天。
   4. 在每块NGM平板上加入200 µL OP50菌液，用无菌玻璃涂布棒均匀涂布。盖上皿盖，于37 °C过夜培养。
   5. 将接种了OP50的NGM平板置于带盖塑料盒中，室温保存，并在两周内使用。
4. 年龄同步化样品的制备 秀丽隐杆线虫 种群
   1. 收集带有卵的成年线虫至无菌的1.5 mL微量离心管中，以1000 × g 孵育1分钟。用M9缓冲液洗涤三次，并将线虫重悬于M9缓冲液中。
   2. 加入等体积的漂白液，轻轻振荡3-5分钟。每隔15秒在解剖显微镜下观察一次漂白情况。
      注意：使用前必须将10% NaOCl与1 M NaOH等体积混合，新鲜配制次氯酸钠溶液（表1)²⁰.
   3. 当大部分线虫破裂后，加入M9缓冲液终止消化。迅速离心以去除上清液，并将沉淀重悬于M9缓冲液中，重复洗涤三次。
   4. 将沉淀重悬于S培养基中。静置2-3分钟，使线虫残渣依靠重力沉降，而虫卵保留在上清液中。
   5. 吸弃上清液至新的无菌微量离心管中。以1000 × g离心收集卵子。 g 1 分钟。
   6. 弃去约80%的上清液，将卵转移至含有20 mL S培养基的无菌烧瓶中。将烧瓶置于摇床中，在120 rpm条件下避光振荡培养过夜，以获得同步化的L1期线虫。

2. PolyQ 聚集检测

1. 多聚谷氨酰胺（polyQ）聚集实验用线虫的制备
   1. 将300–500条同步化的AM141 L1幼虫转移至48孔板的每个孔中，每孔加入500 µL含有OP50（OD₅₇₀为0.7–0.8）和5 mg/mL黄芪胶的S培养基，通常每个时间点每种处理使用一个孔。
   2. 用封口膜密封培养板，在20 °C、120 rpm条件下振荡培养24、48、72和96小时。
   3. 将线虫收集至无菌的1.5 mL微量离心管中，用M9缓冲液洗涤>3次（每次1000 × g离心1分钟），以去除残留的OP50。将AM141线虫重悬于M9缓冲液中，备用以进行成像。
2. 荧光图像采集与数据分析
   注：本高内涵成像系统可自动分析数据。若无自动化成像设备，也可采用常规方法制备琼脂糖垫进行图像采集，使用普通荧光显微镜即可获得类似效果^7,15,17（见步骤3.2和3.3）。
   1. 将10–15条线虫转移至384孔板的每个孔中（每孔终体积为80 µL）。每种处理设置10个重复孔。
   2. 向每个孔中加入10 µL 200 mM叠氮化钠，以麻痹线虫并使其沉降至孔底（5–10分钟）。
   3. 将384孔板置于高内涵成像系统中采集荧光图像（设备与软件信息见材料表）。
   4. 打开图像采集软件并设置以下参数。
      1. 打开板型采集设置窗口，创建新的实验集并命名。
      2. 选择放大倍数为2x，相机像素合并为1，板类型为384孔板。
      3. 设置需采集的孔位和位点（单一位点）。
      4. 选择异硫氰酸荧光素（FITC）滤光片，并启用基于图像的对焦选项。
      5. 设置曝光时间为300 ms。
         注：上述参数可进行测试和调整，以优化成像参数。
      6. 保存图像采集设置，点击采集整板按钮开始运行。
   5. 使用图像分析软件分析图像数据。
      1. 打开查看板数据窗口，选择用于图像分析的测试板。
      2. 双击一个测试孔以显示其图像。
      3. 选择计数细胞核作为分析方法，点击配置设置按钮，弹出设置窗口。
      4. 定义来自FITC通道的源图像，并选择标准算法。
      5. 设置图像分析参数如下：近似最小宽度 = 10 µm（= 2像素）；近似最大宽度 = 50 µm（= 12像素）；高于局部背景的强度 = 1,000–2,000灰度级。
      6. 测试当前设置以优化分析方法。
      7. 保存设置，并对所有孔运行分析。
         注：分析一张384孔板约需20分钟。
      8. 导出总细胞核数作为每个孔中Q40::YFP聚集体的总数。
   6. 统计每个孔中线虫的数量。
   7. 计算每组中每条线虫平均Q40::YFP聚集体数量，并对每个时间点的数据进行非线性曲线拟合。
   8. 使用下方公式（1）计算抑制指数：
      抑制指数 = (1)
      其中N_control和N_sample分别为对照组和处理组中Q40::YFP聚集体的平均数量。

3. 多聚Q介导的神经毒性检测

1. 测试样品对 C. elegans 的处理
   1. 为进行多聚谷氨酰胺（polyQ）神经毒性检测，将 HA759 品系的 300–500 条同步化 L1 期幼虫转移至 48 孔板的每个孔中，每孔加入含 OP50（OD₅₇₀ 为 0.7–0.8）和 5 mg/mL 黄芪多糖的 S 培养基 500 µL，每种处理通常设三个重复孔。
   2. 用封口膜密封培养板，在 15 °C、120 rpm 条件下振荡培养 3 天²³。
   3. 通过离心收集线虫，并用 M9 缓冲液洗涤 3–5 次。将线虫重悬于 M9 缓冲液中，用于后续神经元存活率和回避行为检测。
2. 琼脂糖垫的制备
   1. 将 2 g 琼脂糖加入 100 mL M9 缓冲液中（2%，w/v），在微波炉中加热至接近沸腾。
   2. 将 0.5 mL 熔化的琼脂糖滴加至置于两片 2 mm 厚玻璃板之间的 1 mm 厚显微镜载玻片中央，再垂直覆盖另一张载玻片。待琼脂糖冷却凝固后，轻轻移去上层载玻片。
3. ASH 神经元存活率检测
   1. 在琼脂糖垫上滴加一滴 20 mM 叠氮化钠。将 15–20 条 HA759 线虫转移至液滴中以固定其活动。
   2. 轻轻盖上盖玻片，将载玻片置于配备数码相机的荧光显微镜下观察。选择 40 倍物镜和 FITC 滤光片，检测线虫头部区域表达 GFP 的 ASH 神经元。
   3. 每组随机选取超过 50 条线虫，统计头部区域具有 GFP 标记的双侧 ASH 神经元的线虫数量⁷。使用下方公式（2）计算 ASH 神经元的存活率。
      神经元存活率 (%) = (2)
      其中 N_survival 和 N_total 分别代表每组中具有 GFP 阳性 ASH 神经元的线虫数量和检测的总线虫数量。
4. 渗透压回避检测
   1. 在无食物的 NGM 培养板（9 cm）中央划一条 8 M 甘油（约 30 µL）线，将培养板分为正常区（N）和陷阱区（T）。在距甘油线约 1 cm 处再划一条 200 mM 叠氮化钠（约 20 µL）线，用于麻痹穿过甘油屏障进入 T 区的线虫。
   2. 每组在三个重复培养板的 N 区各转移约 200 条线虫。在 T 区（距培养皿边缘 1 cm 处）滴加一滴 1% 丁二酮（约 2 µL）以吸引线虫。立即盖上培养皿盖，在 23 °C 下孵育 90 分钟。
   3. 在显微镜下计数 N 区和 T 区的线虫数量。使用公式（3）²⁰ 计算回避指数。
      回避指数 = (3)
      其中 N 和 T 分别代表 N 区和 T 区的线虫数量。数据以三次重复的均值 ± 标准差（SD）表示，代表 >3 次独立实验的结果。
   4. 采用非配对双尾 t-检验比较黄芪多糖组与对照组的数据。

4. 创建雷达图

1. 打开绘图软件，将不同实验的数据导入新工作表中。将 A(X) 列作为径向轴的标题，A(Y) 列作为对照组的数据，B(Y) 列作为处理组的数据。
2. 选择所需数据，然后在工具栏菜单中点击 Plot | Specialized: Radar 按钮，生成雷达图。
3. 双击径向轴，根据需要调整各轴的 Scale（刻度）、Tick（刻度线） 和 Tick labels（刻度标签）。
4. 在菜单中点击 File，选择 Export Graphs，将图像保存为 *.tiff 格式。
   注意：材料表中的软件网站提供了有关创建雷达图的详细帮助文档和视频教程。

结果

转基因多聚谷氨酰胺（polyQ）品系AM141在其体壁肌细胞中强烈表达Q40::YFP融合蛋白^7,21。如图1A所示，该品系离散的聚集表型可通过本文所述的自动成像与分析方案进行识别。AM141线虫中Q40::YFP聚集物的数量自L1期起48小时后显著增加。然而，这一增加趋势可被黄芪多糖（astragalan）处理所抑制（图1B），表明黄芪多糖对polyQ聚集具有保护潜力。通常，可选择72小时或96小时作为观察Q40::YFP聚集物数量的时间点，以评估待测样品的抗聚集效应。在本方案中，AM141线虫的荧光聚集物由自动成像系统捕获，尽管荧光显微镜也可用于此目的⁷。

C. elegans 品系 HA759 在其感觉 ASH 神经元中同时表达 GFP 标记物和 Htn-Q150，导致这些神经元逐渐丧失功能并发生退化^11,13。将线虫置于 2% 琼脂糖载片上，以评估 ASH 神经元的存活情况（图 2A），并通过显微镜观察检测 ASH 神经元。若在线虫头部区域的双侧 ASH 神经元中观察到 GFP 荧光信号消失，则表明 ASH 神经元已死亡（图 2B）。HA759 线虫在 15 °C 条件下培养 3 天后，对照组中 ASH 神经元的存活率<40%^7,20，表明存在多聚谷氨酰胺（polyQ）介导的神经毒性。因此，该 ASH 神经元存活实验可用于直观评估待测化合物对 C. elegans 神经元的影响，例如 astragalan 具有神经保护作用，而 Poria 多糖则无此效应（图 2C）。

由于行为功能障碍是多聚谷氨酰胺（polyQ）疾病的主要临床症状，利用大量HA759线虫进行的化学感受回避实验（图3A）被设计为一种简化检测方法，用于评估待测样品对由polyQ聚集介导的ASH神经元功能丧失的影响。如图3B所示，未处理对照组中HA759线虫的回避指数约为0.5，与先前报道的结果相似¹⁴。有趣的是，在15 °C条件下经黄芪多糖处理3天后，线虫的回避指数升高至>0.6（图3B），表明该多糖对行为功能损伤具有神经保护作用。

为了评估受试化合物的整体神经保护能力，可将上述各项检测的数据进行整合，并以多种表型的雷达图形式呈现，从而为多聚谷氨酰胺（polyQ）相关表型提供一个统一的特征，便于直接比较和直观观察。如图4所示，黄芪多糖处理组三角形的面积大于对照组，表明该多糖具有抗多聚谷氨酰胺的作用效应。

图1：黄芪多糖对polyQ40聚集的影响。（A）AM141线虫在20 °C条件下经黄芪多糖处理或未处理96小时后的代表性图像。荧光图像（左侧面板）来自384孔板，使用高内涵成像与分析系统获取；Q40::YFP聚集体（右侧面板）由系统自动识别。插图为线虫图像的放大视图，显示polyQ聚集体。比例尺 = 500 µm。（B）Q40::YFP聚集体的定量分析。使用高内涵成像系统，在20 °C条件下经黄芪多糖处理或未处理后，连续4天每24小时监测一次AM141线虫中Q40::YFP聚集体的数量。每组约100–150条线虫在每个时间点进行聚集体评分。结果以每条线虫平均聚集体数量拟合的曲线表示。缩写：polyQ = 多聚谷氨酰胺；YFP = 黄色荧光蛋白；FITC = 异硫氰酸荧光素。请点击此处查看该图的放大版本。

图 2：黄芪多糖对Htn-Q150介导的ASH神经元死亡的影响。 （A）琼脂糖载玻片制备的示意图。（B）使用400倍放大倍数拍摄的HA759线虫中ASH神经元存活与死亡的代表性显微图像。比例尺 = 20 µm。HA759线虫在L1期起于15 °C条件下经黄芪多糖处理或未处理培养3天后，使用荧光显微镜进行拍照。（C）黄芪多糖对多聚谷氨酰胺（polyQ）介导的ASH神经元死亡的保护作用。Poria 多糖（来自Poria cocos的多糖）作为对照使用。数据以三次重复实验的均值 ± 标准差表示，代表三次以上独立实验的结果。采用非配对双尾t检验对对照组与黄芪多糖组及Poria多糖组的数据进行统计学分析。*p < 0.05；ns = 无显著差异。缩写：GFP = 绿色荧光蛋白。请点击此处查看该图的放大版本。

图 3：黄芪多糖对 Htn-Q150 介导的行为功能障碍的影响。 （A）回避实验平板的示意图。（B）回避实验的代表性结果。回避指数定义为位于 N 区域的线虫数量与平板上总线虫数量的比值。结果以三次重复实验的均值 ± 标准差表示，代表三次独立实验。回避指数的统计分析采用未配对双尾 t-检验。**p < 0.01。 请点击此处查看该图的放大版本。

图4：黄芪多糖的整体神经保护能力。 来自三种不同实验的数据被导入OriginPro软件生成雷达图，用于概述黄芪多糖对由polyQ介导的多种表型的总体效应。请点击此处查看该图的放大版本。

表1. 请点击此处下载此表格。

讨论

由于多聚谷氨酰胺（polyQ）聚集和蛋白毒性是亨廷顿病等polyQ疾病的重要特征¹³，我们建议采用多种模型和方法全面评估受试化合物的神经保护能力，包括在AM141菌株中进行polyQ聚集检测、在HA759菌株中进行ASH神经元存活检测，以及在HA759菌株中进行化学感受回避检测。本文所介绍的实验方案已被用于评估受试样品对polyQ毒性的神经保护作用，包括对polyQ聚集及其相关神经毒性的抑制作用^{7,14,15,16,17,19,20}，表明这些方法在亨廷顿病及其他polyQ疾病药物研发中具有重要应用潜力。

本文介绍了一种用于多聚谷氨酰胺（polyQ）聚集实验中检测和计数polyQ聚集体的自动化成像与分析系统。该方法具有高通量、高效省时的优点，可显著减少人工计数过程中繁琐且易产生主观误差的问题。对于整块384孔板，完成图像采集与分析仅需<1小时。然而，本实验室此前在未使用自动化成像设备的情况下，采用传统显微镜成像方法也获得了类似的结果⁷。

在典型的Q40::YFP聚集实验中，建议每个时间点每种处理使用100–150条线虫，可将线虫分至多个重复孔中，每孔含10–15条。但需注意，L1幼虫可能对某些处理或较高浓度更为敏感。因此，测试化合物的高剂量可能会抑制其生长，导致因生长缓慢而延迟多聚谷氨酰胺（polyQ）聚集，从而产生假阳性结果。通常可通过进行食物清除实验来解决此问题，并确定测试化合物的合适浓度范围²³。

在多聚谷氨酰胺（polyQ）神经毒性实验中使用的HA759转基因线虫共同表达OSM-10::GFP和Htn-Q150，从而能够明确识别双侧ASH感觉神经元。因此，ASH神经元的存活情况通过GFP表达的有无来评估；通常情况下，对照组线虫中约有40–75%的ASH神经元发生死亡^23,24。有趣的是，HA759品系中pqe-1（多聚谷氨酰胺增强因子-1）基因突变背景（pqe-1;Htn-Q150）会加速polyQ介导的毒性，导致大多数ASH神经元在三天内死亡，即使在15 °C条件下亦如此。因此，如先前报道所述，该品系在神经元存活实验中需在15 °C下培养^23,24。

在HA759线虫中，ASH神经元的功能丧失可能发生在细胞死亡和蛋白质聚集体被检测到之前¹³；因此，渗透回避行为实验对于评估多聚谷氨酰胺（polyQ）介导的毒性至关重要。为了尽量减少低温下活动性较低的HA759线虫对行为实验的潜在影响，回避实验所用培养板应置于湿度控制的23 °C培养箱中孵育，而不是像该品系神经元存活实验那样在15 °C进行。此外，已有报道指出，Htn-Q150/OSM-10::GFP转基因线虫对鼻部触碰高度敏感；因此，另一种检测ASH神经元功能的方法是鼻触实验¹³。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
秀丽隐杆线虫菌株
AM141 rmIs133 [unc-54p：：Q40：：YFP]<	em>隐杆球菌炎 遗传学中心（CGC）		https://cgc.umn.edu/strain/AM141
HA759 rtIs11 [osm-10p：：GFP + osm-10p：：HtnQ150 + dpy-20（+）]	球菌炎 遗传学中心 （CGC）		https://cgc.umn.edu/strain/HA759
大肠杆菌菌株
NA22	隐杆球菌炎 遗传学中心 （CGC）	https://cgc.umn.edu/strain/NA22
			https://cgc.umn.edu/strain/OP50
试剂
琼脂	上海亿禄生物科技有限公司	EQ1001-500G	https://www.ekear.com
琼脂糖	Biowest	111860
丁二酮	国药集团化学试剂有限公司	80042427	https://www.reagent.com.cn/goodsDetail/d027c00e64c9404d9aa41391fbb59 5d0
胆固醇	Sigma-Aldrich	C8667	https://www.sigmaaldrich.cn/CN/zh/product/sigma/c8667?context=product
甘油	阿拉丁有限公司	G116203	https://www.aladdin-e.com/zh_cn/g116203.html
蛋白胨	Guangdong HuanKai Microbial Science and Technology Co.， Ltd.	050170B	https://www.huankai.com/show/21074.html
国	药控股化学试剂有限公司	80115560	https://www.reagent.com.cn/goodsDetail/5e981aa807664e26af 551e96ff5f07cd
氢氧化钠	国药化学试剂有限公司	10019718	https://www.reagent.com.cn/goodsDetail/450dfdb1132a4d8a817 d3d8c68ec25e6
氯酸钠溶液	广州化学试剂厂	7681-52-9	http://www.chemicalreagent.com/product/DetailProduct.aspx?id=125
胰蛋白胨	Oxoid Ltd.	LP0042B	https://www.thermofisher.cn/order/catalog/product/LP0042B#/LP0042B
Yeast Extract	Oxoid Ltd.	LP0021B	https://www.thermofisher.cn/order/catalog/product/LP0021B#/LP0021B
设备
384孔细胞培养板	巢生物科技有限公司	761001	https://www.cell-nest.com/page94?_l=en&product_id=85
48 孔细胞培养板	Nest Biotechnology Co.， Ltd.	748001	https://www.cell-nest.com/page94?_l=en&product_id=85
90 mm 培养皿	Sangon Biotech （Shanghai） Co.， Ltd.	F611003	https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F611003
高压灭菌	Panasonic	MLS-3781L-PC
解剖显微镜	重庆光学有限公司	ZSA0745	http://www.coicuop.com/plus/view.php?aid=64
荧光显微镜	广州微拍光学技术有限公司	Mshot MF31-LED	https://www.mshot.com/article/442.html
高内涵成像系统	Molecular Devices	ImageXpress	https://www.moleculardevices.com/products/cellular-imaging-systems#High-Content-Imaging
微量离心机	GeneCompany	GENESPEED X1	https://www.genecompany.com/index.php/Home/Goods/goodsdetails/gid/189.html
显微镜数码相机	Guangzhou Micro-shot Optical Technology Co.， Ltd. （广州微射光学科技有限公司）	MS60	https://www.mshot.com/article/677.html
微波	美的股份有限公司	M1-211A	https://www.midea.cn/10000/10000000001 00511264425.html
Parafilm M	Sigma-Aldrich	P7793-1EA	https://www.sigmaaldrich.cn/CN/en/product/sigma/p7793?context=product
Shaker	Zhicheng Inc.	ZWY-2102C	http://www.zhicheng.net/Product/0865291356.html
软件
图像采集分析软件	Molecular Devices	MetaXpress	https://www.moleculardevices.com/products/cellular-imaging-systems/acquisition-and-analysis-software/metaxpress
OriginPro	OriginLab Corp.	版本 9.8.5.204	1.软件介绍：https://www.originlab.com/index.aspx?go=Products/Origin 2. 创建雷达图的说明：https://www.originlab.com/doc/Origin-Help/RadarChart-Graph 3. 创建雷达图的视频教程：https://www.originlab.com/videos/details.aspx?pid=1813