方法文章

DetectSyn:一种快速、无偏倚的荧光方法，用于检测突触密度的变化

DOI：

10.3791/63139

⸱

2022年7月22日

 ,  , 
1Wake Forest Translational Alcohol Research Center, Wake Forest School of Medicine, 2Physiology and Pharmacology, Wake Forest School of Medicine

本文内容

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

DetectSyn是一种无偏倚的快速荧光测定，可测量治疗或疾病状态下相对突触（突触前和突触后接合）数量的变化。该技术利用了一种接近连接技术，该技术既可用于培养的神经元，也可用于固定组织。

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

突触是神经元之间交流的场所。神经元回路强度与突触密度有关，突触的分解是重度抑郁症（MDD）和阿尔茨海默病等疾病状态的特征。研究突触数的传统技术包括荧光标志物（例如，绿色荧光蛋白（GFP））的遗传表达，填充神经元的染料（例如，碳菁染料，DiI）和脊柱标志物的免疫荧光检测（例如，突触后密度95（PSD95））。这些代理技术的一个主要警告是，它们只能识别突触后的变化。然而，突触是突触前末梢和突触后脊柱之间的连接。测量突触形成/消除的金标准需要耗时的电子显微镜或阵列断层扫描技术。这些技术需要专门的培训和昂贵的设备。此外，只能评估有限数量的神经元，并用于表示整个大脑区域的变化。DetectSyn是一种快速荧光技术，可识别由于疾病状态或药物活性引起的突触形成或消除的变化。DetectSyn利用快速接近连接测定来检测并置的突触前和突触后蛋白质以及标准荧光显微镜，这是大多数实验室随时可用的技术。对所得点的荧光检测允许对实验进行快速和无偏倚的分析。DetectSyn提供的结果比电子显微镜更具代表性，因为可以分析比有限数量的荧光神经元更大的区域。此外，DetectSyn适用于 体外 培养的神经元和固定的组织切片。最后，提供了一种分析从该技术收集的数据的方法。总体而言，DetectSyn提供了一种检测不同治疗或疾病状态的突触密度相对变化的程序，并且比传统技术更容易获得。

引言

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

突触是神经元1之间通信的基本单位。同一区域内神经元之间的许多突触会产生介导行为的回路2。突触由来自一个神经元的突触前末端组成，该神经元释放神经递质或神经肽，将信息传递给另一个神经元的突触后受体。突触前信号的总和决定了突触后神经元是否会激发动作电位并将信息传播到其他神经元。

突触病理学，突触的分解，出现在以神经体积减少为特征的疾病和病症中，如阿尔茨海默病和重度抑郁症，导致回路不再最佳执行3，4，5。恢复突触密度可能是这些疾病潜在治疗方法的有效性的基础。例如，最近证明，增加突触是快速抗抑郁药的行为功效的基础6。为了快速筛选可能的突触病理学治疗，研究人员需要快速识别突触数量变化的技术。

目前的方法既耗时又昂贵（电子显微镜检查、阵列断层扫描），或者它们仅检查突触后的变化，而不结合突触前的参与（脊柱分析、免疫荧光/共定位）。像DiI这样的染料或像GFP这样的荧光蛋白有助于可视化神经元和表征突触后棘。然而，脊柱分析使用研究人员定义的比例来确定形态，这可能会降低再现性7.此外，不同的脊柱类别如何与功能突触相关仍在被揭示8。脊柱的形成可能是短暂的，可能反映突触后可塑性，但这些棘可以在稳定成突触前神经元9的突触之前被消除。

与脊柱分析相比，共定位为突触提供了更好的代理，因为人们可以免疫染色突触前和突触后蛋白。然而，突触蛋白可能产生低共定位值，因为蛋白质是并置的，可能不会始终如一地重叠。因此，由于蛋白质不是完全叠加的，共定位技术可能无法准确测量由于这种缺失信息而导致的突触形成的变化。最后，尽管电子显微镜（EM）和阵列断层扫描都提供了突触的高分辨率图像，但它们非常耗时。EM进一步需要专门的设备，研究人员在任何给定的实验中都仅限于小体积的组织。虽然阵列断层扫描优雅地提供了在超薄切片上筛选许多蛋白质的能力，并且可以与EM10结合使用，但这种技术可能过于劳动密集型，并且超出了需要快速扫描突触形成变化的实验范围。

DetectSyn是Duolink接近连接测定的特定应用。PLA测定允许对蛋白质 - 蛋白质相互作用进行一般检测。DetectSyn通过在彼此相距40nm内的标记突触前和突触后蛋白发出的荧光信号来桥接突触后测量。如果突触蛋白在40nm以内，如在突触间隙内，则含有DNA探针的二抗将杂交成环状DNA。这种杂交的环状DNA表达荧光探针，然后用标准荧光显微镜技术将其扩增并检测（见 图1）。至关重要的是，与EM和阵列断层扫描不同，该技术不需要专门的设备，并且需要与标准免疫组织化学相同的时间。因此，该技术的可访问性使研究密集型机构以外的研究人员能够参与突触病理学研究。此外，该技术可以在单个实验中检查多个大脑区域中突触密度的变化，从而更全面地表示由于疾病或治疗引起的突触变化。

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方案

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

从动物中分离细胞和组织符合美国国立卫生研究院的实验动物护理和使用指南，并得到维克森林机构动物护理和使用委员会的批准

注意:该协议用于已处理并根据特定实验范例和要求固定的样品。为了演示目的，由于快速抗抑郁药治疗引起的突触形成用于突出这种突触检测技术6。先前在盖玻片上培养，处理，固定在4%多聚甲醛（PFA）中并储存在1x磷酸盐缓冲盐水（PBS）中的神经元将用于突出 体外 程序。先前从小鼠中切片的海马组织（25μm厚）从处理，用冰冷的PBS和4%PFA经心灌注，然后储存在冷冻保护剂中将用于突出切片程序。有关如何培养神经元或经心灌注啮齿动物的更多信息，请参阅11，12 。有关此过程的图形表示形式，请参见 图 1 。

figure-protocol-1
图 1:DetectSyn 测定的图形表示。 在通透细胞膜后，Synapsin1和PSD95的一抗与这些突触蛋白结合。然后，具有寡核苷酸标签的次级药物与一抗结合。如果Synapsin1和PSD95在40nm以内，如在突触处，则寡核苷酸相互作用，并且荧光标记被放大。然后可以通过标准显微镜对该荧光信号进行成像和分析。 请点击此处查看此图的大图。

1. 冲洗样品

  1. 用500μL1x PBS + 0.75%甘氨酸冲洗样品5分钟3次，在轨道振荡器上轻轻搅拌以除去残留的PFA或冷冻保护剂。

2. 阻断和渗透样品

  1. 在1x PBS中制备封闭和透化溶液（10%正常驴血清，0.25%吐温20）。准备足够的准备，用于封闭，原发和二次孵育。
  2. 对于24孔板中的样品（例如，盖玻片或自由浮动切片），加入500μL封闭和透化溶液。确保每个孔包含不同的样品，并适当标记以防止样品被切换。
  3. 对于培养的细胞，将样品在室温（RT）下孵育60分钟，对于切片组织，在室温（RT）下孵育2小时。使用眼眶摇床进行温和搅拌。

3. 在一抗中孵育样品

  1. 在封闭缓冲液中制备一抗:
    1. 准备突触后密度95（PSD95;1:500，兔多克隆），突触素1（1:500，小鼠单克隆），MAP2（1:400，鸡多克隆）
    2. 准备一个阴性对照等分试样，省略其中一个突触对（例如，没有PSD95）
  2. 用塑料巴斯德移液器小心地去除封闭溶液。尽量去除，不要干扰细胞或撕裂组织。
  3. 对于培养的细胞:
    1. 在大型塑料培养皿中衬有薄膜。使用镊子小心地将盖玻片转移到护膜上。
    2. 小心地将60μL一抗溶液加入盖玻片的顶部。确保不要将一抗溶液洒在盖玻片的侧面。
    3. 为了在孵育期间提供湿度并防止样品变干，将超纯水添加到较小的培养皿中，并小心地将小培养皿布置在盖玻片周围。
    4. 覆盖大培养皿，并在室温下孵育培养的细胞1小时。
  4. 对于切片纸巾:
    1. 小心地将250μL一抗溶液加入24孔板中的自由漂浮切片中。
    2. 盖上板并在4°C下孵育组织过夜，并在眼眶振荡器上轻轻搅拌。

4. 洗涤样品，然后在二抗中孵育

  1. 在封闭缓冲液中制备二抗:
    1. 准备驴反老鼠（1:5），驴反兔子（1:5），驴反鸡（1:400）。
    2. 在此步骤中，可以通过制备省略抗小鼠或抗兔二级的二次等分试样来获得额外的技术控制。
  2. 对于培养的细胞:
    1. 使用镊子，小心地将主要溶液从盖玻片上敲到纸巾上
    2. 使用镊子，小心地将盖玻片转移回其原始的24孔板，其中装有500μL的1x PBS。
  3. 对于切片纸巾:
    1. 用塑料巴斯德移液管小心地取出一抗溶液。尽量去除，不要撕裂组织。
    2. 加入 500 μL 1x PBS
  4. 在1x PBS中洗涤样品10分钟3次，并在轨道振荡器上轻轻搅拌。在此期间，将所有洗涤缓冲液置于室温状态。
    1. 在此期间，更换大培养皿中的parafilm
  5. 对于培养的细胞:
    1. 使用镊子，小心地将盖玻片移回滑膜大培养皿
    2. 小心地将40μL二抗溶液加入盖玻片的顶部。确保不要将二抗溶液溢出盖玻片的侧面。
    3. 如果需要，将更多的超纯水添加到较小的培养皿中，并小心地将小培养皿布置在盖玻片周围。
    4. 覆盖大培养皿
  6. 对于切片纸巾:
    1. 小心地将250μL二抗溶液加入24孔板中的自由漂浮切片中。
    2. 盖板
      注意:从这里开始，通过用箔包裹板的顶部来保护样品免受光照。
  7. 将样品在37°C下孵育1小时

5. 结扎

  1. 将连接液1:5混合在分子级水中。
  2. 与第4节一样，小心地转移盖玻片并从切片组织中取出二次混合物。
  3. 在500μL洗涤缓冲液A中洗涤样品
    1. 对于培养的细胞，洗涤2次5分钟。对于切片的组织，洗涤2次，持续10分钟。在眼眶摇床上对两者都使用温和的搅拌。
    2. 在此期间，更换大培养皿中的parafilm
  4. 在将连接酶保持在冷块上的同时，从步骤5.1开始，在连接液中以1:40稀释连接酶。在将连接酶添加到样品中之前立即进行这种稀释。
  5. 与第4节一样，在加入连接酶之前，从样品中取出尽可能多的洗涤缓冲液A。
  6. 对于培养的细胞:将盖玻片转移回副膜培养皿。将40μL连接混合物加入盖玻片中，在盖玻片周围布置小的充满水的培养皿，并覆盖大培养皿。
  7. 对于切片组织:将步骤5.4中的250μL连接混合物加入每个孔并盖上板。
  8. 将样品在37°C下孵育30分钟。

6. 放大

  1. 将扩增储备液1:5混合在分子级水中。
  2. 与第4节一样，小心地转移盖玻片并从切片组织中取出连接混合物。
  3. 在500μL洗涤缓冲液A中洗涤样品
    1. 对于培养的细胞，洗涤2次2分钟。对于切片的组织，洗涤2次，持续10分钟。在眼眶摇床上对两者都使用温和的搅拌。
    2. 在此期间，更换大培养皿中的parafilm
  4. 在将聚合酶添加到样品中之前立即进行这种稀释。在将聚合酶保持在冷块上时，稀释聚合酶
    1. 对于培养的细胞，在步骤6.1的扩增储备液中稀释聚合酶1:80。
    2. 对于切片的组织，在步骤6.1的扩增储备液中稀释聚合酶1∶40。
  5. 与步骤4一样，在加入聚合酶之前，从样品中除去尽可能多的洗涤缓冲液A。
  6. 对于培养的细胞:将盖玻片转移回副膜培养皿中。将步骤6.4.1中的40μL扩增混合物加入盖玻片中，在盖玻片周围布置小的充满水的培养皿，并覆盖大培养皿。将样品在37°C下孵育100分钟。
  7. 对于切片组织:将步骤6.4.2中的250μL扩增混合物加入每个孔中并盖上板。将样品在37°C下孵育2小时。
    注意:在此期间，请准备幻灯片并为其添加标签。

7. 安装

  1. 如步骤4所示，小心地转移盖玻片并从切片组织中取出扩增混合物。
  2. 在500μL洗涤缓冲液B中洗涤样品2次，在轨道振荡器上轻轻搅拌10分钟。
  3. 在500μL1%洗涤缓冲液B中洗涤样品1分钟，在轨道振荡器上轻轻搅拌。
  4. 对于培养的细胞:
    1. 将 3 μL 安装介质滴到载玻片上
    2. 从盖玻片上轻拍多余的洗涤缓冲液，然后将盖玻片（细胞朝下）放入安装介质中。用少量透明指甲油密封侧面，将盖玻片密封到位。
  5. 对于切片纸巾:
    1. 小心地将纸巾片转移到准备好的载玻片上并排列，使切片平放。将5-10μL上样培养基（量取决于切片的大小）滴到组织切片上
    2. 小心地将玻璃盖玻片放在纸巾片上，并沿边缘用少量透明指甲油密封，以将盖玻片密封到位。
  6. 在显微镜下分析之前等待至少15分钟，或储存在-20°C。

8. 使用共聚焦显微镜获取数字图像

  1. 优化所有处理样品的采集设置（例如，激光功率、增益、偏移）。确保优化包括降低背景噪声和增强信号，而不会使荧光信号的强度过饱和。确定设置后，对获得的所有图像应用相同的采集设置。
    注:以下采集细节可与尼康A1共聚焦显微镜和尼康NIS AR Elements软件配合使用。
  2. 在载物台上设置带有样品的载玻片，并通过目镜使用DAPI找到样品的焦平面。
  3. 通过单击"眼睛端口"关闭 眼睛端口 ，然后选择一个光学配置按钮来调整设置。
  4. 调整每个荧光通道的增益、偏移和激光功率，以降低背景噪声并增强荧光信号。确保荧光信号不会像步骤8.5-8.6中提到的那样变得过饱和。
  5. 使用荧光信号的伪彩色监测过饱和度。在实时图像的底部，右键单击标有当前正在使用的荧光通道的选项卡。
  6. 接下来，选择 通道着色 并选择伪颜色（如 彩虹暗）， 以在类似热图的伪颜色中可视化荧光强度。在彩虹暗中，较冷的颜色表示荧光强度较小，较热的颜色表示较高的荧光强度。
  7. 优化所有荧光灯通道后，右键单击之前选择的光学配置按钮，然后为此按钮 选择"分配当前相机设置 "。
  8. 验证所选设置是否足以用于每个治疗组中的随机样本。如果所选设置使这些样品中的任何一个过饱和，请重复步骤8.4以消除过饱和度。
  9. 对于培养的神经元，请按照步骤8.10-8.16进行操作。
  10. 使用眼孔，搜索具有与其他树突重叠最小的树突的神经元。
  11. 关闭眼孔并使用DAPI通道可视化所选神经元的细胞体。双击体细胞的中心，使神经元在视野的中间居中。
  12. 使用 MAP2 通道，通过实时扫描找到 MAP2 信号的最佳聚焦平面。
  13. 在" ND 采集 "选项卡下，单击" 保存到文件" ，然后在" 浏览"下选择要将图像保存到的文件。然后，输入文件名。
  14. 在 Z 选项卡下，选择" 由范围定义的对称模式 "选项。将焦点设置为最佳 MAP2 平面，然后单击" 相对"按钮 将此焦点平面设置为 z 堆栈的中间。
  15. 将范围设置为 5 μm，步长为 1 μm，并确保选中 Z 轴移动期间关闭活动快门。在" 波长 "选项卡下，选择光学按钮的名称，并在" 光学会议"下使用先前配置的采集设置。然后，单击" 立即运行"。
  16. 重复步骤8.1.10-8.1.15，每个盖玻片/治疗约10个神经元。
  17. 对于切片的组织，请按照步骤8.18-8.22进行操作。
  18. 使用眼孔，搜索感兴趣的区域。例如，定位海马体的 CA1。
  19. 关闭眼孔并使用 MAP2 通道通过实时扫描找到 MAP2 信号的最佳焦平面。
  20. 在" 采集 "菜单下，选择" 扫描大图像"。接下来，从打开的面板中选择光学按钮的名称以及先前配置的采集设置，在" 捕捉 "面板下。此外，请确保在此面板中选择正确的物镜。
  21. 在" 面积 "面板和目镜下，使用箭头键设置感兴趣区域的边界。接下来，单击" 将大图像保存到文件" ，然后为图像创建保存路径文件名。
  22. 在 "设置" 面板下，确保选中" 多通道捕捉 "，然后在"光学会议"下使用先前配置的采集设置选择 光学按钮的名称。
    注意:可以对大图像使用 z 轴堆栈，但会增加扫描时间。

9. 分析

  1. 与采集设置类似，使用来自所有处理的样本来优化阈值设置。确保阈值优化侧重于降低背景噪声和增强信号，而不会使荧光信号的强度过饱和。确定这些设置后，按照步骤 9.2-9.3 中所述，对用于分析的所有影像应用相同的阈值设置。
  2. 在 ImageJ 中，阈值选项位于"图像"菜单 "下，>调整>阈值"。如果图像 具有深色背景 ，请选择"深色背景"选项。
  3. 接下来，根据先前确定的优化阈值设置调整阈值的上限和下限，然后单击" 应用"。
  4. 对于培养的细胞，使用 MAP2 通道和手绘感兴趣区域 （ROI） 工具为每个神经元（包括树突和体细胞）绘制 ROI。对于切片组织，在切片图像中绘制一个手绘ROI，该图像封装了感兴趣的区域（例如，海马体内CA1的放射性层）。
  5. 获取 ROI 的面积。在 ImageJ 中，测量菜单" 分析">"测量"下的面积。
  6. 按照步骤 9.7-9.9，使用自动检测工具（如 ImageJ 中的粒子分析）检测每个 ROI 中的点点数。
  7. 在"分析"菜单下找到"粒子分析"选项>"分析粒子"。首先，定义点状直径，通常为0.1-3μm2。
  8. 接下来，从显示下拉菜单中选择叠加蒙版选项，然后选中显示结果选项。然后，单击"确定"。
  9. 如果在选择的直径范围下未检测到点状点，请调整范围，直到使用此分析检测到所有点状点。确保对所有图像使用相同的粒子分析设置。
  10. 按照步骤9.11-9.13将点符号的数量除以单个感兴趣区域的区域。
  11. 将 ImageJ 的"结果"弹出窗口中每个图像的结果复制并粘贴到电子表格中。
  12. 首先，确定从哪个文件和样本中获取数据。然后，将 ROI 的面积除以点数。
  13. 然后，清除"结果"弹出窗口中的数据，并重复步骤 9.2-9.12。
  14. 将结果归一化为对照样品:对对照样品的结果（点状/ROI 区域数）求平均值。然后，将所有样品获得的结果除以对照的平均值，以获得归一化结果。对照样本的新平均值应等于 1。

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结果

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

本文介绍了从Heaney等人6 修改的数据，以证明一个预计突触形成增加的实验（有关更多信息和对该机制的更深入讨论，请参阅6 ）。先前，已经证明快速抗抑郁药需要激活抑制性代谢受体GABAB（γ-氨基丁酸亚型B）才能有效13。此外，先前的数据表明，快速抗抑郁药增加突触后标志物14;因此，DetectSyn被用来验证快速抗抑郁药增加突触数量是有效的假设。

在培养的神经元中，测试四种条件。首先，在 图2A的顶部面板中，在与实验对照相同的条件下用载体处理培养的神经元。然而，为了提供 DetectSyn 测定的技术对照，省略了 PSD95 一抗（参见 图 1 了解每种组分如何对信号产生影响）。接下来，在控制面板中，神经元再次用载体处理，但同时接受PSD95和Synapsin1原代。接下来...

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讨论

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

DetectSyn是一种快速测定，它使用接近连接测定来检测彼此相距40nm以内的蛋白质，从而可以检测突触形成。该技术改进了当前的荧光测定，其仅用作突触形成的代理测量。DetectSyn检测彼此位于40nm内（即突触间隙内）的突触蛋白的可量化变化。此外，DetectSyn更具成本效益，并且比电子显微镜和阵列断层扫描等技术花费更少的时间，这些技术旨在测量突触并经典地指定为金标准技术。

DetectSyn是一种高度可定制的技术。任何突触对都可以用来鉴定特定类型突触的形成，只要蛋白质对彼此位于40nm以内。虽然这种令人兴奋的技术有许多应用，但必须注意验证抗体，包括最佳阻断和主要孵育条件，并继续使用其他方法（如免疫荧光）支持其结果。建议在不利用De detectSyn降低抗体结合竞争的单独实验中进行这些支持实验（例如，在同一实验中使用山羊抗PSD95和小鼠抗PSD95可能会减少由于竞争引起的结合）。此外，注意选择在不同宿主中培养的一抗 - 例如，山羊抗PSD95和兔抗突触素1。如果同一主机用于两个主站，则辅助探测器不会区分两个主站。

...

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披露

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

作者报告没有利益冲突。

致谢

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

这项工作得到了美国国立卫生研究院NINDS R01 NS105005（KRG）和NS105005-03S1（KRG），国防部USAMRMC W81XWH-14-1-0061（KRG），NIAAA R01AA016852，NIAAA T32AA007565（CFH）以及FRAXA研究（CFH）和阿尔茨海默氏症协会AARG-NTF-21-852843（KRG），AARF-19-614794-RAPID（KRG）的资助。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
10x PBSFisher ScientificBP39920内部制造的 PBS 也有效。
24 孔板Fisher ScientificFB012929对于组织切片，可能不需要预灭菌板。
50 mL 锥形管Fisher Scientific14-432-22
铝箔Fisher Scientific15-078-290
鸡抗 MAP2 抗体Abcamab5392
透明指甲油Fisher ScientificNC1849418其他透明指甲油也有效。
冷块Fisher Scientific13131012
计算机工作站HP
共聚焦或荧光显微镜尼康A1R HD25
驴抗鸡 FITCFisher ScientificSA1-72000
Duolink 驴抗小鼠 PLUSSigmaDUO92001
Duolink 驴抗兔 MINUSSigmaDUO92005
Duolink 原位检测试剂 Far RedSigmaDUO92013包含连接储备液、扩增储备液、连接酶和聚合酶。
SigmaDUO82040Duolink 原位封固剂
，荧光SigmaDUO82049含有洗涤缓冲液 A 和洗涤缓冲液 B;将洗涤缓冲液 B 在 diH20 中稀释至 1%，以获得 1% 洗涤缓冲液 B。
细尖画笔Fisher ScientificNC9691026貂毛，尺寸 00 或 000，也可以在工艺品商店找到
Fisherbrand 盖玻片：矩形Fisher Scientific12545MP盖玻片对于已经在玻璃盖玻片上的培养神经元来说是不必要的。
Fisherbrand Superfrost Plus 显微镜载玻片Fisher Scientific1255015对于已经在玻璃盖玻片上的培养神经元，可能不需要 Superfrost 载玻片。
冷冻室，-20°;CVWR76449-108
玻璃盖玻片Fisher Scientific125480
甘氨酸Fisher ScientificBP381-1
图像处理软件，例如 NIS Elements、ImageJ
培养箱Fisher Scientific15-015-2633
大培养皿，100 mmFisher ScientificFB0875712
分子级水Fisher ScientificBP24701
小鼠抗突触素 1 抗体突触系统106-011
正常驴血清Jackson ImmunoResearch017-000-121
轨道摇床Fisher Scientific02-106-1013
石蜡膜Fisher Scientific13-374-10
移液器吸头Fisher Scientific02-707-025
移液器Fisher Scientific14-388-100工作体积范围为 3 和微量;L 至 500 µL
塑料巴斯德移液器Fisher Scientific02-708-006
精密镊子/前头Fisher Scientific12-000-122
兔抗 PSD95 抗体Abcamab18258其他抗体对经过优化后也可以工作。
冰箱VWR76470-402
小培养皿，60 毫米Fisher ScientificFB0875713A
计时器Fisher Scientific14-649-17
吐温 20Fisher ScientificBP337-100
含 DAPI Duolink 原位洗涤缓冲液的

参考文献

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