我们描述了两种互补的实验方案,可准确测定S期持续时间 S. cerevisiae 使用EdU(一种胸苷类似物),其可被掺入 体内 并通过显微镜和流式细胞术利用点击化学进行检测。该方法可简便地表征DNA复制的持续时间,并发现突变体中被忽视的复制缺陷。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| α-因子 | Genescript | RP01002 | |
| 牛血清白蛋白(BSA) | Euromedex | 04-100--812-E | |
| 硫酸铜 | Sigma | C1297 | |
| DAPI | Sigma | D9542 | |
| 二磺酸-Cyanine5 叠氮化物(Cy5叠氮化物) | Interchim | FP-JV6320 | 可替代Alexa647-叠氮化物 |
| Dy-530 叠氮化物 | Dyomics | 530-10 | |
| EdU(5-乙炔基-2’-脱氧尿苷) | Carbosynth | NE08701 | |
| 无水乙醇 | Carlo Erba reagents | P013A10D16 | 或等效产品 |
| L-抗坏血酸 | Sigma | A4544 | |
| 碘化丙啶 | Sigma | P4864 | |
| 蛋白酶K | Euromedex | EU0090 | |
| RNase | SIGMA | R5000 | |
| Sytox Green | Invitrogen | S-7020 | |
| 仪器 | |||
| 细胞计数仪 | OLS | CASY | |
| 流式细胞仪 | Agilent | NovoSampler Pro | |
| 摇床培养箱 | Infors | 444-4230 | 或等效产品 |
| 振荡水浴锅 | Julabo | SW22 | 或等效产品 |
| 超声波破碎仪 | Sonics | Vibra cell | |
| 宽场显微镜 | Leica | THUNDER Imager | 或等效产品 |
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