更正：CRISPR/Cas9介导的靶向整合 体内 使用基于同源介导末端连接的策略

摘要

已发布更正声明： 研究乳腺癌及正常细胞中TGF-β信号通路与TGF-β诱导的上皮-间质转化。这些短语 "Surveyor检测法 和 Surveyor 核酸酶" 有 已更新为 "T7E1 检测 " T7 内切核酸酶 I" 分别。 

摘要

已发布更正： 在乳腺癌和正常细胞中研究 TGF-β 信号通路及 TGF-β 诱导的上皮-间质转化。文中已将“surveyor assay”和“Surveyor Nuclease”分别更新为“T7E1 assay”和“T7 endonuclease I”。

方案中的步骤 1.2 已从以下内容更新：

2. sgRNA 的 Surveyor 核酸酶检测
   注：通过 Surveyor 核酸酶检测（也称为 T7 核酸内切酶 I (T7EI) 检测）¹⁷评估用于基因敲入实验的 sgRNA 的靶向效率。选择 DNA 切割效率高且 sgRNA 切割位点与终止密码子之间距离较短的 sgRNA。

至：

2. sgRNA 的 T7 核酸内切酶检测
   注意：通过 T7 核酸内切酶（T7EI）检测法评估用于敲入实验的 sgRNA 的靶向效率¹⁷。应选择 DNA 切割效率高、且 sgRNA 切割位点与终止密码子之间距离较短的 sgRNA。

代表性结果中的图1已从以下内容更新：

图1HMEJ介导的靶向整合 体外.
(A) sgRNA筛选实验方案：六种不同的sgRNA（Cdx2-sgRNA1~Cdx2-sgRNA6）在终止密码子附近 Cdx2 根据在线CRISPR设计工具选择具有较高评分和潜在脱靶效应的位点。原间隔序列邻近基序（PAM）序列以红色显示。B实验设计：将表达sgRNA、Cas9和GFP的Cas9-CMV-GFP表达质粒导入N2a细胞。GFP⁺ 细胞在第3天进行分选以进行Surveyor检测。C) Surveyor 法检测 Cdx2 靶向：为进行Surveyor检测设计了6种不同的sgRNA。正常的N2a细胞基因组DNA作为对照。*，用于实验的sgRNA Cdx2-2A-mCherry 基因敲入实验。D) 基于Gibson组装法构建HMEJ供体质粒的示意图。EHMEJ介导的基因靶向策略示意图 Cdx2 位点。HAL/HAR，左/右同源臂；三角形，sgRNA 靶向位点；OF/OR，外侧正向/反向引物；IF/IR，内侧正向/反向引物。图片改编自先前报道¹⁰. 请点击此处查看此图的放大版本。

至：

图1HMEJ介导的靶向整合 体外.
(A) sgRNA筛选实验方案：六种不同的sgRNA（Cdx2-sgRNA1~Cdx2-sgRNA6）在终止密码子附近 Cdx2 根据在线CRISPR设计工具选择具有较高评分和潜在脱靶效应的位点。原间隔序列邻近基序（PAM）序列以红色标出。B实验设计：将表达sgRNA、Cas9和GFP的Cas9-CMV-GFP表达质粒导入N2a细胞。GFP⁺ 细胞在第3天分选用于T7EI检测。C) T7EI 检测方法 Cdx2 靶向：设计了6种不同的sgRNA用于 T7EI 检测。正常的N2a细胞基因组DNA作为对照。*，所用的sgRNA为 Cdx2-2A-mCherry 基因敲入实验。D) 基于Gibson组装法构建HMEJ供体质粒的示意图。EHMEJ介导的基因靶向策略示意图 Cdx2 位点。HAL/HAR：左/右同源臂；三角形：sgRNA 靶向位点；OF/OR：外侧正向/反向引物；IF/IR：内侧正向/反向引物。本图改编自先前报道¹⁰. 请点击此处以查看此图的放大版本。

方案

已发布更正： 在乳腺癌和正常细胞中研究TGF-β信号通路及TGF-β诱导的上皮-间质转化。文中已将“surveyor assay”和“Surveyor Nuclease”分别更新为“T7E1 assay”和“T7 endonuclease I”。

方案中的步骤 1.2 已从以下内容更新：

2. sgRNA 的 Surveyor 核酸酶检测
   注意：用于敲入实验的 sgRNA 的靶向效率通过 Surveyor 核酸酶检测（也称为 T7 内切酶 I (T7EI) 检测）进行评估¹⁷。应选择 DNA 切割效率高且 sgRNA 切割位点与终止密码子之间距离较短的 sgRNA。

至：

2. sgRNA 的 T7 核酸内切酶检测
   注意：通过 T7 核酸内切酶（T7EI）检测法评估用于敲入实验的 sgRNA 的靶向效率¹⁷。选择 DNA 切割效率高、且 sgRNA 切割位点与终止密码子之间距离较短的 sgRNA。

代表性结果中的图1已从以下内容更新：

图1HMEJ介导的靶向整合 体外.
(A) sgRNA筛选实验方案：六种不同的sgRNA（Cdx2-sgRNA1~Cdx2-sgRNA6）在终止密码子附近 Cdx2 根据在线CRISPR设计工具选择具有较高评分和潜在脱靶效应的位点。原间隔序列邻近基序（PAM）序列以红色标出。B实验设计：将表达sgRNA、Cas9和GFP的Cas9-CMV-GFP表达质粒导入N2a细胞。GFP⁺ 细胞在第3天进行分选，用于Surveyor检测。C) Surveyor 法检测 Cdx2 靶向：为调查者检测设计了6种不同的sgRNA。正常的N2a细胞基因组DNA作为对照。*，用于实验的sgRNA Cdx2-2A-mCherry 基因敲入实验。D) 基于Gibson组装法构建HMEJ供体质粒的示意图。EHMEJ介导的基因靶向策略示意图 Cdx2 位点。HAL/HAR：左/右同源臂；三角形：sgRNA靶向位点；OF/OR：外侧正向/反向引物；IF/IR：内侧正向/反向引物。本图改编自先前报道¹⁰. 请点击此处以查看此图的放大版本。

至：

图1HMEJ介导的靶向整合 体外.
(AsgRNA筛选实验方案：六种不同的sgRNA（Cdx2-sgRNA1~Cdx2-sgRNA6）在终止密码子附近 Cdx2 根据在线CRISPR设计工具选择具有较高评分和潜在脱靶风险的位点。原间隔序列邻近基序（PAM）序列以红色标出。B实验设计：将表达sgRNA、Cas9和GFP的Cas9-CMV-GFP表达质粒导入N2a细胞。GFP⁺ 第3天对细胞进行分选以进行T7EI检测。C) T7EI 检测方法 Cdx2 靶向：设计了6种不同的sgRNA用于 T7EI 检测。正常的N2a细胞基因组DNA作为对照。*，所用的sgRNA Cdx2-2A-mCherry 基因敲入实验。D) 基于Gibson组装法构建HMEJ供体质粒的示意图。EHMEJ介导的基因靶向策略示意图 Cdx2 位点。HAL/HAR，左/右同源臂；三角形，sgRNA 靶向位点；OF/OR，外侧正向/反向引物；IF/IR，内侧正向/反向引物。本图改编自先前报道¹⁰. 请点击此处以查看此图的放大版本。