本文采用超高效液相色谱-高分辨串联质谱法（UPLC-MS/MS），对原生及经醋制处理的莎草根（CR）在原发性痛经大鼠模型中的样本进行了比较分析。研究考察了经CR与醋制莎草根（CRV）处理的大鼠体内代谢物及其样本成分在血液中水平的变化。
需要JoVE订阅才能观看此内容。 请登录或开始免费试用
本文内容
摘要
摘要
莎草根（CR）在中国广泛用于妇科，是治疗女性疾病的一种常用药物。由于醋制后莎草根的镇痛作用增强，临床上通常使用醋制莎草根（CRV）。然而，醋制增强其镇痛作用的机制尚不明确。本研究采用超高压液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）检测痛经大鼠经CR与CRV治疗后外源性成分及其代谢物在血液中的水平变化。结果表明，这两组大鼠血液中15种成分和2种代谢物的水平存在差异。其中，CRV组中(-)-桃金娘醇和[(1R,2S,3R,4R)-3-羟基-1,4,7,7-四甲基双环[2.2.1]庚-2-基]乙酸的含量显著高于CR组。CRV通过调节花生四烯酸和亚油酸代谢以及不饱和脂肪酸的生物合成，降低具有促炎、血小板聚集和血管收缩活性的2系列前列腺素和4系列白三烯水平，从而发挥镇痛作用。本研究揭示了醋制可增强莎草根的镇痛效果，有助于进一步理解CRV的作用机制。
引言
原发性痛经（PD）是妇科临床最常见的病症，其特征是在无生殖系统盆腔病理改变的情况下，于月经来潮前或经期出现腰痛、肿胀、腹痛或腹部不适1。一项关于其患病率的报告显示，85.7%的女性学生患有原发性痛经2。低剂量口服避孕药是目前的标准治疗方法，但其不良反应（如深静脉血栓）日益受到关注3。口服避孕药使用者中深静脉血栓的发生率>每1,000名女性中超过1例，且风险在用药最初的6–12个月以及年龄超过40岁的使用者中最高4。
长久以来用于传统中医的莎草根茎（CR）来源于干燥的莎草科植物莎草的根茎 香附子 L. 的 莎草科 家族。CR 调节月经失调，并缓解抑郁和疼痛5. CR 在妇科中被广泛应用，并被视为一种治疗女性疾病的通用药物6醋制川芎（CRV）在临床上通常被使用。与生川芎（CR）相比，CRV在调经和镇痛方面表现出更强的调节作用。现代研究表明，CR通过抑制环氧化酶-2（COX-2）及其后续前列腺素（PGs）的合成，从而发挥抗炎作用。同时，CR具有无副作用的镇痛效果。7....
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
方案
所有动物相关实验均经重庆市中医院实验伦理委员会批准。本实验选用24只8至10周龄、体重为200克±20克的雌性Sprague Dawley大鼠（SD大鼠）。
1. 提取物的制备
- 计算
- 计划向六只Sprague-Dawley大鼠（10 g/[kg∙天]，连续3天。使用浓度为1 g/mL的CR或CRV提取物（每1 mL提取物由1 g药材制得）。
注：CR 的用量为 6–10 g。本研究采用最大用量 10 g 作为给药剂量。由于成年人平均体重为 60 kg，成人剂量为 0.1667 g/kg。根据体重换算算法24，由于人与大鼠之间的剂量转换系数为6.3，大鼠的给药剂量为1.05 g/kg。为增强药效，大鼠剂量提高10倍至10.5 g/kg。为便于计算和实际操作，实验中设定剂量为10 g/kg。例如，按计算若共需36 g的CR或CRV，则中药至少需制备两次。因此，共需200 g的CR——其中100 g作为CR使用，另100 g经醋制备成CRV。 - 使用公式（计算每只大鼠应给予的 CR 或 CRV 体积1):
V = 10 g/(kg∙天 × 200 g/(1 g/mL) = 2 mL (1
- 计划向六只Sprague-Dawley大鼠（10 g/[kg∙天]，连续3天。使用浓度为1 g/mL的CR或CRV提取物（每1 mL提取物由1 g药材制得）。
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
结果
痛经模型实验分析
对照组大鼠在30分钟内未出现扭体反应，因为这些大鼠未接受腹腔注射催产素和苯甲酸雌二醇以诱发疼痛。模型组、CR组和CRV组大鼠在注射催产素后表现出明显的扭体反应。这些结果表明，苯甲酸雌二醇与催产素联合使用在诱导痛经方面具有显著效果。模型组与对照组之间在PGF2α、PGE2以及PGF2α/PGE2水平上的差异具有统计学意义（P < 0.001，P < 0.05），进一步验证了该模型的有效性（图1）。
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
讨论
由于中药种类繁多且性质各异，这些草药在临床实践中有时疗效不佳，这可能与中药的炮制和煎煮方法不当有关。随着现代科学技术的应用，中药的作用机制正变得日益清晰29,30。本研究表明，制川乌（CR）和醋制川乌（CRV）均对帕金森病模型大鼠具有治疗作用，且CRV的治疗效果更为显著。CRV的作用机制可能与醋制炮制工艺影响了CR中被吸收入血的化学成分有关，也可能涉及亚油酸代谢及不饱和脂肪酸的生物合成。图10展示了CRV在镇痛作用中的潜在通路。
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
披露
作者声明不存在任何竞争性经济利益。
致谢
本工作得到重庆市卫生健康委员会中医药科技项目（项目编号：ZY201802297）、重庆市自然科学基金面上项目（项目编号：cstc2019jcyj-msxmX065）、重庆市现代山地特色高效农业技术体系创新团队建设计划2022[10]以及重庆市卫生健康委员会中药炮制学重点学科建设项目的支持。
....访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 乙腈 | Fisher Scientific，匹兹堡，宾夕法尼亚州，美国 | 197164 | |
| BECKMAN COULTER Microfuge 20 | Beckman 库尔特公司 | MRZ15K047 | |
| 苯甲酸雌二醇 | 上海麦克林生化有限公司 | C10042616 | |
| 甲酸 | Fisher Scientific，匹兹堡，宾夕法尼亚州，美国 | 177799 | |
| LC 30A 系统 | 岛津，日本京都 | 228-45162-46 | |
| 橄榄油 | 上海源叶生物科技有限公司 | H25A11P111909 | |
| 催产素合成 | 浙江肽类生物学有限公司 | 2019092001 | |
| 大鼠PGF2α ELISA试剂盒 | 上海逸迈生物工程有限公司 | 202101 | |
| 大鼠前列腺素E2 ELISA试剂盒 | 上海逸迈生物工程有限公司 | EDL202006217 | |
| SPF级Sprague-Dawley大鼠 | 湖南赛佳实验动物有限公司 | 证书编号 SCXK (湖南) 2019-0004 | |
| Tecan Infinite 200 PRO | Tecan Austria GmbH, Austria | 1510002987 | |
| Triple TOF 4600 系统 | SCIEX，美国马萨诸塞州弗雷明汉 | BK20641402 | |
| 水 | Fisher Scientific，匹兹堡，宾夕法尼亚州，美国 | 152720 |
参考文献
- Yu, W. Y., et al. Acupuncture for primary dysmenorrhea: A potential mechanism from an anti-inflammatory perspective. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2021, 1907009(2021).
- Rafique, N., Al-Sheikh, M. H.
访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。
重印与许可
