Method Article

使用液相色谱-串联质谱分析原发性痛经大鼠的原始和加工的Cyperi Rhizoma样品

DOI:

10.3791/64691

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December 23rd, 2022

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1Chongqing Engineering Research Center of Pharmaceutical Evaluation of Chinese Medicine, Chongqing Academy of Chinese Materia Medica

In This Article

Summary

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在这里，使用超高效液相色谱-高分辨率串联质谱（UPLC-MS/MS）对原发性痛经大鼠的原始和加工的Cyperi rhizoma（CR）样品进行了比较分析。检查CR处理的大鼠和醋处理的CR（CRV）大鼠之间代谢物和样品成分的血液水平变化。

Abstract

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根瘤（CR）广泛用于妇科，是我国治疗妇女疾病的全科药物。由于用醋加工后CR的镇痛作用增强，因此临床上一般采用醋处理的CR（CRV）。然而，醋加工增强镇痛作用的机制尚不清楚。本研究采用超高压液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）技术检测CR处理和CRV处理痛经大鼠外源成分和代谢物血液水平的变化。结果显示，这些大鼠血液中的15种成分和两种代谢物含量不同。其中，CRV组的（-）-肉豆蔻醇和[（1R，2S，3R，4R）-3-羟基-1，4，7，7-四甲基双环[2.2.1]庚-2-基]乙酸水平明显高于CR组。CRV降低具有促炎、血小板聚集和血管收缩活性的2系列前列腺素和4系列白三烯的水平，并通过调节花生四烯酸和亚油酸代谢以及不饱和脂肪酸的生物合成提供镇痛作用。本研究表明，醋加工增强了CR的镇痛作用，有助于我们了解CRV的作用机制。

Introduction

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原发性痛经（PD）是临床妇科中最普遍的疾病。它的特征是月经前或月经期间背痛、肿胀、腹痛或不适，生殖系统中没有盆腔病变1.一份关于其患病率的报告显示，85.7%的学生患有PD2。低剂量口服避孕药是标准疗法，但其不良副作用，如深静脉血栓形成，引起了越来越多的关注3。口服避孕药使用者深静脉血栓形成的患病率为每 1，000 名妇女 >1 例，在最初 6-12 个月和 40 岁以上的使用者中风险最高4。

长期用于传统中药（TCM），Cyperi rhizoma（CR）来源于Cyperaceae家族Cyperus rotundus L.的干燥根茎。CR调节月经紊乱，缓解抑郁和疼痛5.CR广泛用于妇科，被认为是治疗女性疾病的普通药物6。用醋（CRV）加工的CR通常用于临床。与CR相比，CRV显示出对月经和疼痛缓解的增强调节。现代研究表明，CR抑制环氧合酶-2（COX-2）和随后前列腺素（PGs）的合成，从而达到抗炎作用。同时，CR表现出无副作用的镇痛作用7，使CR成为痛经患者的不错....

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Protocol

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所有与动物有关的实验均经重庆中医药研究院实验伦理委员会批准进行。本实验使用了24只8-10周龄，体重200克±20克的雌性Sprague Dawley大鼠（SD）。

1. 提取的准备

  1. 计算
    1. 计划将CR或CRV提取物施用于六只Sprague-Dawley大鼠（10g / [kg∙day]）的治疗组3天。使用浓度为 1 g/mL 的 CR 或 CRV 提取物（1 mL 提取物来自 1 g 草药）。
      注意:CR的剂量为6-10克。在这项研究中，使用最大剂量10g作为剂量。由于成年人的平均体重为60公斤，成人剂量为0.1667克/公斤。根据重量转换算法24，由于人与大鼠之间的剂量转换系数为6.3，因此大鼠的剂量为1.05 g/kg。大鼠用药剂量增加10倍至10.5g/kg。为方便计算和实际实验，剂量设定为10 g/kg。例如，通过计算，如果总共需要36克CR或CRV，则应至少制备两次中草药。因此，需要200 g CR - 使用100 g CR作为CR，并将100 g CR加工成CRV。
    2. 使用公式（1）计算每只大鼠要施加的CR或CRV的体积:
      V = 10 克/（公斤∙天） × 200 克/（1 克/毫升） = 2 毫升 （1）

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Results

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痛经模型实验分析
对照组30分钟内无扭动反应，因为这些大鼠未腹腔注射催产素和苯甲酸雌二醇引起疼痛。模型组、CR组和CRV组的大鼠在注射催产素后表现出大量的扭动反应。这些结果证明了苯甲酸雌二醇和催产素联合用药诱导痛经的疗效。模型组和对照组之间PGF 2α、PGE 2和PGF2α/PGE2水平的差异显著（P < 0.001，P < 0.05），证明了 模型的有效性（图1）。

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图1:子宫组织中的PGF 2 α<.......

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Discussion

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由于中药种类繁多，性质各异，这些中药材有时在临床上不起作用，这可能是由于中药加工和煎煮不当造成的。随着当代科学技术的使用，中医的机制变得越来越明显29，30.本研究表明，CR和CRV均对PD模型大鼠具有治疗效果，且CRV的治疗效果更为显著。CRV的作用机制可能与醋加工可能影响被吸收到血液中的CR成分有关，并且可能与亚油酸代谢和不饱和脂肪酸的生物合成有关。 图 10 描述了 CRV 在缓解疼痛方面的作用的潜在途径。

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图10:CRV增强镇痛作用的机制。 结果显示，血.......

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Disclosures

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提交人声明，他们没有相互竞争的经济利益。

Acknowledgements

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这项工作得到了重庆市卫生和计划生育委员会中医药科技项目（项目编号:ZY201802297）、重庆市自然科学基金面上项目（项目编号:cstc2019jcyj-msxmX065）、重庆市现代山区特色高效农业科技体系创新团队建设规划2022[10]、重庆市卫生健康委员会中药重点学科建设项目的支持。 医药加工。

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
乙腈 Fisher Scientific，美国宾夕法尼亚州匹兹堡197164
BECKMAN COULTER Microfuge 20Beckman 库尔特公司
苯甲酸雌二醇上海麦克林生化有限公司C10042616
甲酸Fisher Scientific， 匹兹堡， 宾夕法尼亚州， 美国177799
LC 30A 系统日本京都岛津 228-45162-46
橄榄油上海元业生物科技有限公司H25A11P111909
合成催产素浙江多肽生物有限公司
大鼠 PGF2α ELISA试剂盒上海莱迈生物工程有限公司202101
大鼠PGFE<>2 ELISA试剂盒上海莱迈生物工程有限公司EDL202006217
SPF Sprague-Dawley大鼠湖南SJA实验动物有限公司证书编号 SCXK（湖南）2019-0004
Tecan Infinite 200 PRO  Tecan Austria GmbH， 奥地利1510002987
Triple TOF 4600 systemSCIEX， Framingham， MA， USABK20641402
waterFisher Scientific， 匹兹堡， 宾夕法尼亚州，美国 152720
MRZ15K0472019092001

References

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  1. Yu, W. Y., et al. Acupuncture for primary dysmenorrhea: A potential mechanism from an anti-inflammatory perspective. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2021, 1907009(2021).
  2. Rafique, N., Al-Sheikh, M. H.

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Tags

Cyperi RhizomaVinegar ProcessingPrimary DysmenorrheaLiquid ChromatographyTandem Mass SpectrometryMetabonomics AnalysisDifferential MetabolitesKEGG PathwayPrincipal Component AnalysisOrthogonal Partial Least Squares

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