用于免疫臭鼬和其他狂犬病媒介狂犬病的诱捕-疫苗接种-释放方案

Summary

在这里，我们提出了一个方案，以证明对易患狂犬病的食肉动物的安全诱捕-疫苗接种-释放 （TVR） 技术。

Abstract

通过分发含疫苗的诱饵对野生动物进行狂犬病口服疫苗接种，在欧洲和北美被广泛用作管理工具。在过去的几十年里，成功的计划以重要的水库为目标，包括郊狼、狐狸、貉子和浣熊，以进行预防和控制。然而，其他物种（例如臭鼬）或某些栖息地（例如城市）可能不太适合口服疫苗接种，需要考虑额外的策略。诱捕-疫苗接种-释放 （TVR） 是另一种替代方法，需要使用活体诱捕器来捕捉目标野生动物。诱捕器沿网格分布在合适、可接近的栖息地。通过标记来识别捕获的动物，用灭活的商业疫苗肠外接种疫苗，进行性别鉴定、老化、称重并在捕获地点释放。自 2001 年以来，在亚利桑那州弗拉格斯塔夫发现了狂犬病病毒从蝙蝠到臭鼬等中食肉动物的跨物种传播。在过去的二十年里，TVR 已被用作在该区域此类事件中预防和控制狂犬病的一种安全有效的方法。

Introduction

狂犬病病毒 （RABV） 是一种致命的人畜共患疾病，在全球范围内影响人类健康。世界卫生组织 （WHO） 报告称，每年约有 59,000 人死亡，主要发生在亚洲和非洲国家。此外，每年有 2900 万人因被动物咬伤而接受了暴露后疫苗接种。无法准确衡量对野生动物种群的影响，但在地理空间条件有利的情况下，野生动物种群在爆发事件期间可能会经历高死亡率。Rosatte 报告说，在报告 RABV 爆发后的几个月内，124 平方公里（48 平方英里）的浣熊 （Procyon lotor） 数量下降了约 71%¹。

RABV 的控制和管理对于保护人类健康、家畜和脆弱的野生动物种群至关重要。由于所有哺乳动物都容易受到 RABV 的影响，随着时间的推移，RABV 已经适应了几种不同的哺乳动物物种，这些物种现在充当宿主。这些宿主物种及其相关变体通常栖息在特定的地理区域。在这些区域内，确实会溢出到非宿主（跨物种传播），但在大多数情况下，受感染的非宿主物种不会将感染携带给种群中的其他个体。宿主转移是病毒成功适应新宿主的罕见事件。这些事件是最危险的，因为它们会影响 RABV 的传播并破坏任何已实施的 RABV 管理工作²。

在北美，RABV 管理工作集中在几种特定的陆生野生动物宿主物种上。口服狂犬病疫苗接种 （ORV） 计划已被证明可有效管理大型景观范围内的狂犬病。ORV 利用空中和手动部署含有口服 RABV 疫苗的小诱饵。这些诱饵分布在景观上;任何遇到这些数据包的目标野生动物在咬伤它们时都会口服 RABV 疫苗。ORV 的使用^{对于控制欧洲}的红狐 （Vulpes vulpes） RABV 3、加拿大的浣熊 RABV 以及美国的郊狼 （Canis latrans） 和浣熊至关重要⁴。ORV 诱饵已被证明是 RABV 管理计划中有价值的工具，因为它们可以在景观的广大区域实施并减少管理计划中所需的人员数量。ORV 计划的一个缺点是它在成功为臭鼬物种接种疫苗方面效率低下。当前 ORV 包的疫苗摄取不足似乎是当前野外野生臭鼬种群中 ORV 有效性的挫折⁵。

诱捕-疫苗接种-释放 （TVR） 是一种替代的狂犬病管理工具，偶尔与 ORV 同时使用。TVR 的目标是增加人群中接种狂犬病疫苗的个体数量。因为它需要劳动密集型的动物诱捕，并且每平方公里比 ORV 更昂贵⁶，所以 TVR 的规模比 ORV 小得多，并且经常应用于 ORV 存在许多挑战的城市地区⁷。

在美国，臭鼬的诱捕-疫苗接种-释放在亚利桑那州弗拉格斯塔夫已经多次有效。自 2001 年以来，弗拉格斯塔夫在条纹臭鼬 （Mephitis mephitis） 种群中反复爆发了大棕蝙蝠 （Eptesicus fuscus） RABV 变体⁸。从 2001 年到 2011 年（在美国农业部、动植物卫生检验局、野生动物服务局领导的多项不同的 TVR 工作中），842 只动物被诱捕、接种疫苗和释放，其中包括 753 只条纹臭鼬（野生动物服务捕获数据）。每一次努力都阻止了臭鼬的蝙蝠狂犬病爆发。2021 年，当在弗拉格斯塔夫的两个高度城市化地区确认狂犬病条纹臭鼬时，这种跨物种现象再次发生。野生动物服务局立即协调并在这些地区启动了一项 TVR 计划，以与科科尼诺卫生服务部和几个州机构合作遏制疫情。本手稿的目标是安全地演示针对臭鼬的 TVR 程序中的步骤。

诱捕和疫苗接种所需的设备如下：

TVR 现场设备
所有使用设备的详细列表可以在随附的 材料表 文件中找到。但是，需要对所使用的“木制柱塞”进行一些澄清。这些是手工制作的装置，由用于手柄的木销组成。固定在销钉末端的是一块切割成陷阱开口尺寸的胶合板。由于我们使用了三种不同尺寸的疏水阀，因此我们构建了以下尺寸的柱塞（6 英寸 x 6 英寸、8 英寸 x 8 英寸、10 英寸 x 10 英寸）（图 1）。此外，只有在处理臭鼬时才需要陷阱盖。陷阱覆盖材料可以是帆布、旧防水布或我们用过的一次性塑料布。

个人防护装备 （PPE）
现场工作人员在参加任何 TVR 计划之前必须接种暴露前狂犬病疫苗。TVR 工作所需的个人防护装备包括护目镜，例如一次性安全防护罩、实验室护目镜或安全眼镜。一次性连体服是防止臭鼬喷雾剂中所含的许多不同挥发性化合物的最佳保护。（注意：在处理浣熊或狐狸时不需要西装）。一次性丁腈手套可防止各种化学品和液体的侵害，并防止被捕获动物的唾液和含有病原体的体液。

陷阱准备和部署
我们使用了三种尺寸的实时捕获陷阱：小型（7 英寸 x 7 英寸 x 24 英寸）、中型（9 英寸 x 9 英寸 x 26 英寸）和大型（10 英寸 x 12 英寸 x 32 英寸）（图 1）。在野外部署诱捕器之前，应使用肥皂和水彻底清洗。捕集器应在露天放置数周至数月，以消除异味。触发机构在设置前需要时进行测试和维修。每个带有诱捕线的诱捕器上都安装了标有“狂犬病媒介”的警告标签。每个陷阱附近都张贴了一个额外的狂犬病警告标志;此辅助警告提供一般陷印信息并提供程序联系信息。陷阱放置在动物旅行路线和喂食地点内或附近。应选择对动物造成最大压力的位置，包括与天气相关的事件和人类活动的干扰。已建立的诱捕位置将获得唯一的名称，并且该位置将记录在手持式 GPS 装置中。

Protocol

本协议中展示的动物安全处理和照顾符合 APHIS 野生动物服务局制定的标准。

1. 疫苗接种方案

1. 制备
   1. 穿戴个人防护装备，包括面罩/护目镜、丁腈手套和工作服。
   2. 从包装中取出一对带编号的耳标，以标记捕获的动物。在数据表上记录耳标编号，并将其放入标有耳标编号的可重复密封塑料袋中，以确保其安全和井然有序，直到准备好部署。
   3. 安静而冷静地接近陷阱。如果捕获了臭鼬，请使用一块防水布、粗麻布或塑料布盖住陷阱并保护自己免受任何臭鼬喷雾的伤害。
   4. 小心地将盖子缠绕在疏水阀上，并使用钢弹簧夹将其固定到疏水阀上。浣熊或狐狸不需要遮盖物。
   5. 小心地将 Trap 放置在其末端，使 Trap 的门朝上（朝向天空）。
2. 接种疫苗
   1. 一旦捕获的动物移动到陷阱底部，打开门并将木制柱塞放入陷阱内，放在动物身上。
   2. 对动物施加轻柔的压力，以防止动物自由移动。使用机械固定装置安全地为动物接种疫苗和标记。
   3. 从冷却器中取出狂犬病疫苗，并将正确剂量 （1 mL） 吸入 3 mL 注射器中。将耳标放在动物的三明治袋中易于取用的位置。
   4. 小心地拉开捕集阱周围的盖子，找到接种疫苗的区域。
   5. 小心地将针头插入动物后腿的肌肉组织中，然后平稳地按下柱塞以接种狂犬病疫苗。
   6. 将用过的注射器丢弃在锐器容器中。
   7. 将诱捕器放置在可触及耳朵的位置，然后将一个金属耳标放入钳子上的定位槽中。
   8. 将耳标的开口端放在耳朵上，均匀轻柔地按压，直到钳柄停止。在另一只耳朵上重复该序列。
   9. 将陷阱放在其末端，取下柱塞，关闭陷阱门，然后将手持式秤的钩端连接到陷阱上。轻轻提起疏水阀并保持稳定。在数据表上记录陷阱和动物的重量。
   10. 将疏水阀平放并放置盖子，使其不再缠绕在疏水阀上，而是位于疏水阀的顶部。
   11. 使用手柄轻轻地将诱蚊阱从地面上提起，并将手持式镜子放在诱捕阱下方。利用动物在镜面反射中的倒影，确定动物的性别。记录在数据表上。
       注意：镜子不是给狐狸或浣熊做爱所必需的。
   12. 估计动物的年龄是成年还是幼年。记录在数据表上。
   13. 完成数据表填写。带有存储区域的金属剪贴板在恶劣天气下最能保护床单，并在诱捕过程中将它们保存在一个地方。
   14. 使用金属夹将活板门保持在打开位置。慢慢后退，让动物在没有压力的情况下离开陷阱。
   15. 动物离开后，重新称重空陷阱，确保夹子和保护盖留在它身边。从之前记录的重量中减去此重量，即可计算出动物的体重。

Results

我们实施了称为 TVR 的地面 RABV 管理技术，以解决亚利桑那州弗拉格斯塔夫市的 RABV 疫情（图 2）。该项目的目标不是评估 TVR 的有效性，而是对 RABV 检疫区内的中食肉动物进行疫苗接种的紧急响应，并最大限度地减少对公共卫生的任何威胁。从 2021 年 8 月到 2021 年 12 月，弗拉格斯塔夫警察局和弗拉格斯塔夫动物控制中心收到了几只生病的条纹臭鼬的报告;这些臭鼬随后被安乐死并进行了 RABV 检测。在此期间公众报告的死臭鼬也被提交进行测试。总共有 16 只条纹臭鼬的 RABV 检测呈阳性，其中 4 只在弗拉格斯塔夫西部，12 只在弗拉格斯塔夫东部。作为回应，我们于 2021 年 12 月初启动了 TVR 工作，并记录了以下疫苗接种成功。在西弗拉格斯塔夫，我们为 27 只条纹臭鼬、3 只灰狐和 4 只浣熊接种了疫苗。此外，我们还捕获了 37 次条纹臭鼬。在弗拉格斯塔夫东部，我们为 106 只条纹臭鼬和 2 只浣熊接种了疫苗。此外，我们还捕获了 110 次条纹臭鼬。诱捕工作在整个 2022 年都在持续进行。在此期间，在两个诱捕区都没有检测到 RABV 阳性的臭鼬。2022 年 7 月和 8 月，在弗拉格斯塔夫南部的一个社区发现了 3 只患有狂犬病的臭鼬（图 3）。我们立即在这个新地区协调并启动了 TVR，在那里我们为 22 只条纹臭鼬、1 只猪鼻臭鼬和 10 只浣熊接种了疫苗。重新捕获的动物包括 34 只条纹臭鼬和 1 只猪鼻臭鼬。南弗拉格斯塔夫的诱捕活动从 7 月下旬开始，并持续到 2022 年剩余时间。在随后的几个月里，在弗拉格斯塔夫南部没有发现更多的狂犬病臭鼬。TVR 区域以外的当地害虫防治公司又捕获了 15 只臭鼬。我们与害虫防治公司协调，在动物被释放之前为它们接种疫苗。

TVR 等管理计划对控制 RABV 有效，因为它们减少了野生动物种群中存在的易感个体的数量。此处提供的结果（表 1）表明该方案在为野生动物接种 RABV 疫苗方面的有效性和成功性。如前所述，在实施 TVR 后，我们没有观察到新的 RABV 病例。（图 4）TVR 具有直接接种捕获动物的明显优势。相比之下，ORV 不能保证目标野生动物会吸收随机分布的诱饵。TVR 保证每只捕获的动物都将接种疫苗。评估这些接种疫苗的动物在阻止 RABV 传播方面的有效性是困难的，但是当我们尝试主观分析结果时，我们可以确定，在这些城市地区拥有 190 只完全接种疫苗的中食肉动物可以减少对公共卫生的任何威胁。

年	陷阱之夜	捕获总数	条纹臭鼬	浣 熊	灰狐	猪鼻臭鼬
			吨 （V）	吨 （V）	吨 （V）	吨 （V）
2021 年 （12 月）	180	4	4 (4)	0 (0)	0 (0)	0(0)
2022	5,343	367	346 (166)	16 (16)	3 (3)	2 (1)
总	5,523	371	350 (170)	16 (16)	3 (3)	2 (1)

表 1：2021-2022 年在亚利桑那州弗拉格斯塔夫的 TVR 手术期间接种 RABV 疫苗的食肉动物。 T = 捕获的动物总数，V = 成功接种疫苗和放行的不同个体的数量。

图 1：疏水阀和柱塞尺寸。 （左）最小的疏水阀 7 英寸 x 7 英寸 x 24 英寸，（中）中等 9 英寸 x 9 英寸 x 26 英寸，（右）和大 10 英寸 x 12 英寸 x 32 英寸。 请单击此处查看此图的较大版本。

图 2：RABV 阳性臭鼬，美国亚利桑那州弗拉格斯塔夫，2021-2022 年。 2021 年至 2022 年在亚利桑那州弗拉格斯塔夫市发现的 RABV 阳性臭鼬地图。红点表示检测到 RABV 阳性臭鼬的位置。蓝色多边形显示了城市范围内的 TVR 陷印区域。 请单击此处查看此图的较大版本。

图 3：南弗拉格斯塔夫 TVR 区域。 2021 年亚利桑那州弗拉格斯塔夫南部已建立的诱捕线航拍图。红点表示检测到狂犬病阳性动物的位置。绿点表示未捕获任何动物的陷阱的位置。蓝点表示已成功捕获、接种疫苗和释放动物的陷阱位置。蓝点附近的白色数字表示在该诱捕地点接种了疫苗的动物数量。橙色圆点表示仅重新捕获了以前接种疫苗的动物的诱捕点。数据表显示了在该陷阱线上捕获并接种了多少物种。 请单击此处查看此图的较大版本。

图 4：2021-2022 年弗拉格斯塔夫每月 RABV 阳性臭鼬和 TVR 疫苗接种。 红线代表 2021 年 7 月至 2022 年 12 月在弗拉格斯塔夫发现的 RABV 阳性动物。蓝线显示 2021 年 12 月至 2022 年 12 月期间接种疫苗的动物数量。蓝线上方的数字表示该特定月份有多少食肉动物接种了疫苗。 请单击此处查看此图的较大版本。

Discussion

美国疾病控制和预防中心估计，每年约有 55,000 名美国人接受暴露后预防 （PEP），每次暴露的平均费用约为 3,600 美元⁹。与狂犬病相关的主要经济影响是管理该疾病的成本以及预防暴露后人类死亡的治疗。减少健康问题和经济影响的关键是成功为陆地水库物种接种疫苗¹⁰。TVR 计划是一种管理工具，用于干预威胁人类健康、家畜和野生动物的疫情。TVR 在应对小规模狂犬病爆发方面最为有效，因为在较大的景观规模上采用 TVR 非常昂贵且耗费人力⁶。尽管存在这些缺点，但 TVR 是一种有价值的狂犬病管理工具，已多次证明可以通过为宿主物种接种疫苗来有效阻止疾病的传播^11,12。本手稿中演示的 TVR 协议是为了应对亚利桑那州弗拉格斯塔夫市的狂犬病疫情，自 2001 年以来，该市在条纹臭鼬种群中反复爆发了大棕色 RABV^{疫情 8}。该 TVR 计划基于 Rosatte 进行的一项 TVR 研究，在该研究中，臭鼬和浣熊在安大略省大都会¹³ 进行了狂犬病肌肉注射疫苗。该协议解决了如何安全成功地为捕获的条纹臭鼬和其他中食肉动物接种疫苗。

该协议中最重要的步骤之一是安全地固定动物。动物需要安全，但固定力不应以任何方式伤害动物。适当的固定可以防止动物在注射过程中拉开，从而确保动物接受全剂量的疫苗 （1 mL）。此外，安全的动物无法咬和抓用于安装耳标的工具。这有助于通过缩短处理每只动物所需的时间来减轻每只动物的压力。

我们遇到的一个挑战是对在大型（10 英寸 x 12 英寸 x 32 英寸）陷阱中捕获的臭鼬进行疫苗接种和耳标。这个过程可能很困难，因为它给了臭鼬更多的空间来从陷阱的侧面拉开，并且远离工具。当捕获幼年臭鼬时，这个问题更加明显。这些情况需要对我们的加工技术进行一些修改。在这些情况下，我们会使用小陷阱的木制柱塞将臭鼬困在陷阱的角落，并通过门开口从上方处理它们。这使得处理臭鼬成为可能，但事实证明它仍然具有挑战性。

我们记录了所有三种大小的陷阱中的臭鼬捕获。浣熊的捕获记录在中型和大型陷阱中，而灰狐则只在大型陷阱中捕获。一些动物往往会习惯这些陷阱并经常被重新捕获。诱捕器不断移动到新位置有助于减少重新捕获，并有机会捕捉景观中的新个体并为其接种疫苗。

TVR 的一个限制是可以有效治疗的区域大小。在大规模狂犬病管理行动中，TVR 通常与 ORV 结合使用，以覆盖大面积的景观。TVR 本身的覆盖范围要小得多，最适合在城市地区用作快速应急响应，或者在我们的例子中，解决臭鼬种群中的狂犬病爆发。TVR 工作也可能被证明是昂贵的，估计每处理 km² 的成本为 625.00 美元¹²。这些成本可能会有很大差异，因为更大的区域需要更多的人员和设备，从而增加成本。

以前的工作确定接种 1 mL 狂犬病疫苗可有效刺激中食肉动物产生狂犬病抗体¹⁴。有几篇基于 TVR 的论文提到了动物的疫苗接种 1,12,13,14，但我们找不到任何已发表的文章，详细解释了接种疫苗的方案。因此，我们无法将本手稿中提供的方案与现有方法进行比较。本手稿中共享的材料和方法将使现场工作人员能够为野生动物种群提供精确、有效的疫苗接种。该协议已被证明有效，并将继续用于正在进行的和未来的 TVR 工作。

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
#8 x 1-1/2 英寸 R4 多用途星形凹头螺钉（每包110个）	Home Depot	96085	用于将基座固定到活塞推杆上
#8 x 1-1/4 英寸 #2 菲利普斯、润滑头木螺钉（100 包）	Home Depot	SD8X1.25-R	用于将陷阱标志固定到支柱上
2  英寸 x 2 英寸 x 8 英尺. 襯板条木材	Home Depot	75800593	活塞推杆
20 G  x 1.5 英寸 针	Kendall monoject	8881	用于为动物接种疫苗
3 毫升注射器	Kendall monoject	513934	用于为动物接种疫苗
48 盎司钢钻头锤	Home Depot	MRF3LB	用于将陷阱标志支柱插入地面
7-1/4 英寸 x 140 齿 OSB/胶合板圆锯片	Home Depot	A07140A	用于圆锯切割胶合板所需的刀片
铝制夹板 - 顶部开口，字母	ULINE	S-20173	用于记录和保存数据表
圆锯	Home Depot	CSB144LZK	用于切割木材制作活塞
冷敷 - 6 盎司	ULINE	S-9902	用于调节疫苗的温度
洗碗皂	ULINE	S-9975	用于清洁陷阱
Dupont Tyvek 防护服	ULINE	S-11495	用于保护人员免受臭鼬喷雾。尺寸取决于人员的大小。您也可以使用无头罩的防护服S-9636。
手持GPS 设备	Garmin	ETrex 32X	用于记录陷阱和捕获的动物的位置
6 英寸 x 7 英寸 手持镜	Walmart	Equate	用于判断动物性别
头灯	Home Depot	HDB32EH	在日出前检查陷阱
花生酱罐	Walmart	40 盎司罐	用于捕捉臭鼬的诱饵。
臭鼬生擒陷阱	Tomahawk	103	用于捕捉臭鼬
臭鼬和其他食肉动物生擒陷阱	Tomahawk	205; 602	用于捕捉臭鼬和其他食肉动物
丁腈手套	ULINE	S-14179	用于保护人员免受病原体。尺寸和使用粉末或无粉末将取决于人员选择。
ONE+ 18 V 无绳电钻/驱动器套件，配备 3/8 英寸 1.5 Ah 电池、充电器、手动工具、配件和工具包	Home Depot	PCL201K1SB	用于在支柱上组装标志
Paper Mate Profile 8 包 1.4 毫米粗尖黑色圆珠笔	Staples	2095460	用于在数据表上书写
狂犬病陷阱标志 9 英寸 x 12 英寸	FedEx Office	NA	附加到陷阱位置附近的支柱上
狂犬病疫苗	Boehringer Ingelheim	Imrab®	每只动物1 毫升； https://www.boehringer-ingelheim.com/animal-health/companion-animals-products/rabisin-imrab#:~:text=Rabisin%C2%AE%20%2F%20Imrab%C2%AE%20is,signs%20due%20to%20rabies%20infection.
狂犬病警告标志 4 英寸 x 6 英寸	FedEx Office	NA	附加到陷阱顶部
浣熊和狐狸耳标	National Band and Tag Company	1005-3	浣熊和狐狸的耳标
浣熊和狐狸耳标	National Band and Tag Company	1005s3	用于浣熊和狐狸的耳标钳
Refresh 6 包午餐冷藏箱	4imprint.com	155149	用于在现场携带疫苗
12 英尺 x 400 英尺 塑料薄膜卷	3M	6723	用于安抚动物和保护人员
安全护目镜或一次性面罩	ULINE	S-24607	用于保护人员面部免受臭鼬喷雾和病原体。
打磨胶合板（通用：1/2 英寸 x 2 英尺 x 4 英尺；实际：0.451 英寸 x 23.75 英寸 x 47.75 英寸）	Home Depot	300896	活塞底座
55 磅 x 0.5 盎司 秤	Brecknell	Model 816965007486	用于称量笼子和动物的重量
Sharpie 黑色细尖永久性马克笔 1 包	Ace Hardware	35010	用于标记三明治袋
针头容器 - 1 夸脱	ULINE	S-15307	用于存放使用过的注射器
臭鼬耳标	National Band and Tag Company	1005-1	臭鼬的耳标
臭鼬耳标施用器	National Band and Tag Company	1005s1	用于臭鼬的耳标钳
自来水	NA		用于清洁陷阱
陷阱线线	Minnesota Trap Line Products, INC	11GA-01	用于将标志固定到陷阱上的陷阱线 https://www