本文介绍了一种采用推拿疗法治疗大鼠背根神经节慢性受压的方法，并提供了一种基于疼痛行为和组织病理学结果评估其疗效的方案。
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本文内容
摘要
摘要
神经病理性疼痛是一种常见病症，影响着6.9%–10%的人群，由多种病因引起的神经损伤所致，例如腰椎间盘突出、椎管狭窄和椎间孔狭窄。尽管推拿作为中国传统手法治疗在临床实践中对治疗神经病理性疼痛显示出镇痛效果，但其潜在的神经生物学机制尚不明确。动物模型对于阐明推拿的基本原理至关重要。在本研究中，我们提出了一种针对背根神经节（DRG）受压大鼠的标准化推拿干预方案，该方案包括通过将不锈钢杆插入椎间孔以诱导DRG受压，在受控环境中按照特定的部位、强度和频率参数实施推拿操作，并评估推拿治疗的行为学和组织病理学结果。本文还讨论了该研究的潜在临床意义与局限性，并对未来推拿研究的方向提出了建议。
引言
在临床实践中，常可观察到由各种原因导致神经根受压而引起的神经系统病理性疼痛。这类神经病理性疼痛最典型的形式是腰椎间盘突出症（LDH），其病程常呈持续性、反复发作，且难以治愈。全球约有9%的人口受到LDH的影响，造成重大的社会和经济负担1。由于人类生产和生活方式的改变，此类神经病理性疼痛的发病率逐年上升，且呈现年轻化趋势2。尽管使用非甾体类镇痛药物，患者的症状仍无法完全缓解。因此，推拿等治疗LDH所致疼痛的替代疗法正受到越来越多的关注。
推拿疗法作为一种腰椎间盘突出症（LDH）的保守治疗方法，被全球多种临床实践指南广泛推荐用于预防和治疗下腰痛3,4。研究表明，推拿可显著降低LDH患者血清中白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等炎症因子水平，同时改善患者的疼痛症状及腰椎功能障碍5。然而，推拿疗法发挥镇痛作用的具体机制尚不明确。
动物模型是研究由腰椎间盘突出症（LDH）引起的神经病理性疼痛的重要工具6。它们可用于行为学评估，以评价推拿疗法的效果，并提供LDH病理生理学的样本。例如，可采集大腿部位背根神....
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方案
本研究在复旦大学神经生物学研究所疼痛实验室完成。所有手术操作和动物处理均经批准，并严格遵循国际疼痛研究协会（LASP）制定的实验动物保护指南。本研究采用清洁级Sprague-Dawley（SD）大鼠，共32只雄性，年龄40–50天，平均体重为220 ± 1.38 g。这些大鼠购自中国科学院上海生命科学研究院实验动物中心。动物饲养于具有独立通风系统的专用动物房内，环境温度控制在（22 ± 1）°C，相对湿度维持在40%–50%。大鼠在笼内可自由获取充足的食物和饮水。实验室动物房采用12小时光照-黑暗循环，以维持大鼠正常的昼夜节律，且由专人定期更换垫料。X射线检查在上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院放射科完成。
1. 研究参与者与分组
- 将32只大鼠随机分为四组：空白对照组（正常对照）、假手术组（sham）、CCD组（慢性背根神经节压迫）和CCD+推拿组（每组8只大鼠）。大鼠在动物饲养设施中自由进食和饮水。
注：空白对照组大鼠不进行任何干预；假手术组大鼠接受与CCD组相同的操作手术，但在L4和L5椎间孔处不植入"L"形不锈钢棒。CCD组大鼠建立完整的慢性背根神经节压迫模型。CCD+推拿组大鼠在CCD手术后第4天开始接受推拿治疗。
2. 建立动物模型
- 使用....
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结果
推拿治疗可帮助降低因CCD造模引起的大鼠机械性和热刺激阈值
经过17天的推拿治疗后，接受推拿治疗的CCD大鼠与未治疗的CCD组在PWT阈值上表现出显著差异（P = 0.021，<0.05）（图6 和 表1）。
接受推拿治疗的CCD组大鼠从治疗开始时痛阈即有所改善，造模后第14天起，CCD组与接受推拿治疗组之间的热痛阈差异具有显著性（P = 0.0047, 0.0056, 0.0049, < 0.01）（图7 和 表2）。
推拿治疗未能改善CCD模型引起的小细胞坏死
根据背根神经节的HE染色结果，接受“L”形不锈钢棒物理压迫处理的CCD组大鼠出现了细胞膜损伤和细胞凋亡（图8.......
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讨论
本研究团队早期已对推拿手法的参数进行了相关研究。首先，确定推拿手法的作用力强度至关重要。在临床推拿中， practitioners 根据经验及患者的主观感受调整力度，通过沟通达到最佳推拿效果。然而，在动物实验中这种方法不可行。在动物实验中，采用"反应阈值"来定义推拿手法的强度，即根据动物的本能反应判断所施加的推拿力是否合适。Randall17曾采用该方法研究大鼠炎症模型中的疼痛行为，不同之处在于，Randall 的操作部位为局部炎症区域，而本实验的操作部位为无损伤区域。强力度的推拿手法会使大鼠产生尖叫和逃避反射。该强力度的设定意味着正式实验所用的推拿力强度应小于此强力度。基于150只大鼠在5–25 N范围内最大尖叫和逃避反射压值的分布，其均值和标准差分别为9.93和3.018（图11），我们前期研究计算得出最佳按压力值为5 N。其次，《推拿学》中描述推拿手法的操作频率为120–160次/分钟18，因此本实验的推拿频率设定为2 Hz。
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披露
作者无任何利益冲突需要披露。
致谢
本工作得到上海市重要临床专科建设项目（项目编号：Shslczdzk04001）；上海市科学技术委员会扬帆计划（项目编号：22YF1444300）；上海中医药大学校内预算项目（项目编号：2021LK091）的资助。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| "L"型不锈钢棒（长4 mm，直径0.4 mm） | 自制 | / | 用于CCD模型制备 |
| ALMEMO 测量装置 | ahlborn | 2450-1 | 机械缩足反射阈值测试 |
| 恒温切片机 CM-1900 | Leica | 1491950C1US | 用于样本制备 |
| 消毒剂（碘）100 mL/瓶 | LIRCON/山东利康 | / | 用于消毒 |
| 一次性无菌注射器 5 mL | 上海米沙瓦医疗器械有限公司 | / | 用于注射 |
| 电子显微镜 CX-31 | Olympus，日本 | BJ002318 | 用于样本观察 |
| 指压力记录仪 | 苏州长欣光电科技有限公司 | CX1003w | 用于推拿手法操作 |
| 泡沫板（35 cm × 20 cm） | 自制 | / | 为本实验室自制固定大鼠装置 |
| MERSILK W2512 | Johnson & Johnson | / | 用于组织缝合 |
| 中性树胶 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10004160 | 用于样本制备 |
| 多聚甲醛 | 中国医药集团化学试剂有限公司 | / | 用于样本制备 |
| 戊巴比妥钠 | Sigma-Aldrich | P3761 | 用于大鼠麻醉 |
| 足底测试仪（Hargreaves法），适用于小鼠和大鼠 | IITC Life Science | / | 缩足反射潜伏期检测 |
| 实验用精密电子天平 JY3002 | 上海精密科学仪器有限公司 | / | 大鼠称重 |
| 大鼠毛发剪刀 | Philips | HP6341/00 | 用于剃除大鼠毛发 |
| 大鼠固定器 | 同济大学（自制） | / | 由同济大学自制的装置，可有效固定大鼠并充分暴露其后肢 |
| Tissue-Tek O.C.T. 包埋剂 | SAKURA | 4583 | 用于样本制备 |
| 乌拉坦 | 中国医药集团化学试剂有限公司 | / | 用于大鼠麻醉 |
| X射线探测器 XR-600 | 东莞凯硕电子科技有限公司 | / | 用于CCD模型检测 |
| 二甲苯 | 上海国药集团 | 100092 | 用于样本制备 |
参考文献
- Vos, T., et al. national incidence, prevalence, and years lived with disability for 328 diseases and injuries for 195 countries, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. The Lancet. 390 (10100), 1211-1259 (2017).
- Amin, R. M., Andrade, N. S., Neuman, B. J.
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