本文概述了建立具有口鼻瘘小鼠模型的逐步操作流程。通过使用加热的眼科烧灼器损伤硬腭中线部分，导致口腔与鼻腔之间形成开口，从而建立口鼻瘘。
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本文内容
摘要
摘要
本研究介绍了一种利用加热的眼科烧灼器建立口腔鼻腔瘘模型的有效方法。采用C57BL/6小鼠建立口腔鼻腔瘘（ONF）模型。为构建ONF，首先对小鼠进行麻醉和固定，并暴露其硬腭。在手术过程中，使用眼科烧灼器在硬腭中线处造成一个2.0 × 1.5 mm的全层黏膜损伤。为确保实验成功，关键在于控制ONF的大小并尽量减少出血。术后第7天通过解剖学和功能学评估验证ONF模型的有效性。鼻中隔在口腔内的出现，以及向口腔内注射无菌水后从鼻孔流出的现象，证实了ONF模型的成功建立。该模型表现出实用且稳定的口腔鼻腔瘘特征，具有较低的死亡率、显著的体重变化以及较小的ONF尺寸变异。未来的研究可考虑采用此方法，以阐明腭部伤口愈合的机制，并探索口腔鼻腔瘘的新型治疗方法。
引言
口鼻瘘（ONF）是口腔与鼻腔之间的异常开口，临床上表现为从牙槽突至悬雍垂之间解剖结构的缺损，常为腭裂修复术后的一种并发症1。ONF患者可出现食物反流、发音障碍及腭咽功能受损，显著影响其生活质量2,3,4。由于裂隙宽度、Veau分型及手术方法等因素的影响，术后ONF的发生率介于2.4%至55%之间5,6,7,8。此外，ONF修复术后的复发率也较高，范围为0%至43%9。
近年来，眶周骨折（ONF）领域出现了多种有前景的新疗法，包括不同的材料、药物以及新型技术10,11,12,13,<....
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方案
本研究中的所有动物实验均经四川大学华西口腔医学院伦理委员会审查并批准。本研究使用成年C57BL/6小鼠（雌性）。
1. 手术准备
- 准备手术所需器械：接种环、眼科烧灼器、显微外科剪、显微外科镊、注射器和针头（26 g × 0.63 英寸）（图 1A、B）（参见材料表）。
注意：手术前，将手术器械（包括眼科烧灼器、显微外科镊和显微外科剪）在 102.9 kPa（1.05 kg/cm2）和 121 °C 条件下高压灭菌 20 分钟。 - 准备所需的手术耗材：手术巾、乳胶手套、无菌棉、无菌敷料、无菌金属箔、作为手术平台的泡沫板、橡皮筋（可通过撕开医用乳胶手套获得）以及胶带（图 1C）（参见材料表）。
注意：每只小鼠应使用独立的一套耗材，包括用于手术区域的注射器和无菌敷料。 - 使用酒精擦拭清洁手术区域及设备（光源、泡沫板和温度维持装置，参见材料表）。用无菌金属箔覆盖手术过程中可能接触的仪器旋钮和手柄。
- 无菌条件下打开各器械包装，并小心放置于手术区域。启动接种环（参见....
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结果
为评估该实验方法的可行性和稳定性，对十只小鼠进行了相同的操作，并观察了死亡率、伤口大小变化、体重变化及组织学分析结果。小鼠于第7天被实施安乐死。
该手术的死亡率较低。眼科烧灼器和发生器（如图1A-C所示）是本实验使用的关键器械。视神经挫伤模型是根据所提供的方案建立的。在十只接受手术的小鼠中，仅有一只在术后第7天死亡。整个实验期间的总体死亡率约为10%。
结果表明，采用所述方法生成的ONF在尺寸上表现出显著差异。在手术当天，所有小鼠均呈现椭圆形伤口，长度为2.0 mm，宽度为1.5 mm。在术后第7天评估ONF形成情况时，观察到ONF尺寸存在显著差异（P = 0.0085）（图5A，B）。
ONF 的存在可能导致食物反流和进食困难等并发症.......
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讨论
研究人员已探索了多种材料、药物和新技术用于治疗ONF10,11,12,13,14,15,16,17。随着外科手术技术的进步，ONF的发生率和复发率已有所降低。然而，由于该疾病具有独特特性，临床上ONF患者数量有限，因此需要建立标准化模型以研究潜在治疗方法。尽管已有若干建立ONF模型的方法被报道18,19,20,
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披露
作者无任何利益冲突需要披露。
致谢
本研究工作得到了四川大学华西口腔医院研发项目（RD-02-202107）、四川省科技支撑计划项目（2022NSFSC0743）以及四川省博士后科学基金（TB2022005）对 H. Huang 的资助。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 发芽器 | Electron Microscopy Sciences | 66118-20 | 加热与消毒设备 |
| 乳胶手套 | Allmed | 或类似产品 | |
| 光源 | Olympus | A1813 | |
| 美洛昔康 | MedChemExpress | HY-B0261 | 研碎；5 mg/kg |
| 显微外科器械（剪刀和镊子） | 江苏同慧医疗器械有限公司 | M-Y-0087 | 外科器械 |
| 眼科烧灼器 | 宿迁文冲医疗器械有限公司 | 1.00234E+13 | 外科器械 |
| 无菌棉 | 盐城贝谷科技有限公司 | 或类似产品 | |
| 无菌金属箔 | Biosharp | 或类似产品 | |
| 无菌单 | 3M | XH003801129 | 或类似产品 |
| 手术铺巾 | 盐城贝谷科技有限公司 | 或类似产品 | |
| 注射器 | 盐城贝谷科技有限公司 | S-015301 | 或类似产品 |
| 胶带 | Bkmamlab | 或类似产品 | |
| 体温维持装置 | Harvard Apparatus | LE-13-2104 | |
| 赛拉嗪50 | Virbac | 80 mg/kg |
参考文献
- Alonso, V., et al. Three-layered repair with a collagen membrane and a mucosal rotational flap reinforced with fibrine for palatal fistula closure in children. International Journal of Pediatric Otorhinolaryngology. 127, 109679(2019).
- Garg, R., Shah, S., Uppal, S., Mittal, R. K.
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