慢性非特异性下腰痛大鼠模型的手法治疗

摘要

本研究提出了一种针对慢性腰背痛模型大鼠的推拿治疗标准化操作流程，可为今后推拿治疗的实验研究提供参考价值。

摘要

慢性下背痛（CLBP）是全球范围内高度流行的疾病，也是导致残疾的主要原因。大多数CLBP患者由于病因不明，被诊断为慢性非特异性下背痛（CNLBP）。手法治疗（MT）是传统中医的重要组成部分，在中国被称为推拿。其技术包括正骨和肌肉放松手法等。尽管手法治疗在治疗CNLBP方面具有临床疗效，但其作用机制尚不明确。在旨在研究这些机制的动物实验中，主要挑战之一是如何在CNLBP模型大鼠上实现规范化的手法治疗。提高手指力度的稳定性是手法治疗中的关键问题。为解决这一技术局限，本研究提出了一种针对CNLBP模型大鼠的手法治疗标准化操作流程。该流程显著提升了手法操作的稳定性，并缓解了手法治疗过程中固定大鼠时常见的问题。本研究的结果对未来开展手法治疗相关实验研究具有参考价值。

引言

慢性下背痛（CLBP）的特点是持续性下背痛，持续时间超过3个月，通常位于肋骨下缘与髋部横线之间，可伴有或不伴有下肢疼痛^1,2。该病患病率极高，全球年患病率估计为38%，终生患病率为39%，是常见的公共卫生问题^3,4。大多数CLBP患者（超过90-95%）无法获得明确的病理学和解剖学诊断（如肿瘤、骨折或感染），因此被归类为慢性非特异性下背痛（CNLBP）^5,6。由于其病理机制的非特异性，西医主要采用阿片类镇痛药和非甾体抗炎药（NSAIDs）进行治疗，但存在安全性方面的担忧^7,8。因此，对安全且有效的补充和替代疗法的需求日益增加。

手法治疗（MT）在中国通常被称为推拿，是中医（TCM）的重要组成部分，包括正骨和肌肉放松操作等技术。其在中国的广泛应用归因于临床疗效显著、安全性高且具有非侵入性⁹。在慢性非特异性腰痛（CNLBP）的治疗中，推拿已被证实是一种有效的补充和替代医....

方案

本实验方案经浙江中医药大学动物护理与使用委员会批准，所有操作均遵循美国国立卫生研究院《实验动物护理与使用指南》。研究采用成年雄性SD大鼠（见材料表），体重范围为330 g至350 g。所有大鼠均饲养于标准动物设施中，光照-黑暗周期为12小时，温度为24 ± 2 °C，湿度为50 ± 5%。大鼠可自由获取食物和饮水。以下方案详细描述了慢性非特异性下背痛（CNLBP）模型的建立及手法治疗操作步骤。

1. 按照以下步骤建立腰痛模型（图1）

1. 喂养大鼠至体重达330–350 g，称重后经腹腔注射3%戊巴比妥钠（1 mL/kg）进行麻醉（参见材料表）。等待2分钟后，用镊子轻轻夹捏后肢的四个脚趾，并用镊子触碰大鼠角膜，检查是否无回缩或眨眼反应，以确认麻醉成功。
   注意：所有用于大鼠造模的手术器械应提前进行高压灭菌，对剃毛器、外固定系统（ELFS）设备和恒温台等不可高压灭菌的器械则需用酒精消毒。操作者应穿戴洁净实验服、一次性无菌手套、口罩、手术帽和面罩。
2. 向大鼠眼部涂抹适量兽用眼膏，以防止麻醉后长时间无法闭眼导致角膜干燥。
3. 将大鼠置于恒温台上呈胸卧位，定位其L4–6节段，剃除该节段毛发，并用碘伏消毒3次，随后铺放一次性手术洞....

结果

本研究旨在探讨MT对慢性非特异性下背痛（CNLBP）模型大鼠的镇痛作用。为此，将24只大鼠随机分为四组，分别为空白组、假手术组、模型组和MT组，每组6只大鼠。空白组不接受任何干预；假手术组仅接受手术操作，即分离并缝合L4-6棘突两侧的腰背部肌肉，术后不进行其他干预。模型组按照既定方法建立CNLBP模型，建模成功后不给予任何干预。MT组在成功建模后，接受为期2周的MT治疗。所有大鼠均单独饲养于笼中，并配有塑料球玩具。在建模后第15、17、21、24和28天，对各组大鼠进行足缩回阈值（PWT）和足缩回潜伏期（PWL）的检测（图4）。数据以均值±标准差表示，并进行统计学分析。多组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA），两组间比较在方差齐时采用LSD检验，方差不齐时采用Dunnett T3检验。以p < 0.05为差异具有统计学意义。图5展示了各组大鼠PWT和PWL的变化情况。各组大鼠的PWT和PWL基线值相近。在建模结束后第15至28天期间，空白组与假手术组大鼠的PWT和PWL未见显著波动。然而，模型组.......

讨论

目前，尚无一种能够准确模拟慢性非特异性下背痛（CNLBP）的动物模型达成共识。已有的多种CNLBP动物模型包括椎间盘源性、神经源性、骨关节源性和肌肉源性模型²³。然而，由于临床上CNLBP具有高度异质性，这些模型均存在局限性。本研究中所采用的CNLBP模型是在Henderson的"external link"模型²⁴基础上改进而来的，该模型属于骨关节源性CNLBP模型。既往研究中，X线显示腰椎长期固定会导致固定节段椎体关节出现骨赘形成，即椎体与关节的轻微错位²⁵。根据中医理论，维持腰部软组织结构（筋）与骨性结构（骨）之间的生物力学平衡，对腰部健康至关重要。椎体与关节的轻微错位可导致腰部“骨”生物力学失衡，若未及时纠正，可能进一步引发“筋-骨”生物力学失衡，最终发展为CNLBP。传统骨关节源性CNLBP模型通常通过注射诱发骨关节炎相关炎症的化学物质来建立^26,27。.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
自动脱水机	Thermo Fisher Scientific Co.,Ltd	Excelsior AS
自动染色机	Thermo Fisher Scientific Co.,Ltd	Gemini AS
恒温台	Harvard Bioscience (Shanghai) Co.,Ltd	50-1247	加热式小型动物手术台，通常在 37 °C–38 °C 下运行
数字切片扫描仪	HAMAMATSU Co.,Ltd	C13210-01
外部固定系统	Shanghai Naturethink life science & Technology CO., Ltd	定制
包埋盒	Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd	31050102W
Hargreaves 仪器	UGO BASILE Co.,Ltd	37370
中性树脂	ZSGB-BIO Co.,Ltd	ZLI-9555
多聚甲醛	Macklin Co.,Ltd	P804536
青霉素	杭州正博生物科技有限公司	ZSQ-100-160A
塑料球状玩具	上海华科工业有限公司	HK11029-35503
SD 大鼠	上海斯莱克实验动物有限责任公司	SCXK (沪) 2022-0004	雄性，330–350 g
戊巴比妥钠	杭州大成生物技术有限公司	P3761
Von Frey 纤维丝	Stoelting Co., Ltd.	NC12775
电子天平台	上海立晨邦西仪器科技有限公司	YP20002B